- •Вирусология. Этапы развития и связь с другими науками.
- •2. Природа и происхождение вирусов, уникальные черты, отличающие вирусы от других инфекционных агентов.
- •3.Место и роль вирусов в биосфере, сходство с другими формами жизни, роль в патологии животных и человека.
- •5. Химический состав вирионов вирусов.
- •6. Структура вирионов (нуклеоид, нуклеокапсид, капсид, капсомеры, суперкапсид, Моболочка). Типы симметрии вирусных частиц, простые и сложные вирионы.
- •7. Нуклеиновые кислоты вирусов, их строение и функции, отличие от клеточных. Типы вирусных геномов.
- •8. Вирусные белки, их виды, свойства и функции, отличие от клеточных.
- •9. Основные принципы систематики и номенклатуры вирусов.
- •10. Краткая характеристика семейств безоболочечных днк-содержащих вирусов.
- •11.Краткая характеристика семейств оболочечных днк-содержащих вирусов.
- •12.Краткая характеристика семейств безоболочечных рнк-содержащих вирусов.
- •13.Краткая характеристика семейств оболочечных рнк-содержащих вирусов с позитивным геномом.
- •14.Краткая характеристика семейств оболочечных рнк-содержащих вирусов с негативным геномом.
- •15.Стадии репродукции вирусов: адсорбция, проникновение, депротеинизация.
- •1. Начало инфекции (эклипс-фаза, теневая фаза)
- •16.Стадии репродукции вирусов: экспрессия вирусного генома (транскрипция, трансляция вирусных белков, репликация генома).
- •2. Экспрессия вирусного генома
- •17.Стадии репродукции вирусов: сборка вирионов и выход их из клетки.
- •18.Культивирование вирусов в организме естественно восприимчивых и лабораторных животных.
- •19.Культивирование вирусов на куриных эмбрионах.
- •20.Культивирование вирусов на культурах клеток и тканей, преимущества клеточных культур перед лабораторными животными и куриными эмбрионами, значение в вирусологии.
- •21.Виды культур клеток: органные, первично-трипсинизированные, диплоидные и перевиваемые; их свойства, особенности, области применения.
- •22.Действие на вирусы физических и химических факторов (температура, ультрафиолетовое облучение, кислоты, щелочи, жирорастворители, антибиотики). Методы уничтожения и консервации вирусов.
- •23.Пути и формы циркуляции вирусов в природе, сохранение популяции вирусов в межэпизоотический период.
- •24.Влияние антропогенных факторов на циркуляцию вирусов (загрязнение окружающей среды, использование вакцин, химиопрепаратов, пестицидов, концентрация животных и др.).
- •25.Генотип и фенотип вирусов. Наследственность, изменчивость, эволюция вирусов, генофонд вирусной популяции.
- •26.Генетические и негенетические взаимодействия вирусов.
- •27.Спонтанные и индуцированные мутации вирусов. Методы селекции и клонирования вирусов, отбор мутантов и их использование в профилактике вирусных болезней.
- •28. Классификация вирусных инфекций на уровне клетки. Цитопатология зараженной клетки.
- •29. Тропизм вирусов, проникновение в организм и распределение в нем. Классификация вирусных инфекций на уровне организма.
- •30. Клеточные и гуморальные факторы противовирусного иммунитета, их формирование, взаимодействие, значение для организма.
- •31. Иммунный ответ хозяина на вирусную инфекцию, особенности противовирусного иммунитета. Типы вирусных антигенов.
- •32. Иммунопатология вирусных инфекций, способы "ускользания" вирусов от иммунной защиты организма.
- •33.Интерферон: виды, свойства, индукторы. Применение интерферона и его индукторов в лечении вирусных заболеваний.
- •34.Специфическая профилактика вирусных болезней животных. Типы вирусных вакцин, их достоинства, недостатки, контроль вакцинных препаратов.
- •35.Химиотерапия вирусных болезней животных. Основные группы химиотерапевтических веществ.
- •36.Общая схема лабораторной диагностики вирусных инфекций: экспресс-методы, выделение вируса из патологического материала, идентификация вируса и доказательство его этиологической роли.
- •1. Устройство вирусологической лаборатории.
- •2. Правила работы с вируссодержащим материалом.
- •3. Учет, хранение и этикетирование вирусного сырья в лаборатории
- •4. Виды патологического материала и общие принципы его отбора.
- •5. Упаковка, транспортировка, хранение и консервирование вируссодержащего материала.
- •6. Подготовка вируссодержащего материала для исследования.
- •7.Вирусоскопия как метод диагностики вирусных инфекций. Световая, электронная, иммуноэлектронная микроскопия.
- •8. Устройство и принцип работы электронного микроскопа, приготовление препаратов для электронной микроскопии.
- •9. Тельца-включения при вирусных заболеваниях: морфология, состав, расположение в клетке, диагностическое значение.
- •10.Цели использования в вирусологии лабораторных животных, их виды, требования к ним, животные-гнотобиоты, спф-животные. Латентные инфекции лабораторных животных.
- •11.Методы экспериментального заражения лабораторных животных, признаки размножения вируса в их организме, "слепые пассажи".
- •12. Порядок и основные принципы вскрытия лабораторных животных, отбор патматериала.
- •13. Цели использования в вирусологии кэ, их строение и требования, предъявляемые к ним.
- •14.Методы экспериментального заражения куриных эмбрионов.
- •15.Культивирование зараженных кэ и признаки размножения вирусов в них.
- •16.Порядок вскрытия куриных эмбрионов и отбор вируссодержащего материала.
- •17. Способы и техника культивирования эукариотических клеток вне организма (монослойный, роллерный, суспензионный, на микроносителях), преимущества и недостатки каждого метода.
- •18. Питательные среды и растворы для культивирования эукариотических клеток.
- •19.Хранение, консервирование и транспортировка кк. Проблема контаминации клеточных культур и ее решение.
- •20. Культивирование вирусов в кк: подбор культуры, заражение, культивирование зараженных культур.
- •21. Методы индикации вирусов в культуре клеток.
- •22. Получение первично-трипсинизированной культуры клеток.
- •23. Титр вируса, единицы измерения, титрование вируса в инфекционных единицах локальных повреждений.
- •24. Титр вируса, единицы измерения, титрование вируса в инфекционных единицах 50%-ного действия на чувствительные объекты.
- •25. Титр вируса, единицы измерения, титрование вируса по гемагглютинирующей активно-
- •26. Ртга (задержки): принцип реакции, компоненты, контроли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.
- •27. Рнга (пассивной): принцип реакции, компоненты, контро-ли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.
- •28. Рн: принцип реакции, компоненты, контроли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.
- •29. Рдп: принцип реакции, компоненты, контроли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.
- •30. Метод флюорохромирования, принцип метода, приготовление препаратов, диагностическая ценность. Люминесцентная микроскопия, устройство и принцип работы люминесцентного микроскопа.
- •31. Метод флюоресцирующих антител (мфа): принцип реакции, компоненты, контроли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.
- •32. Иммунопероксидазная (гистохимическая) реакция: принцип, компоненты, контроли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.
- •33. Твердофазный иммуноферментный анализ: принцип реакции, компоненты, контроли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.
- •34. Реакция связывания комплемента: принцип реакции, компоненты, контроли, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.
- •35. Метод днк-зондов: принцип метода, получение днк-зондов, постановка реакции, цели применения, достоинства и недостатки метода.
- •36. Полимеразная цепная реакция (пцр): принцип метода, компоненты, постановка реакции, цели применения, достоинства и недостатки метода.
- •Вирус бешенства.
- •2. Вирус ящура.
- •3. Вирус оспы.
- •4. Вирус болезни Ауески.
- •5. Вирусы гриппа.
- •6. Возбудители губкообразной энцефалопатии.
- •7. Вирус чумы жвачных.
- •8. Вирус ирт крс. Инфекционного ринотрахеита
- •9. Вирус парагриппа-3 крс.
- •10.Респираторно-синцитиальный вирус крс.
- •11.Возбудитель вирусной диареи крс.
- •12.Возбудитель аденовирусной инфекции крс.
- •13.Вирус лейкоза крс.
- •14.Вирус катаральной лихорадки овец.
- •15.Вирус контагиозной эктимы овец.
- •16.Вирус ачс. Африканской чумы свиней
- •17. Вирус кчс. Вирус классической чумы свиней
- •18. Вирус болезни Тешена.
- •19. Вирус трансмиссивного гастроэнтерита свиней.
- •20.Вирус респираторно-репродуктивного синдрома свиней.
- •21.Вирус ачл. Африканской чумы лошадей
- •22. Вирус инан. Инфекционной анемии лошадей
- •23. Вирус ньюкаслской болезни.
- •24. Вирус инфекционного ларинготрахеита птиц.
- •25.Вирус болезни Марека.
- •26.Вирус инфекционного бронхита кур.
- •27.Вирус инфекционного бурсита кур.
- •28.Аденовирусная инфекция птиц.
- •29.Вирусы лейкоза птиц.
- •30.Вирус чумы плотоядных.
- •31.Вирус алеутской болезни норок.
- •32.Вирус инфекционного гепатита собак. Болезнь рубарта
- •33.Вирус панлейкопении кошек.
- •34.Вирус инфекционного перитонита кошек.
- •35.Вирус миксоматоза кроликов.
- •36.Вирус геморрагической болезни кроликов.
6. Подготовка вируссодержащего материала для исследования.
В лаборатории полученный патматериал освобождают от консерванта, оттаивают, отмывают от глицерина, взвешивают. Часть материала берут для вирусологических исследований, а часть хранят в холодильнике на случай дополнительных исследований.
Подготовка органов и тканей. Вирус необходимо высвободить из клеток органов и тканей и перевести в фосфатный буфер или раствор Хенкса. Для этого материал тщательно измельчают ножницами и растирают в ступке со стерильным кварцевым песком. Из растертого материала готовят 10 %-ную суспензию на фосфатном буфере или растворе Хенкса. Полученную суспензию центрифугируют при 1500-3000 минˉ1, надосадочную жидкость отсасывают в стерильные флаконы и освобождают от микрофлоры, либо пропуская через бакфильтры (это делают редко, т.к. теряется много вируса за счет адсорбции на фильтре), либо обрабатывая антибиотиками широкого спектра действия (пенициллин, стрептомицин, тетрациклин, и т.д.). Дозы антибиотиков: от 100 до 1-2 тыс. ЕД и более на 1 мл в зависимости от характера исследуемого материала. Следует избегать излишне больших доз антибиотиков, т.к. их избыток при дальнейшем внесении в КК может вызвать неспецифическую дегенерацию. Экспозиция суспензии с антибиотиками не менее 30-60 мин при комнатной температуре, затем материал подвергают бактериологическому контролю на наличие бактерий, грибов путем посева на МПА, МПБ, МППБ и среду Сабуро. После получения отрицательного результата бактериологического контроля вируссодержащий материал используют для заражения лабораторных животных, КЭ или КК. В случае положительного бактериологического контроля суспензию вируса подвергают дополнительной обработке антибиотиками и повторно ставят контроль. Суспензию хранят при -20-70 С.
Подготовка выделений из носа, глаз. Тампоны, погруженные в соответствующий раствор, встряхивают 10-15 мин, отжимают, жидкость центрифугируют 20 мин при 2-3 тыс. минˉ1. Надосадочную жидкость отсасывают в стерильную пробирку и в нее добавляют пенициллин и стрептомицин по 500-1000 ЕД на 1 мл, выдерживают и после бактериологического контроля используют для заражения.
Подготовка фекалий. Пробу кала (приблизительно 1 г) помещают в баночку с бусами, содержащую 10 мл раствора Хенкса или фосфатно-буферного раствора. После гомогенизации материала встряхиванием и последующего центрифугирования при 2-3 тыс. минˉ1 в течение 30 мин, надосадочную жидкость отсасывают, добавляют пенициллин, стрептомицин по 500-1000 ЕД/мл. После 30-60минутного контакта производят посев на стерильность, замораживают и хранят при -1020°С. В день заражения исследуемый материал оттаивают и повторно центрифугируют для удаления вновь образующегося после замораживания осадка. Неиспользованный материал хранят в замороженном состоянии до конца исследования. Исследование кала может быть заменено ректальными мазками, обработка которых требует меньше времени, а частота выделения вируса при этом не только не меньше, но иногда выше, чем при исследовании кала.
Мочу обрабатывают антибиотиками (500-1000 ЕД/мл) и используют для заражения.
Содержимое папул, пузырьков и пустул, чешуйки и корки исследуют при кожных высыпаниях. Содержимое папул и пузырьков разводят физраствором 1:5, а корки, чешуйки после растирания суспендируют в солевом растворе 1:5-1:10 и центрифугируют при 2-3 тыс. минˉ1 в течение 10-15 мин. После обработки пенициллином и стрептомицином (по 200-500 ЕД/мл) материал используют для заражения.
Подготовка крови. Используют либо цельную дефибринированную, либо
«лаковую» кровь, либо кровь с антикоагулянтом (5 мл крови + 5-6 капель гепарина и замораживают). После оттаивания гемолизированную кровь центрифугируют при 2-3 тыс. минˉ1 в течение 15 мин, добавляют пенициллин и стрептомицин из расчета 100-200 ЕД/мл и после проверки на стерильность используют для заражения
Отбор крови для серологических исследований. Для серологической диагностики необходимо иметь сыворотки двух проб крови (парные сыворотки), взятых в начале и в конце болезни. Первую пробу берут как можно раньше в инкубационный период или в начале проявления клинических симптомов болезни, вторую во время выздоровления или через 2-3 нед после заболевания. Брать кровь и готовить сыворотку необходимо стерильно, нельзя применять антикоагулянты или консерванты, которые могут сделать сыворотку антикомплементарной, а в РН оказать инактивирующее действие на вирус или оказаться токсичными для культур клеток либо просто нестерильными. Кровь в объеме 10-15 мл берут в стерильные пробирки с резиновыми пробками, выдерживают при комнатной температуре до образования сгустка, обводят стеклянной палочкой (или другим инструментом) и переносят в холодильник при 4 С° на 18-20 ч. После максимальной ретракции сгустка сыворотку отсасывают, добавляют антибиотики пенициллин и стрептомицин по 100 ЕД/мл, проводят высевы на бактериологические среды. Вместо отстаивания в холодильнике можно после обведения кровь центрифугировать. Хранить сыворотки необходимо в холодильнике при 4 С° или в замороженном состоянии, строго соблюдая порядок нумерации и соответствия записей в журнале и пробах.