
- •Вирусология. Этапы развития и связь с другими науками.
- •2. Природа и происхождение вирусов, уникальные черты, отличающие вирусы от других инфекционных агентов.
- •3.Место и роль вирусов в биосфере, сходство с другими формами жизни, роль в патологии животных и человека.
- •5. Химический состав вирионов вирусов.
- •6. Структура вирионов (нуклеоид, нуклеокапсид, капсид, капсомеры, суперкапсид, Моболочка). Типы симметрии вирусных частиц, простые и сложные вирионы.
- •7. Нуклеиновые кислоты вирусов, их строение и функции, отличие от клеточных. Типы вирусных геномов.
- •8. Вирусные белки, их виды, свойства и функции, отличие от клеточных.
- •9. Основные принципы систематики и номенклатуры вирусов.
- •10. Краткая характеристика семейств безоболочечных днк-содержащих вирусов.
- •11.Краткая характеристика семейств оболочечных днк-содержащих вирусов.
- •12.Краткая характеристика семейств безоболочечных рнк-содержащих вирусов.
- •13.Краткая характеристика семейств оболочечных рнк-содержащих вирусов с позитивным геномом.
- •14.Краткая характеристика семейств оболочечных рнк-содержащих вирусов с негативным геномом.
- •15.Стадии репродукции вирусов: адсорбция, проникновение, депротеинизация.
- •1. Начало инфекции (эклипс-фаза, теневая фаза)
- •16.Стадии репродукции вирусов: экспрессия вирусного генома (транскрипция, трансляция вирусных белков, репликация генома).
- •2. Экспрессия вирусного генома
- •17.Стадии репродукции вирусов: сборка вирионов и выход их из клетки.
- •18.Культивирование вирусов в организме естественно восприимчивых и лабораторных животных.
- •19.Культивирование вирусов на куриных эмбрионах.
- •20.Культивирование вирусов на культурах клеток и тканей, преимущества клеточных культур перед лабораторными животными и куриными эмбрионами, значение в вирусологии.
- •21.Виды культур клеток: органные, первично-трипсинизированные, диплоидные и перевиваемые; их свойства, особенности, области применения.
- •22.Действие на вирусы физических и химических факторов (температура, ультрафиолетовое облучение, кислоты, щелочи, жирорастворители, антибиотики). Методы уничтожения и консервации вирусов.
- •23.Пути и формы циркуляции вирусов в природе, сохранение популяции вирусов в межэпизоотический период.
- •24.Влияние антропогенных факторов на циркуляцию вирусов (загрязнение окружающей среды, использование вакцин, химиопрепаратов, пестицидов, концентрация животных и др.).
- •25.Генотип и фенотип вирусов. Наследственность, изменчивость, эволюция вирусов, генофонд вирусной популяции.
- •26.Генетические и негенетические взаимодействия вирусов.
- •27.Спонтанные и индуцированные мутации вирусов. Методы селекции и клонирования вирусов, отбор мутантов и их использование в профилактике вирусных болезней.
- •28. Классификация вирусных инфекций на уровне клетки. Цитопатология зараженной клетки.
- •29. Тропизм вирусов, проникновение в организм и распределение в нем. Классификация вирусных инфекций на уровне организма.
- •30. Клеточные и гуморальные факторы противовирусного иммунитета, их формирование, взаимодействие, значение для организма.
- •31. Иммунный ответ хозяина на вирусную инфекцию, особенности противовирусного иммунитета. Типы вирусных антигенов.
- •32. Иммунопатология вирусных инфекций, способы "ускользания" вирусов от иммунной защиты организма.
- •33.Интерферон: виды, свойства, индукторы. Применение интерферона и его индукторов в лечении вирусных заболеваний.
- •34.Специфическая профилактика вирусных болезней животных. Типы вирусных вакцин, их достоинства, недостатки, контроль вакцинных препаратов.
- •35.Химиотерапия вирусных болезней животных. Основные группы химиотерапевтических веществ.
- •36.Общая схема лабораторной диагностики вирусных инфекций: экспресс-методы, выделение вируса из патологического материала, идентификация вируса и доказательство его этиологической роли.
- •1. Устройство вирусологической лаборатории.
- •2. Правила работы с вируссодержащим материалом.
- •3. Учет, хранение и этикетирование вирусного сырья в лаборатории
- •4. Виды патологического материала и общие принципы его отбора.
- •5. Упаковка, транспортировка, хранение и консервирование вируссодержащего материала.
- •6. Подготовка вируссодержащего материала для исследования.
- •7.Вирусоскопия как метод диагностики вирусных инфекций. Световая, электронная, иммуноэлектронная микроскопия.
- •8. Устройство и принцип работы электронного микроскопа, приготовление препаратов для электронной микроскопии.
- •9. Тельца-включения при вирусных заболеваниях: морфология, состав, расположение в клетке, диагностическое значение.
- •10.Цели использования в вирусологии лабораторных животных, их виды, требования к ним, животные-гнотобиоты, спф-животные. Латентные инфекции лабораторных животных.
- •11.Методы экспериментального заражения лабораторных животных, признаки размножения вируса в их организме, "слепые пассажи".
- •12. Порядок и основные принципы вскрытия лабораторных животных, отбор патматериала.
- •13. Цели использования в вирусологии кэ, их строение и требования, предъявляемые к ним.
- •14.Методы экспериментального заражения куриных эмбрионов.
- •15.Культивирование зараженных кэ и признаки размножения вирусов в них.
- •16.Порядок вскрытия куриных эмбрионов и отбор вируссодержащего материала.
- •17. Способы и техника культивирования эукариотических клеток вне организма (монослойный, роллерный, суспензионный, на микроносителях), преимущества и недостатки каждого метода.
- •18. Питательные среды и растворы для культивирования эукариотических клеток.
- •19.Хранение, консервирование и транспортировка кк. Проблема контаминации клеточных культур и ее решение.
- •20. Культивирование вирусов в кк: подбор культуры, заражение, культивирование зараженных культур.
- •21. Методы индикации вирусов в культуре клеток.
- •22. Получение первично-трипсинизированной культуры клеток.
- •23. Титр вируса, единицы измерения, титрование вируса в инфекционных единицах локальных повреждений.
- •24. Титр вируса, единицы измерения, титрование вируса в инфекционных единицах 50%-ного действия на чувствительные объекты.
- •25. Титр вируса, единицы измерения, титрование вируса по гемагглютинирующей активно-
- •26. Ртга (задержки): принцип реакции, компоненты, контроли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.
- •27. Рнга (пассивной): принцип реакции, компоненты, контро-ли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.
- •28. Рн: принцип реакции, компоненты, контроли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.
- •29. Рдп: принцип реакции, компоненты, контроли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.
- •30. Метод флюорохромирования, принцип метода, приготовление препаратов, диагностическая ценность. Люминесцентная микроскопия, устройство и принцип работы люминесцентного микроскопа.
- •31. Метод флюоресцирующих антител (мфа): принцип реакции, компоненты, контроли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.
- •32. Иммунопероксидазная (гистохимическая) реакция: принцип, компоненты, контроли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.
- •33. Твердофазный иммуноферментный анализ: принцип реакции, компоненты, контроли, варианты постановки, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.
- •34. Реакция связывания комплемента: принцип реакции, компоненты, контроли, учет результатов, цели применения, достоинства и недостатки.
- •35. Метод днк-зондов: принцип метода, получение днк-зондов, постановка реакции, цели применения, достоинства и недостатки метода.
- •36. Полимеразная цепная реакция (пцр): принцип метода, компоненты, постановка реакции, цели применения, достоинства и недостатки метода.
- •Вирус бешенства.
- •2. Вирус ящура.
- •3. Вирус оспы.
- •4. Вирус болезни Ауески.
- •5. Вирусы гриппа.
- •6. Возбудители губкообразной энцефалопатии.
- •7. Вирус чумы жвачных.
- •8. Вирус ирт крс. Инфекционного ринотрахеита
- •9. Вирус парагриппа-3 крс.
- •10.Респираторно-синцитиальный вирус крс.
- •11.Возбудитель вирусной диареи крс.
- •12.Возбудитель аденовирусной инфекции крс.
- •13.Вирус лейкоза крс.
- •14.Вирус катаральной лихорадки овец.
- •15.Вирус контагиозной эктимы овец.
- •16.Вирус ачс. Африканской чумы свиней
- •17. Вирус кчс. Вирус классической чумы свиней
- •18. Вирус болезни Тешена.
- •19. Вирус трансмиссивного гастроэнтерита свиней.
- •20.Вирус респираторно-репродуктивного синдрома свиней.
- •21.Вирус ачл. Африканской чумы лошадей
- •22. Вирус инан. Инфекционной анемии лошадей
- •23. Вирус ньюкаслской болезни.
- •24. Вирус инфекционного ларинготрахеита птиц.
- •25.Вирус болезни Марека.
- •26.Вирус инфекционного бронхита кур.
- •27.Вирус инфекционного бурсита кур.
- •28.Аденовирусная инфекция птиц.
- •29.Вирусы лейкоза птиц.
- •30.Вирус чумы плотоядных.
- •31.Вирус алеутской болезни норок.
- •32.Вирус инфекционного гепатита собак. Болезнь рубарта
- •33.Вирус панлейкопении кошек.
- •34.Вирус инфекционного перитонита кошек.
- •35.Вирус миксоматоза кроликов.
- •36.Вирус геморрагической болезни кроликов.
10.Цели использования в вирусологии лабораторных животных, их виды, требования к ним, животные-гнотобиоты, спф-животные. Латентные инфекции лабораторных животных.
Полученный от зараженного животного вируссодержащий материал считают выделенным вирусом.
В организме экспериментально зараженных животных вирус накапливается. Это используют для его изучения, идентификации, для получения гипериммунных сывороток или для получения противовирусных вакцин.
Пассаж заражение чувствительной живой системы с целью получения от нее новой популяции вируса. Такой вирус снова хранят в консервирующих условиях.
При работе с вирусом необходимо знать его инфекционный титр, т.е. его концентрацию в материале. Ее можно определить заражением чувствительных к исследуемому вирусу живых систем (в том числе лабораторных животных) разными разведениями вируссодержащего материала.
Виды лабораторных животных: кролики, морские свинки, белые крысы, белые мыши, золотистые хомячки; куры, голуби, котята, щенки и т.д. При особо чувствительных вирусах: МРС, КРС, свиньи и т.д. Так, биопробу при оспе птиц ставят на курах, оспе овец на овцах, чуме свиней на подсвинках.
Требования к лабораторным животным.
чувствительность к вирусу;
возраст животного;
линейные животные это животные, полученные в результате близкородственного скрещивания в течение ряда поколений, такие животные становятся настолько генетически однородными, что и их реакция на то или иное воздействие будет одинаковой;
лабораторные животные должны быть здоровы. Животные, поступающие в виварий вирусологической лаборатории, должны быть привезены из благополучного по инфекционным заболеваниям хозяйства. Их содержат изолированно, т.е. в карантине (белых мышей и крыс 14 дней, а остальных животных 21 день).
Животные-гнотобиоты свободные от микроорганизмов, получают и выращивают их в стерильных условиях для экспериментальных работ. Гнотобиотами называются также стерильные животные, специально заражённых определёнными видами микроорганизмов. Применяют в производстве высокоспецифических диагностических сывороток, при испытании фармакологических и биологических препаратов.
СПФ-животные животные без специфических патогенных факторов, лишённых патогенных микробов.
Среди лабораторных животных могут быть распространены латентные инфекции (характеризуются тем, что возбудитель постоянно находится в организме, но не проявляет себя клинически). При снижении резистентности организма, возбудитель бурно размножается и вызывает клинику болезни. Из латентных инфекций лабораторных животных вирусной этиологии значительное распространение имеет эктромелия белых мышей, вирусные пневмонии, нейроинфекции.
11.Методы экспериментального заражения лабораторных животных, признаки размножения вируса в их организме, "слепые пассажи".
Пассаж заражение чувствительной живой системы с целью получения от нее новой популяции вируса. Такой вирус снова хранят в консервирующих условиях.
Метод контроля животных на носительство возбудителей латентных инфекций: готовят суспензии из отдельных органов животных, специально убитых для этой цели, и вводят их соответствующими методами животным того же хозяйства (например, суспензию из мозга вводят интрацеребрально). При наличии латентной инфекции проведенный таким образом пассаж вируса приведет к острому течению болезни.
Уход за животными и их содержание. Придерживаются двух правил:
Необходимо обеспечить функционирование всех систем организма в пределах физиологической нормы.
Исключить взаимное перезаражение и распространение инфекции за пределы вивария.
Животных содержат в виварии с учетом норм зоогигиены. Животных обеспечивают регулярным и полноценным кормлением и постоянно питьевой водой. Уборку помещения и кормление начинают со здоровых. Для ухода за зараженными животными используют отдельный инвентарь и кормушки. Обслуживающий персонал при работе в виварии пользуется спецодеждой: халатом, резиновыми перчатками, фартуком, непромокаемой обувью. В виварии ежедневно дезинфицируют инвентарь и проводят влажную уборку с применением дезвеществ. По окончании эксперимента клетки дезинфицируют, погибших животных обезвреживают сжиганием в печах или автоклавированием.
Техника безопасности при работе с лабораторными животными. Источником инфицирования людей могут служить экспериментально зараженные животные и их эктопаразиты. Профилактика заражения людей от животных проводится с учетом пути передачи возбудителя. Контроль за состоянием здоровья сотрудников лаборатории ведет медицинская служба. При работе в лаборатории с вирусами бешенства, клещевого энцефалита, инфекционного гепатита и некоторыми другими инфекциями сотрудникам делают прививки против этих болезней.
Метка лабораторных животных. Бирка с надписью (использованный для заражения вирус или номер экспертизы исследуемого патматериала, количество зараженных животных, дату заражения и, если надо, другие сведения).
Для крупных животных и кур используют металлические бирки со штампованным номером. Бирки надевают на корень уха (кроликам), вставляют в ушную раковину по типу серьги (морским свинкам), надевают на ногу окольцовывают (курам).
При использовании в эксперименте небольшой группы животных и при непродолжительном сроке можно выстригать шерсть знаками на спине, бедрах (у кроликов). Морских свинок можно различать по окраске, которую регистрируют в рабочем журнале.
Метка белых мышей, белых крыс может быть проведена ампутацией отдельных пальцев на передних или задних конечностях, каждый из которых соответствует тому или другому порядковому номеру: на передних лапах единицам, на задних десяткам. Однако чаще пользуются методом нанесения цветных пятен на непигментированную шерсть. Насыщенный раствор пикриновой кислоты лучше других красителей (растворов фуксина, бриллиантовой зелени) удерживается на шерсти и коже животных. Цветные метки ставятся в местах, соответствующих определенному порядковому номеру животного. Так, если тело животного мысленно разделить на три продольные части (левый бок, спина, правый бок), то нанесение цветных пятен начинают с левого верхнего угла, т. е. лопатки, и это будет соответствовать 1. Тогда, двигаясь назад, левый бок соответствует 2, а левое бедро 3, далее затылок 4, спина 5, область репицы 6, правое плечо 7, правый бок 8, правое бедро 9. Используя два цвета красителей, можно дать обозначения одним из них единиц, другим десятков.
Методы экспериментального заражения лабораторных животных (рисунок 1). Выбор метода заражения определяется тропизмом вируса (способность репродуцироваться в определенных типах клеток организма). Вирусы, репродуцирующиеся в нервных клетках, называются нейротропными (вирус бешенства), репродуцирующиеся в клетках кожи – дермотропными (вирус оспы), в клетках легких – пневматропными (вирус гриппа). Вирусы, способные репродуцироваться в нескольких типах клеток, называются политропными (вирус ИРТ КРС в клетках органов дыхания и размножения), а во всех типах клеток пантропными (вирус чумы собак). Зная тропизм вируса, материал вводят в органы, содержащие чувствительные к этому вирусу клетки. При отсутствии данных о тропизме вируса, заражение проводят разными методами.
Объем заражающей дозы материала варьирует в зависимости от метода внесения и вида животных.
Способы фиксации у разных животных свои. Кроликов удерживают за кожу спины ближе к лопаткам, а другой рукой придерживают заднюю часть тела. Такая фиксация предотвращает получение царапин. Морских свинок держат одной рукой за грудь, а другой за задние лапы. Крыс и мышей берут за хвост, дают им возможность уцепиться передними конечностями за металлическую сетку (клетки), захватывают двумя пальцами левой руки кожу на затылке и слегка растягивают животное. При этом крыс прочнее и безопаснее фиксировать корнцангами (рисунок 1), а для большей надежности голову животного можно удерживать двумя корнцангами за щечные кожные складки. Оба этих корнцанга помощник держит в левой руке, а корнцанг, фиксирующий хвост, в правой. Белых мышей без помощника фиксируют, захватывая складку кожи между ушами пинцетом Пеано, который, в свою очередь, укрепляют на стоящую в обычном штативе пробирку. Возможна фиксация мышей и одной рукой.
Перед заражением место введения материала тщательно обрабатывают 3 % спиртовым раствором йода.
Методы заражения лабораторных животных:
Подкожный метод кожную складку, захваченную большим и указательным пальцами левой руки, приподнимают и в ее основание параллельно поверхности тела вводят иглу со шприцем. Местом инъекции у большинства животных область спины, бока, плеча, лопатки и реже боковой стенки грудной клетки (собака), коленной складки (морская свинка), шеи (куры).
Внутрикожный метод у кроликов на боку или животе выстригают, а затем выбривают шерсть на участке кожи. Подготовленное поле протирают спиртом и физраствором. Иглу шприца скосом наружу вводят под острым углом в толщу поверхностного слоя кожи на несколько мм. Материал инъецируют до приподнимания слоя кожи в виде бугорка. Мелким животным в/к вводят материал в плантарную поверхность задней конечности, которую фиксируют, отводя ее назад и помещая на указательный палец левой руки. Правой рукой иглу со шприцем вводят в кожу в направлении от пальцев к голеностопному суставу.
Для размножения в организме дермотропных вирусов материал втирают в скарифицированную кожу. На коже, подготовленной, как и для внутрикожного заражения, делают несколько поверхностных царапин иглой или обломленной пастеровской пипеткой до появления капелек лимфы. Затем наносят материал и втирают его шпателем, стеклянной палочкой или остриженной зубной щеткой. Заражение в скарифицированную кожу у крупных животных проводят на боку или животе, у морской свинки на плантарной поверхности ступни, у мелких животных в области спины, у петухов в гребень и сережки, а также в перьевые фолликулы голени сразу же после удаления перьев.
Внутримышечный метод выбирают мышцы бедра, а у кур большую мышцу груди. Иглу после дезинфекции места инъекции вводят через кожу и подкожную клетчатку в мышцы, направляя перпендикулярно к поверхности тела. После инъекции материала иглу извлекают, место введения повторно дезинфицируют.
Внутрибрюшинный метод животное фиксируют вертикально вниз головой для того, чтобы органы брюшной полости сместились к диафрагме и при введении материала игла не травмировала кишечник. В области паха, а у кур на середине расстояния между верхушкой грудной кости и клоаки короткую иглу вводят сквозь кожу и брюшинную складку, направляя под углом 45 ° к продольной оси тела. При этом левой рукой слегка оттягивают лапу животного, создавая натяжение кожи и мышц брюшной стенки со стороны инъекции. Проникновение иглы ощущается по исчезнувшему сопротивлению брюшной стенки. Мышам в/б можно вводить 0,2-8,0 мл раствора.
Внутривенный метод важно контролировать, чтобы в вену из шприца не попали пузырьки воздуха или частицы материала, которые могут вызвать эмболию и гибель животного. Белых мышей и крыс заражают в боковые вены хвоста, предварительно расширив их, растирая тампоном, смоченным тампоном, смоченным ксилом или горячей водой. Помощник левой рукой сдавливает хвост у корня, а правой фиксирует животное за кожу затылка. Иглу скосом наружу вводят под острым углом в вену нижней трети хвоста, где кожа тоньше, и направляют к корню хвоста. Если игла попала в сосуд, го жидкость легко поступает из шприца, а сосуд на всем протяжении бледнеет. Освободив вену у корня хвоста, медленно вводят материал. Затем вену передавливают ниже места вкола, иглу извлекают, и место инъекции прижимают сухой ватой. Если вводимый раствор проталкивается с трудом, хвост набухает, то жидкость из шприца попала под кожу, а не в вену. Морским свинкам можно ввести вирус в ток крови, только проникнув иглой в сердце. Для этого определяют место сердечного толчка, в межреберный промежуток слева и на 1 см выше мечевидного отростка вводят иглу без шприца. Если в игле покажется кровь, значит, игла попала в сердце, и тогда, присоединив шприц, инъецируют материал. Кроликам в/в материал вводят в краевую вену уха, предварительно удалив волосы на месте инъекции и пережав сосуд ниже вкола иглы. Игла должна быть направлена по ходу тока крови, т.е. к голове. Птице вируссодержащий материал вводят в подкрыльцовую вену.
Интраназальный метод большинство лабораторных животных (за исключением кроликов) при закапывании материала в ноздри чихают и разбрызгивают вируссодержащую суспензию. Поэтому перед и/н заражением животным делают глубокий эфирный наркоз (помещают в банку с крышкой и кусочком смоченной эфиром ваты). Заснувших животных извлекают, фиксируют вверх ноздрями. Материал по каплям вводят в ноздри, и с вдыхаемым воздухом он втягивается внутрь. Кроликам вируссодержащую суспензию закапывают в ноздри по каплям при запрокинутой на спину голове без наркоза.
Интрацеребральный метод кожу головы мышат большим и указательным пальцами левой руки оттягивают к затылку. Иглой шприца с ограничителем прокалывают кожу и череп на глубину 1-2 мм в точке, лежащей в центре квадрата, образованного средней сагиттальной линией и перпендикуляром к ней, походящим по наружному краю глазниц. Белых крыс и/ц заражают через трепанационное отверстие, а молодых кроликов и морских свинок прокалывая кости черепа в надглазничной борозде, где кость довольно тонкая. Иглу используют с ограничителем, обеспечивающим проникновение иглы не более чем на 4-5 мм. Старых животных и/ц заражают через трепанационное отверстие.
После заражения животных помещают в клетки, на которые навешивают этикетки с указанием вируса или номера экспертизы исследуемого материала, количества и номеров зараженных животных, даты заражения. В рабочем журнале записывают название вируса или номер экспертизы исследуемого материала, количество и характеристику зараженных животных, их маркировку, метод (ведения и дозу вируса).
За животными устанавливают наблюдение, обращая внимание на их внешний вид, подвижность, прием пищи и т. п. Следует отметить, что гибель животных в первые дни после заражения может быть связана с травмой или токсическим действием исследуемого материала.
Признаки размножения вируса в организме лабораторного животного. В последующие за заражением дни ведут ежедневные наблюдения за животными, контролируя их клиническое состояние. В случае размножения вируса чувствительные к нему клетки повреждаются или гибнут (при значительном повреждении вирусом клеток нарушается функционирование части или всего органа).
Видимые изменения в состоянии и функционировании организма называют клиническими признаками болезни, а появление их после экспериментального заражения считают косвенным доказательством размножения вируса. Клинические признаки, появившиеся у лабораторных животных, зараженных с целью биопробы (обнаружения вируса), указывают на то, что в исследуемом патматериале содержался вирус. Эти признаки большей частью носят неспецифический характер (угнетение, снижение аппетита, одышка и т. п.), и на этом этапе исследований еще нет возможности прийти к заключению, какой именно вид вируса вызвал заболевание.
Нередко заболевание заканчивается гибелью, что также бывает через определенное время после заражения и служит одним из признаков размножения вируса в организме.
На размножение вируса в организме указывают не только клинические признаки и гибель животного, но и видимые изменения самих органов и тканей, которые возникают в связи с гибелью зараженных вирусом клеток. Патологоанатомические признаки выражаются изменением цвета, размера, формы и консистенции органов, а также в появлении образований, в норме не встречающихся.
Итак, три признака указывают на наличие вируса в материале, которым заражали лабораторных животных: симптомы болезни, патологоанатомические изменения и гибель. Однако не всегда названные признаки сопровождают размножение вируса в организме. Например, вирус, содержащийся в патматериале, полученном от лошади, не может легко и с клиническими проявлениями размножаться в организме белых мышей. В первом пассаже лишь единичные вирусные частицы найдут для себя чувствительные клетки, но их будет так мало относительно целого органа, что видимых изменений организма не возникнет. Такой пассаж получил название «слепого».