- •Введение
- •Оформление работы:
- •1. Дата.
- •2. Тема: номер и название работы.
- •Организация учебного процесса по биохимии
- •Правила техники безопасности при работе в биохимической лаборатории
- •Тема 1. Реакция среды
- •Работа 1. Определение реакции среды молока и яйца с помощью универсальной индикаторной бумаги
- •Работа 2. Определение реакции среды бесцветных растворов с помощью прибора Михаэлиса
- •Работа 3. Определение рН гомогената мышечной ткани, раствора яичного белка с помощью прибора Михаэлиса Приготовление гомогената из тканей животных
- •Ход опыта
- •Лучи света
- •Матовое стекло
- •Работа 4. Определение рН растворов и биологического материала электрометрическим (потенциометрическим) методом
- •Вопросы для самоподготовки по теме 1
- •Тема 2. Буферные системы
- •Работа 5. Приготовление ацетатного буферного раствора и изучение зависимости величины рН от соотношения компонентов
- •Работа 6. Изучение действия на буферный раствор небольшого количества кислоты
- •Работа 7. Изучение действия на буферный раствор большого количества кислоты
- •Работа 8. Изучение действия небольшого количества щелочи на буферный раствор
- •Работа 9. Изучение действия на буферный раствор большого количества щелочи
- •Работа 10. Влияние разбавления водой буферного раствора на величину его рН
- •Вопросы для самоподготовки по теме 2
- •Тема 3. Коллоидные растворы
- •Работа 11. Получение гидрофобного коллоидного раствора гидроксида железа Fe(oh)3.
- •Работа 13. Диализ коллоидных растворов
- •Работа 14. Изучение механизма коагуляции золя железа
- •Работа 15 . Изучение защитного действия гидрофильных коллоидов (эмульсоидов)
- •Вопросы для самоподготовки по теме 3
- •Tеma 4. Адсорбция и абсорбция
- •Работа 16. Адсорбция органических красок животным углем
- •Работа 17. Определение количества уксусной кислоты, адсорбированной животным углем
- •Вопросы для самоподготовки по теме 4
- •Тема 5. Химия и обмен белков
- •Работа 18. Определение количества белка в гомогенате мышечной ткани, яйце рефрактометрическим методом
- •Работа 19. Определение белка по методу Лоури
- •Работа 20. Разделение смеси аминокислот методом распределительной хроматографии на бумаге
- •Работа 21. Определение количества аминокислот в биоматериале по азоту аминогрупп методом формольного титрования по Серенсену
- •Работа 22. Изучение действия пепсина на переваривание белка
- •Вопросы для самоподготовки по теме 5
- •Тема 6. Ферменты (энзимы)
- •Работа 23. Приготовление раствора фермента -амилазы (кф 3.2.1. 1) слюны
- •Работа 24. Обнаружение в слюне амилазы и определение специфичности ее действия
- •Работа 25. Изучение влияния рН среды на активность амилазы слюны
- •Работа 26. Изучение влияния температуры на активность энзимов
- •Работа 27. Изучение действия активаторов и ингибиторов на активность ферментов
- •Вопросы для самоподготовки по теме 6
- •Тема 7. Углеводы и их обмен
- •Работа 28. Изучение механизма переваривания углеводов и определение активности -амилазы (кф 3.2.1.1.) слюны
- •Работа 29. Обнаружение гликогена в тканях животных
- •Вопросы для самоподготовки по теме 7
- •Тема 8. Липиды и их обмен
- •Работа 30. Изучение растворимости жира
- •Работа 31. Определение кислотного числа жира
- •Работа 32. Определение йодного числа.
- •Работа 33. Исследование эмульгирования жира
- •Работа 34. Изучение механизма переваривания липидов и определение активности панкреатической липазы (кф 3. 1. 1. 3)
- •Работа 35. Реакция обнаружения холестерола в растительном и животном маслах.
- •Вопросы для самоподготовки по теме 8
- •Тема 9. Витамины
- •Работа 36. Обнаружение витамина а в жире
- •Работа 37. Обнаружение витамина д в жире
- •Работа 38. Обнаружение витамина с в биоматериале
- •Вопросы для самоподготовки по теме 9
- •Тема 10. Минеральные вещества и вода
- •Работа 39. Определение количества кальция в молоке и гомогенате мышечной ткани по де Ваарду
- •Работа 40. Определение содержания кальция в молоке и гомогенате мышечной ткани комплексонометрическим методом
- •Работа 41. Определение количества неорганического фосфора в молоке и гомогенате мышечной ткани
- •Вопросы для самоподготовки по теме 10
- •Тема 11. Молоко
- •Работа 42. Определение общей кислотности молока по Тернеру
- •Работа 43 Выделение казеиногена из молока и исследование его свойств.
- •Работа 44. Определение редуктазы молока
- •Работа 45. Определение количества лактозы в молоке с помощью рефрактометра
- •Вопросы для самоподготовки по теме 11
- •Рекомендуемая литература.
Работа 21. Определение количества аминокислот в биоматериале по азоту аминогрупп методом формольного титрования по Серенсену
Моноамино-монокарбоновые аминокислоты, содержащие одновременно основную аминную и кислую карбоксильную группы, в водных растворах показывают нейтральную реакцию. На основании этого считают, что в аминокислотах аминогруппа и карбоксильная группа нейтрализуют друг друга.
Таким образом, аминокислоты в водных растворах обладают характером внутримолекулярных солей, и, следовательно, непосредственно титровать карбоксильные группы аминокислот щелочью невозможно.
При взаимодействии аминокислот с формальдегидом аминогруппа реагирует с последним и образуются производные аминокислот; при этом аминогруппы теряют свои основные свойства:
NH2 N = CH2
R — СН + СНОН R — СН + H2O
СООН COOH
метиленаминокислота
Карбоксильные же группы в метиленаминокислотах сохраняются без изменения и в этом случае могут быть оттитрованы щелочью: N = CH2 N = CH2
R — СН + NaOH R — СН + H2O
COOH COONa
Количество титруемых при этом карбоксильных групп эквивалентно количеству связанных формальдегидом аминных групп. Таким образом, результат титрования указывает на содержание аминных групп.
Метод основан на блокировании аминогруппы (-NH2) аминокислоты формальдегидом и оттитровывании оставшейся свободной карбоксильной группы (-СООН) щелочью. По расходу последней определяют количество азота NH2-группы, а по нему рассчитывают содержание аминокислоты в растворе или белке. Этим методом можно определить только содержание нейтральных аминокислот.
Ход опыта
Налить в колбочку 10 мл формольной смеси (состоит из 30 - 40% раствора формалина и нескольких капель 0,1% раствора фенолфталеина) и оттитровать ее (в ней могут быть кислотные примеси) 0,1н раствором NaOH до слабо-розовой окраски, не учитывая количество щелочи.
Затем в эту же колбочку влить 10 мл исследуемой вытяжки из мяса (животных или рыбы) и оттитровать ее содержимое 0,1н раствором NaOH до ярко-красного цвета. Отметить расход 0,1н раствора NaOH на титрование и произвести вычисление.
Расчет. Во-первых, надо найти количество мг азота NH2-групп в 10 мл исследуемой вытяжки аминокислоты. Для этого количество мл 0,1н раствора NaOH, пошедшего на титрование раствора аминокислоты (например, 5 мл), следует умножить на 1,4 мг (это количество мг азота, соответствующее 1 мл 0,1н раствора NaOH).
5 1,4 = 7 мг азота аминогрупп в 10 мл исследуемого раствора аминокислоты.
Зная М. м. исследуемой аминокислоты, можно по найденному количеству азота ее NH2-групп определить содержание аминокислоты. Например, определяемая аминокислота глицин (NН2СН2СООН). Его М. м. равна 75 мг/моль, а количество азота в нем 14 мг. Следовательно, 14 мг азота образуют 75 мг глицина, а 7 мг азота (вычислено выше) образуют Х мг глицина. Отсюда,
мг глицина в 10 мл вытяжки из мяса.
Задание: 1. Выполнить опыт.
2. Определить количество мг азота NH2-групп аминокислоты в 10 мл вытяжки из мяса.
3. Написать структурную формулу, вычислить М. м. исследуемой аминокислоты и по содержанию азота ее аминогрупп вычислить количество аминокислоты в 10 мл вытяжки.
4. Указать биороль аминокислоты.
5. Объяснить принципы и технологию опыта. Написать реакцию аминогруппы аминокислоты с формальдегидом.