Возбудители бруцеллёза и туляремии

Пробирки помещают на 2 ч в термостат и после извлечения из него выдерживают при комнатной температуре еще 18 - 20 ч, после чего проводят окончательный учет. Диагноз подтверждает РА в раз­ведении сыворотки 1:100. При повторной постановке РА через 7 - 10 суток ее титр может возрастать в 4 раза и более, что очень важно при дифференциации туляремии от бруцеллеза, возбудители которого, имея общую антигенную структуру с Francisella tularensis, могут агглютинироваться в сыворотке больных туляремией.

При массовых обследованиях вместо развернутой РА можно применять кровяно-капельную реакцию: на предметное стекло наносят каплю крови и гемолизируют ее в дистиллированной воде с последующим добавлением к ней туляремийного диагностикума. В таком случае реакция агглютинации в гемолизированной капле наступает немедленно.

В целях диагностики туляремии на первой неделе заболевания ставят РСК на холоде.

Биологический и бактериологический методы. Поскольку выделить культуру возбудителя туляремии методом посева материала больного не удается, для ее получения прибегают к биологическому эксперименту. Для этого три-пять белых мышей или двух морских свинок заражают (подкожно, накожно или внутрибрюшинно) пунктатом из бубона, отделяемым язвы, конъюнктивы, зева или мокротой.

Животные погибают через 7-15 суток или же их убивают на 15 - 20-е сутки. При вскрытии трупов во всех органах отмечаются геморрагии и выпотевание экссудата в брюшную полость. Кровь, костный мозг, суспензии внутренних органов и лимфатических узлов трупа высевают на одну из трех сред: желточную, глюкозоцистино­вый кровяной агар или среду Емельяновой.

Желточная среда состоит из 3 ч. яичных желтков и 2 ч. 0,85 % изотонического раствора натрия хлорида. Ее разливают в стериль­ные пробирки по 5 мл и свертывают 60 мин при температуре 75 °С, на следующий день прогревают 30 мин при 82 - 85 °С. Засеянные пробирки закрывают резиновыми колпачками и для фиксации микробов на поверхности среды располагают в термостате в наклонном положении.

На 3-5-е сутки, а иногда через 3-4 недели появляются первые очень мелкие точечные колонии.

Глюкоэоцистиновый агар с кровью: к расплавленному МПА добавляют 0,05 - 0,10 % цистина и 1 % глюкозы, кипятят несколько минут, охлаждают до 45 - 50 °С и добавляют 5 - 10 % кроличьей де- фибринированной крови.

Среда Емельяновой содержит 2,5 мл аутолизата дрожжей, 10 мл гидролизата желатина, 20 мл гидролизата рыбной муки, 1 г глюкозы, 0,1 г цистина, 0,5 г натрия хлорида, 2 г агара, 100 мл дистиллиро­ванной воды. Колонии туляремийных бактерий на последних двух средах влажные, молочно-белого цвета.

Растет возбудитель туляремии также в желточном мешке 12-дневного куриного эмбриона.

Выделенную чистую культуру идентифицируют по морфологическим, серологическим и биологическим свойствам.

Популяция колоний состоит из очень мелких кокковидных или палочковидных бактерий; в мазках-отпечатках из органов они располагаются внутриклеточно.

Лучше всего окрашиваются по Рома­новскому - Гимзе.

Свежевыделенные патогенные бактерии туляремии биохимически малоактивны. Для определения вида выделенной культуры используют диагностическую агглютинирующую сыворотку. Пато­генность культуры устанавливают заражением чувствительных животных.

Для обнаружения туляремийных антигенов у погибших грызунов в энзоотических очагах широко применяется реакция термокольцепреципитации Асколи.

Схема микробиологических исследований при туляремии

День исследования	Метод
	Ускоренный
1 – й 2 – й 3 – й 4 – й	кровь (с 1-го дня) Постановка кровяно-капельной реакции
	Бактериологический
	содержимое бубона, кровь, мокрота, гной из глаза, зева, соскоб язвы (с 3-4-го дня).
1 – й 2 – й 3 - й	Посев на яично-желточную среду, глюкозоцистиновыйагар. Изучение роста, микроскопия колоний. Постановка развернутой реакции агглютинации со специфической туляремийной сывороткой. Учет реакции. Ответ.
	Серологический
	сыворотка крови со второй недели
1 – й 2 – й	Постановка развернутой реакции агглютинации с туляремийным диагностикумом. Учет реакции. Ответ.
	Биологический
	Органы трупов, мокрота, отделяемое язвы, конъюнктивы глаза.
1 – й 2 – й 3 – й 4 – й	Заражение морской свинки или белой мыши. Вскрытие трупов. Микроскопия окраска по Граму, Романовскому-Гимзе. Посев из органов на среды. Изучение характера роста. Микроскопия колоний. Реакция развернутой агглютинации. Учет реакции. Ответ.
	Аллергический
	постановка пробы с 3-5 дня заболевания
1 – й 2 – й	Внутрикожное или накожное введение тулярина. Учет реакции через 24-48 часов.

13