- •Вирусология. Этапы развития и связь с другими науками.
- •2. Природа и происхождение вирусов, уникальные черты, отличающие вирусы от других инфекционных агентов.
- •3.Место и роль вирусов в биосфере, сходство с другими формами жизни, роль в патологии животных и человека.
- •5. Химический состав вирионов вирусов.
- •6. Структура вирионов (нуклеоид, нуклеокапсид, капсид, капсомеры, суперкапсид, Моболочка). Типы симметрии вирусных частиц, простые и сложные вирионы.
- •7. Нуклеиновые кислоты вирусов, их строение и функции, отличие от клеточных. Типы вирусных геномов.
- •8. Вирусные белки, их виды, свойства и функции, отличие от клеточных.
- •9. Основные принципы систематики и номенклатуры вирусов.
- •10. Краткая характеристика семейств безоболочечных днк-содержащих вирусов.
- •11.Краткая характеристика семейств оболочечных днк-содержащих вирусов.
- •12.Краткая характеристика семейств безоболочечных рнк-содержащих вирусов.
- •13.Краткая характеристика семейств оболочечных рнк-содержащих вирусов с позитивным геномом.
- •14.Краткая характеристика семейств оболочечных рнк-содержащих вирусов с негативным геномом.
- •15.Стадии репродукции вирусов: адсорбция, проникновение, депротеинизация.
- •1. Начало инфекции (эклипс-фаза, теневая фаза)
- •16.Стадии репродукции вирусов: экспрессия вирусного генома (транскрипция, трансляция вирусных белков, репликация генома).
- •2. Экспрессия вирусного генома
- •17.Стадии репродукции вирусов: сборка вирионов и выход их из клетки.
- •18.Культивирование вирусов в организме естественно восприимчивых и лабораторных животных.
- •19.Культивирование вирусов на куриных эмбрионах.
- •20.Культивирование вирусов на культурах клеток и тканей, преимущества клеточных культур перед лабораторными животными и куриными эмбрионами, значение в вирусологии.
- •21.Виды культур клеток: органные, первично-трипсинизированные, диплоидные и перевиваемые; их свойства, особенности, области применения.
- •22.Действие на вирусы физических и химических факторов (температура, ультрафиолетовое облучение, кислоты, щелочи, жирорастворители, антибиотики). Методы уничтожения и консервации вирусов.
- •23.Пути и формы циркуляции вирусов в природе, сохранение популяции вирусов в межэпизоотический период.
- •24.Влияние антропогенных факторов на циркуляцию вирусов (загрязнение окружающей среды, использование вакцин, химиопрепаратов, пестицидов, концентрация животных и др.).
- •25.Генотип и фенотип вирусов. Наследственность, изменчивость, эволюция вирусов, генофонд вирусной популяции.
- •26.Генетические и негенетические взаимодействия вирусов.
- •27.Спонтанные и индуцированные мутации вирусов. Методы селекции и клонирования вирусов, отбор мутантов и их использование в профилактике вирусных болезней.
- •28. Классификация вирусных инфекций на уровне клетки. Цитопатология зараженной клетки.
- •29. Тропизм вирусов, проникновение в организм и распределение в нем. Классификация вирусных инфекций на уровне организма.
- •30. Клеточные и гуморальные факторы противовирусного иммунитета, их формирование, взаимодействие, значение для организма.
- •31. Иммунный ответ хозяина на вирусную инфекцию, особенности противовирусного иммунитета. Типы вирусных антигенов.
- •32. Иммунопатология вирусных инфекций, способы "ускользания" вирусов от иммунной защиты организма.
- •33.Интерферон: виды, свойства, индукторы. Применение интерферона и его индукторов в лечении вирусных заболеваний.
- •34.Специфическая профилактика вирусных болезней животных. Типы вирусных вакцин, их достоинства, недостатки, контроль вакцинных препаратов.
- •35.Химиотерапия вирусных болезней животных. Основные группы химиотерапевтических веществ.
- •36.Общая схема лабораторной диагностики вирусных инфекций: экспресс-методы, выделение вируса из патологического материала, идентификация вируса и доказательство его этиологической роли.
- •1. Устройство вирусологической лаборатории.
- •2. Правила работы с вируссодержащим материалом.
- •3. Учет, хранение и этикетирование вирусного сырья в лаборатории
- •4. Виды патологического материала и общие принципы его отбора.
- •5. Упаковка, транспортировка, хранение и консервирование вируссодержащего материала.
- •6. Подготовка вируссодержащего материала для исследования.
- •7.Вирусоскопия как метод диагностики вирусных инфекций. Световая, электронная, иммуноэлектронная микроскопия.
- •8. Устройство и принцип работы электронного микроскопа, приготовление препаратов для электронной микроскопии.
- •9. Тельца-включения при вирусных заболеваниях: морфология, состав, расположение в клетке, диагностическое значение.
- •10.Цели использования в вирусологии лабораторных животных, их виды, требования к ним, животные-гнотобиоты, спф-животные. Латентные инфекции лабораторных животных.
- •11.Методы экспериментального заражения лабораторных животных, признаки размножения вируса в их организме, "слепые пассажи".
- •12. Порядок и основные принципы вскрытия лабораторных животных, отбор патматериала.
- •13. Цели использования в вирусологии кэ, их строение и требования, предъявляемые к ним.
- •14.Методы экспериментального заражения куриных эмбрионов.
- •15.Культивирование зараженных кэ и признаки размножения вирусов в них.
- •16.Порядок вскрытия куриных эмбрионов и отбор вируссодержащего материала.
- •17. Способы и техника культивирования эукариотических клеток вне организма (монослойный, роллерный, суспензионный, на микроносителях), преимущества и недостатки каждого метода.
- •18. Питательные среды и растворы для культивирования эукариотических клеток.
- •19.Хранение, консервирование и транспортировка кк. Проблема контаминации клеточных культур и ее решение.
- •20. Культивирование вирусов в кк: подбор культуры, заражение, культивирование зараженных культур.
- •21. Методы индикации вирусов в культуре клеток.
- •22. Получение первично-трипсинизированной культуры клеток.
- •23. Титр вируса, единицы измерения, титрование вируса в инфекционных единицах локальных повреждений.
- •24. Титр вируса, единицы измерения, титрование вируса в инфекционных единицах 50%-ного действия на чувствительные объекты.
- •25. Титр вируса, единицы измерения, титрование вируса по гемагглютинирующей активно-
- •26. Ртга (задержки): принцип реакции, компоненты, контроли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.
- •27. Рнга (пассивной): принцип реакции, компоненты, контро-ли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.
- •28. Рн: принцип реакции, компоненты, контроли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.
- •29. Рдп: принцип реакции, компоненты, контроли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.
- •30. Метод флюорохромирования, принцип метода, приготовление препаратов, диагностическая ценность. Люминесцентная микроскопия, устройство и принцип работы люминесцентного микроскопа.
- •31. Метод флюоресцирующих антител (мфа): принцип реакции, компоненты, контроли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.
- •32. Иммунопероксидазная (гистохимическая) реакция: принцип, компоненты, контроли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.
- •33. Твердофазный иммуноферментный анализ: принцип реакции, компоненты, контроли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.
- •34. Реакция связывания комплемента: принцип реакции, компоненты, контроли, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.
- •35. Метод днк-зондов: принцип метода, получение днк-зондов, постановка реакции, цели применения, достоинства и недостатки метода.
- •36. Полимеразная цепная реакция (пцр): принцип метода, компоненты, постановка реакции, цели применения, достоинства и недостатки метода.
- •Вирус бешенства.
- •2. Вирус ящура.
- •3. Вирус оспы.
- •4. Вирус болезни Ауески.
- •5. Вирусы гриппа.
- •6. Возбудители губкообразной энцефалопатии.
- •7. Вирус чумы жвачных.
- •8. Вирус ирт крс. Инфекционного ринотрахеита
- •9. Вирус парагриппа-3 крс.
- •10.Респираторно-синцитиальный вирус крс.
- •11.Возбудитель вирусной диареи крс.
- •12.Возбудитель аденовирусной инфекции крс.
- •13.Вирус лейкоза крс.
- •14.Вирус катаральной лихорадки овец.
- •15.Вирус контагиозной эктимы овец.
- •16.Вирус ачс. Африканской чумы свиней
- •17. Вирус кчс. Вирус классической чумы свиней
- •18. Вирус болезни Тешена.
- •19. Вирус трансмиссивного гастроэнтерита свиней.
- •20.Вирус респираторно-репродуктивного синдрома свиней.
- •21.Вирус ачл. Африканской чумы лошадей
- •22. Вирус инан. Инфекционной анемии лошадей
- •23. Вирус ньюкаслской болезни.
- •24. Вирус инфекционного ларинготрахеита птиц.
- •25.Вирус болезни Марека.
- •26.Вирус инфекционного бронхита кур.
- •27.Вирус инфекционного бурсита кур.
- •28.Аденовирусная инфекция птиц.
- •29.Вирусы лейкоза птиц.
- •30.Вирус чумы плотоядных.
- •31.Вирус алеутской болезни норок.
- •32.Вирус инфекционного гепатита собак. Болезнь рубарта
- •33.Вирус панлейкопении кошек.
- •34.Вирус инфекционного перитонита кошек.
- •35.Вирус миксоматоза кроликов.
- •36.Вирус геморрагической болезни кроликов.
18. Питательные среды и растворы для культивирования эукариотических клеток.
Растворы. Наиболее широко используют при работе с культурами растворы Хенкса и Эрла, которые готовят на бидистиллированной воде с добавлением различных солей и глюкозы.
Растворы Хенкса и Эрла – это сбалансированные солевые растворы, которые используют для приготовления питательных сред, т.к. они обеспечивают сохранение рН, осмотическое давление и соответствующую концентрацию необходимых неорганических веществ. Их применяют при различных манипуляциях с культурами (отмывание от ростовых сред, разведение вируса и т. д.).
При культивировании клеток применяют диспергирующие растворы трипсина и версена. Раствор трипсина (0,25 %-ный на фосфатном буфере) используют для разделения кусочков тканей на отдельные клетки и для снятия слоя клеток со стекла.
Раствор версена натриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты (0,02 %ный на растворе Хенкса) используют для снятия клеток со стекла. Все растворы стерилизуют при соответствующих режимах.
Питательные среды различают:
Естественные среды состоят из смеси солевого раствора (Хенкса, Эрла), сыворотки крови (животных или человека), тканевого (эмбрионального) экстракта (эмбрионов кур, коров, человека), коровьей амниотической жидкости и т. д. Количество каждого компонента в разных примесях сред значительно варьирует. Используют эти среды редко.
В настоящее время применяют в основном искусственные питательные среды. К ним относят ферментативные гидролизаты различных белковых продуктов: гидролизат лактальбумина, мышечный ферментативный гидролизат, ферментативноказеиновый дрожжевой гидролизат, гемогидролизат, аминопептид и др. Наиболее широко в вирусологии используют 5 % гидролизат лактальбумина, 5 % и 2,5 % гемогидролизат.
Для уничтожения микрофлоры перед использованием в среды добавляют антибиотики: пенициллин и стрептомицин по 100 ЕД/мл. Для подавления плесени используют натриевую соль нистатина по 100 мкг на 1 мл среды.
Все питательные среды принято делить на две группы:
ростовые обеспечивают жизнь и размножение клеток. Содержат 2-10
% сыворотки крови, применяются в первые дни культивирования клеток;
поддерживающие – обеспечивают жизнедеятельность клеток, но не их размножение. Они не содержат сыворотки крови, используются после заражения КК вирусами.
Сыворотка крови крупного рогатого скота обязательный компонент ростовых питательных сред. В ее состав входит ряд БАВ, необходимых для роста клеток in vitro. Содержащиеся в сыворотке активная фракция альбуминов и фетуин способствуют прикреплению клеток к поверхности стекла. Сыворотка представляет собой чрезвычайно сложную смесь мелких и крупных молекул, способных как вызывать, так и тормозить рост клеток. К главным функциям сыворотки относятся: обеспечение гормональными факторами, стимулирующими рост клеток и их функции; обеспечение факторами прикрепления и распластывания клеток; обеспечение транспортными белками, переносящими гормоны, минеральные вещества, липиды и т.д. Белки сыворотки, прямо и специфически участвующие в стимуляции клеточного деления, называются факторы роста. Применяют сыворотки коров или сыворотки телят. Самая лучшая сыворотка для культур клеток сыворотка эмбрионов коров. При получении сыворотки следует соблюдать строгую стерильность. Каждая серия сыворотки проходит контроль на стерильность и токсические свойства по отношению к культурам.