- •Введение
- •Оформление работы:
- •1. Дата.
- •2. Тема: номер и название работы.
- •Организация учебного процесса по биохимии
- •Правила техники безопасности при работе в биохимической лаборатории
- •Тема 1. Реакция среды
- •Работа 1. Определение реакции среды молока и яйца с помощью универсальной индикаторной бумаги
- •Работа 2. Определение реакции среды бесцветных растворов с помощью прибора Михаэлиса
- •Работа 3. Определение рН гомогената мышечной ткани, раствора яичного белка с помощью прибора Михаэлиса Приготовление гомогената из тканей животных
- •Ход опыта
- •Лучи света
- •Матовое стекло
- •Работа 4. Определение рН растворов и биологического материала электрометрическим (потенциометрическим) методом
- •Вопросы для самоподготовки по теме 1
- •Тема 2. Буферные системы
- •Работа 5. Приготовление ацетатного буферного раствора и изучение зависимости величины рН от соотношения компонентов
- •Работа 6. Изучение действия на буферный раствор небольшого количества кислоты
- •Работа 7. Изучение действия на буферный раствор большого количества кислоты
- •Работа 8. Изучение действия небольшого количества щелочи на буферный раствор
- •Работа 9. Изучение действия на буферный раствор большого количества щелочи
- •Работа 10. Влияние разбавления водой буферного раствора на величину его рН
- •Вопросы для самоподготовки по теме 2
- •Тема 3. Коллоидные растворы
- •Работа 11. Получение гидрофобного коллоидного раствора гидроксида железа Fe(oh)3.
- •Работа 13. Диализ коллоидных растворов
- •Работа 14. Изучение механизма коагуляции золя железа
- •Работа 15 . Изучение защитного действия гидрофильных коллоидов (эмульсоидов)
- •Вопросы для самоподготовки по теме 3
- •Tеma 4. Адсорбция и абсорбция
- •Работа 16. Адсорбция органических красок животным углем
- •Работа 17. Определение количества уксусной кислоты, адсорбированной животным углем
- •Вопросы для самоподготовки по теме 4
- •Тема 5. Химия и обмен белков
- •Работа 18. Определение количества белка в гомогенате мышечной ткани, яйце рефрактометрическим методом
- •Работа 19. Определение белка по методу Лоури
- •Работа 20. Разделение смеси аминокислот методом распределительной хроматографии на бумаге
- •Работа 21. Определение количества аминокислот в биоматериале по азоту аминогрупп методом формольного титрования по Серенсену
- •Работа 22. Изучение действия пепсина на переваривание белка
- •Вопросы для самоподготовки по теме 5
- •Тема 6. Ферменты (энзимы)
- •Работа 23. Приготовление раствора фермента -амилазы (кф 3.2.1. 1) слюны
- •Работа 24. Обнаружение в слюне амилазы и определение специфичности ее действия
- •Работа 25. Изучение влияния рН среды на активность амилазы слюны
- •Работа 26. Изучение влияния температуры на активность энзимов
- •Работа 27. Изучение действия активаторов и ингибиторов на активность ферментов
- •Вопросы для самоподготовки по теме 6
- •Тема 7. Углеводы и их обмен
- •Работа 28. Изучение механизма переваривания углеводов и определение активности -амилазы (кф 3.2.1.1.) слюны
- •Работа 29. Обнаружение гликогена в тканях животных
- •Вопросы для самоподготовки по теме 7
- •Тема 8. Липиды и их обмен
- •Работа 30. Изучение растворимости жира
- •Работа 31. Определение кислотного числа жира
- •Работа 32. Определение йодного числа.
- •Работа 33. Исследование эмульгирования жира
- •Работа 34. Изучение механизма переваривания липидов и определение активности панкреатической липазы (кф 3. 1. 1. 3)
- •Работа 35. Реакция обнаружения холестерола в растительном и животном маслах.
- •Вопросы для самоподготовки по теме 8
- •Тема 9. Витамины
- •Работа 36. Обнаружение витамина а в жире
- •Работа 37. Обнаружение витамина д в жире
- •Работа 38. Обнаружение витамина с в биоматериале
- •Вопросы для самоподготовки по теме 9
- •Тема 10. Минеральные вещества и вода
- •Работа 39. Определение количества кальция в молоке и гомогенате мышечной ткани по де Ваарду
- •Работа 40. Определение содержания кальция в молоке и гомогенате мышечной ткани комплексонометрическим методом
- •Работа 41. Определение количества неорганического фосфора в молоке и гомогенате мышечной ткани
- •Вопросы для самоподготовки по теме 10
- •Тема 11. Молоко
- •Работа 42. Определение общей кислотности молока по Тернеру
- •Работа 43 Выделение казеиногена из молока и исследование его свойств.
- •Работа 44. Определение редуктазы молока
- •Работа 45. Определение количества лактозы в молоке с помощью рефрактометра
- •Вопросы для самоподготовки по теме 11
- •Рекомендуемая литература.
Тема 6. Ферменты (энзимы)
Большинство химических реакций в живых организмах протекает с участием ферментов. Ферменты являются мощными биологическими катализаторами, ускоряющими течение самых разнообразных химических процессов. По своей природе ферменты - специфические белки, простые или сложные. Все ферменты подразделяются по типам катализируемых реакций на 6 классов: 1) оксидоредуктазы; 2) трансферазы; 3) гидролазы; 4) лиазы; 5) изомеразы; 6) лигазы (синтетазы). Каждый из названных классов, в свою очередь, делится на подклассы и подподклассы.
В настоящее время выделено и изучено 3500 ферментов, 400 из которых получены в кристаллической форме. Активность одних ферментов (простых) определяется только структурой самого белка, других (сложных) - присутствием кофакторов, прочно связанных с белковой молекулой (простетических групп) или слабо связанных (коферментов).
Активность ферментов зависит от природы фермента, рН среды, температуры и других условий. Замечательной особенностью ферментов является специфичность их действия.
Работа 23. Приготовление раствора фермента -амилазы (кф 3.2.1. 1) слюны
Амилаза вырабатывается в клетках слюнных желез и через их протоки поступает в ротовую полость, где и проявляет свое действие на крахмал, расщепляя его до декстринов и мальтозы.
Ход опыта
В мерную пробирку выделить 1 мл слюны. Прилить 9 мл дистиллированной воды. Перемешать. Получится раствор амилазы слюны в соотношении 1:10, т. е. в каждом мл разбавленного раствора слюны будет содержаться 0,1 часть амилазы от ее концентрации в слюне, находящейся в ротовой полости, т. е. неразбавленной.
Задание: 1. Приготовить рабочий раствор амилазы слюны.
2. Объяснить, какие железы синтезируют амилазу слюны.
Работа 24. Обнаружение в слюне амилазы и определение специфичности ее действия
Для обнаружения в том или ином объекте (материале) фермента и установления специфичности его действия используют соответствующий предполагаемому энзиму субстрат.
nH2O nH2O
( С6Н10О5)n амилаза декстрины амилаза мальтоза
Амилаза слюны является эндоамилазой. Этот фермент, гидролизуя кислородные мостики между остатками глюкозы, расщепляет крахмал сначала на высокомолекулярные частицы - амилодекстрины, которые по своим свойствам и химическому строению приближаются к крахмалу. Затем происходит дробление амилодекстринов на частицы меньшей молярной массы - эритродекстрины. Последние подвергаются расщеплению на мальтодекстрины, которые по свойствам приближаются к мальтозе.
О ходе ферментативного гидролиза крахмала судят по изменению окраски, возникающей при добавлении раствора йода в инкубационную среду. Крахмал дает с йодом синее окрашивание, декстрины, в зависимости от длины цепочки, - фиолетовое или красновато-коричневое; в пробирке, где гидролиз прошел полностью и образовалась мальтоза, цвет инкубационной среды сохраняет слабо-желтую окраску раствора йода.
Ее отсутствие в инкубируемой смеси свидетельствует о наличии в исследуемом материале амилазы.
Специфичность - действие фермента только на определенный субстрат (или катализ определенной реакции.).
Ход опыта
Налить в две пробирки по 2 мл 0,1% раствора крахмала. Затем в 1-ю пробирку прилить 1 мл воды, а во 2-ю - 0,5 мл разбавленной слюны. Содержимое пробирок перемешать.
Поставить пробирки в водяную баню или термостат при 37°С на 10 мин.
По истечении этого времени пробирки вынуть и внести в каждую по капле 1% раствора йода. Отметить окраску растворов.
Задание: 1. Выполнить опыт.
2. По окраске проб определить, есть ли в слюне фермент амилаза?
3. Отметить, на какой субстрат этот энзим способен действовать (т.е. его специфичность).