Вопрос 49

Принципы приготовления, контроля и применения гипериммунных сывороток и γ - глобулинов при вирусных заболеваниях.

Гипериммунные или специфические сыворотки, предназначенные для решения указанных задач, представляют собой сыворотки крови животных, систематически иммунизированных бактериальными и вирусными антигенами. Гипериммунные сыворотки содержат антитела, обладающие строго специфическими действиями на бактериальные токсины, патогенные бактерии или вирусы, против которых иммунизировали животных.

На получение высокоактивных лечебно-профилактических и диагностических сывороток влияют: — качество применяемых антигенов, в частности их чистота, объем и концентрация; — неспецифические раздражители и адъюванты; — индивидуальные особенности животных-продуцентов, в частности их способность к иммунобиологической перестройке при создании у них грундиммунитета, для чего необходим тщательный отбор животных-продуцентов; — метод и схемы гипериммунизации; — содержание и кормление животных в период их подготовки к эксплуатации.

Антиген. Существует прямая связь между качеством антигена, силой антигенного раздражения и уровнем накопления специфических антител в крови животных. Особенно это положение выражено при получении противовирусных сывороточных препаратов. Для приготовления антигенов должны использоваться штаммы микроорганизмов, обладающие хорошо выраженными антигенными и иммуногенными свойствами. Качество антигенов во многом зависит от их чистоты. Под чистотой понимается неконтаминированность их посторонней микрофлорой, в том числе агентами вирусной природы, а также степень очистки антигенов от балластных белков. К качеству антигена также относится состояние суспензии микробных клеток, ее объем и концентрация.

Адъюванты. При изготовлении гипериммунных сывороток применяют антигены, специфическое действие которых усилено адъювантными веществами, в качестве которых используют гель гидроокиси алюминия, алюмокалиевые квасцы и другие (см. выше). При этом большое значение имеет качество адъювантов. Под качеством адъювантов понимают их чистоту по отношению к содержанию побочных химических соединений, качество и стойкость образования геля, полноту адсорбции антигенов и т. д.

В практике производства антитоксических сывороток широко используется хлористый кальций, алюмокалиевые квасцы, реже адъюванты типа Фрейда, тапиока. При изготовлении большинства противовирусных гипериммунных сывороток используют антигены без адъювантов, так как такие антигены готовятся из вирусосодержащих суспензий, из тканей куриных эмбрионов, лабораторных животных или клеточных культур. Отбор животных-продуцентов, грундирование животных, применяемых для получения сывороток, завозят из стационарно благополучных по заразным заболеваниям районов. При этом они должны быть клинически здоровыми, средней и выше средней упитанности, свободными от накожных паразитов. Всех завезенных животных выдерживают в карантине 45 суток. За это время их всесторонне обследуют с ежедневным (утром и вечером) двукратным измерением температуры тела и проверяют на пораженность гельминтами и при необходимости дегельминтизируют.

Лошадей исследуют на сап, трихомоноз, бруцеллез, туберкулез, пироплазмидозы и инфекционную анемию; крупный рогатый скот — на туберкулез, бруцеллез, лептоспироз; свиней — на туберкулез, бруцеллез; овец — на бруцеллез, туберкулез, паратуберкулез и другие инфекционные заболевания согласно требованиям нормативно-технической документации.

При отборе животных-продуцентов надо учитывать их физиологические и иммуннобиологические показатели. При использовании лошадей для получения некоторых гипериммунных сывороток, нормальной сыворотки, сыворотки жеребых кобыл (СЖК) и желудочного сока чаще используют помеси донской и казахской пород в возрасте от 3 до 12 лет. От одного донора массой 450—500 кг за год в среднем получают около 360 л желудочного сока и 4000 овцедоз СЖК. Для получения лечебно-профилактических сывороток против пастереллеза, сибирской язвы, рожи, анаэробных и других инфекций используют волов красностепной, калмыцкой, симментальской, швицкой, астраханской и других пород в возрасте от 3 до 8 лет и массой не менее 350 кг. При получении противорожистой сыворотки используют лошадей, волов, а также свиней крупной белой породы в возрасте 5—6 месяцев и массой не менее 80 кг. Овец, баранов и валухов в возрасте 2—3 лет и массой 30—45 кг используют для получения некоторых диагностических (например, листериозных) и нормальных (например, для приготовления сывороточных сред с целью культивирования лептоспир) сывороток. Принято считать, что успех гипериммунизации в значительной степени зависит от породы и возраста животных. Более высокие титры антител получают при использовании для иммунизации породистых животных в возрасте от 3 до 10 лет. Пол животных не имеет существенного значения. Учитывая, что введение антигенов и периодическое кровопускание приводят к нарушению обмена веществ и анемии, а в ряде случаев и к снижению титров антител, первостепенное внимание нужно уделять вопросам полноценного, сбалансированного кормления животных-продуцентов гипериммунных сывороток. Кормление животных-продуцентов отличается от кормления животных вообще, что связано с особой, вышеозначенной и очень большой физиологической нагрузкой на их организм. Кормление животных — доноров крови и желудочного сока на биопредприятиях осуществляется в соответствии с утвержденными рационами Вопрос 50

Понятие о сыворотках реконвалесцентов, их получение и значение, применение.

Сыворотка реконвалесцентов. Эта сыворотка крови переболевших животных, содержащая специфические антитела, применяется с лечебной и профилактической целями.

Кровь берут от животных не ранее 12 и не позднее 20 дней с момента обнаружения у них клинических признаков ящура и при отсутствии осложнений на вымени, копытах, сердце.

Кровь берут от животных не ниже средней упитанности и при удовлетворительном состоянии здоровья. Кровь берут из яремной вены в количестве 3–5 л от каждого животного (с учетом индивидуальных особенностей организма животного).

Место введения иглы выстригают или выбривают, моют с мылом и дезинфицируют настойкой йода.

Кровь берут в стерильные цилиндры или бутыли с соблюдением всех правил асептики в помещении, хорошо вымытом, побеленном и тщательно дезинфицированном. Монтаж и стерилизацию посуды проводят заранее.

Перед стерилизацией в цилиндр или в бутыль наливают 50 см3 физиологического раствора на 1 л крови, после этого отверстие цилиндров или бутылей закрывают двойным слоем бумаги, каждый из них перевязывают шпагатом. Перед введением иглы в яремную вену верхний слой бумаги приподнимают, а нижний прокалывают стеклянным наконечником резинового шланга. В момент взятия крови верхним слоем бумаги прикрывают нижний слои бумаги со стеклянным наконечником, предотвращая возможность попадания воздушной микрофлоры. По окончании крововзятия и изъятия наконечника из цилиндра верхний слой бумаги плотно накладывают на нижний и перевязывают шпагатом.

Кровопускательную иглу монтируют следующим образом: на нее надевают резиновый шланг длиной около 1 м, оканчивающийся стеклянным наконечником. Лучше для кровопускания брать иглу с отверстием не менее 0,3 см в диаметре. Резиновый шланг с иглой и стеклянной трубкой обертывают бумагой, перевязывают в нескольких местах шпагатом и подвергают в таком виде стерилизации.

Перед наполнением цилиндра или бутыли кровью стенки должны быть увлажнены находящимся в них физраствором. Во избежание образования пены кровь спускают по стенкам сосуда.

Взятую кровь ставят для лучшего свертывания в теплое помещение при температуре 25° на 5–6 часов. Через 6 часов сгусток крови обводится фламбированной стеклянной палочкой или металлическим зондом. Затем цилиндры с кровью помещают на двое суток в прохладное место.

После отстоя сыворотку от нескольких животных сливают в общую, заранее стерилизованную и вымеренную бутыль. Сыворотку (серии) сливают через стерильный сифон или стерильную воронку с соблюдением правил получения стерильной сыворотки.

Комнату, в которой сливают сыворотку, чисто убирают и увлажняют дезраствором.

После слива консервируют сыворотку следующим образом:

1. заранее готовят стерильный 5%-ный раствор кристаллической карболовой кислоты на физрастворе;

2. на каждые 900 см3 сыворотки добавляют 100 см3 3%-ного раствора карболовой кислоты (из расчета ее содержания в сыворотке в количестве 0,5%'e Консервирующую жидкость вливают постепенно в бутыль, осторожно встряхивая ее, по окончании карболизации производят более тщательное перемешивание (со взбалтыванием) сыворотки с консервирующей жидкостью.

Консервированную сыворотку расфасовывают в стерильные флаконы емкостью 100–250 см3 через сифон с соблюдением правил стерильности. На флаконы с сывороткой наклеивают этикетки с обозначением на них наименования биопрепарата, времени изготовления, номера серии, кем изготовлена сыворотка, количества ее и дозировки для применения.

Флаконы стерилизуют с временными ватными пробками, а постоянные пробки, завернутые отдельно в бумагу, привязывают к горлышку соответствующего флакона и в таком виде стерилизуют.

Перед укупоркой, в момент расфасовки сыворотки, пробку и горлышко флакона фламбируют над пламенем. Укупоренные флаконы заливают мастикой или сургучом.

Сыворотку хранят в темном, сухом, прохладном месте при температуре не выше 15°. Она может быть использована в течение 6 месяцев с момента изготовления. Флаконы с наличием в сыворотке не разбивающегося осадка, плесени и прочих загрязнений, с гнилостным запахом выбраковывают.

Сыворотка пригодна для практического применения при условии ее безвредности. Последняя проверяется путем введения сыворотки двум морским свинкам (подкожно) в дозе 5 см3 и двум белым мышам в дозе 0,5 см3. Срок наблюдения за подопытными животными не менее 5 суток. Сыворотку считают безвредной, если в означенный срок все привитые животные останутся здоровыми, а на месте введения сыворотки не будет обнаружено никаких патологических изменений.

При отсутствии мышей и свинок безвредность сыворотки проверяют на 2– 3 телятах путем введения под кожу 50 см3 сыворотки. Если в течение трех суток па месте инъекции не будет обнаружено никаких патологических изменений, сыворотка выпускается для массового применения.

Способ применения сыворотки

Сыворотку реконвалесцентов применяют с профилактической целью в неблагополучных по ящуру хозяйствах телятам, ягнятам и поросятам, а также взрослому племенному скоту.

Сыворотка реконвалесцентов создает у животных лишь пассивный иммунитет длительностью до 8–12 дней.

Сыворотку вводят под кожу в области шеи в дозах: телятам 1–1,5 см3 . на 1 кг веса животного, поросятам и ягнятам 1,5–2,0 см3 на 1 кг веса животного.

Одновременно с прививками в хозяйстве проводят тщательную механическую очистку и дезинфекцию помещений, загонов, предметов ухода.

О каждом применении сыворотки реконвалесцентов и ее результатах составляют акт.