metodichka_2

2. Ультрафиолетовый свет – повреждает ДНК микробной клетки. Дейст-

вие УФ-света на бактерии было доказано опытом Бухнера: в чашку Петри с МПА делают посев культуры микроорганизмов, например, S.typhi «сплошным газоном». На посев накладывают черную бумагу с вырезанными буквами, со-

ставляющими какое-либо слово, например, «typhus» и подвергают его дейст-

вию прямых солнечных лучей в течение 1 часа. После этого черную бумагу снимают и ставят чашку на сутки в термостат при температуре 370С. Рост куль-

туры микробов наблюдается только на тех участках среды, которые были за-

щищены от действия УФ-лучей. Практическое применение УФ-лучей: сте-

рилизация воздуха в операционных, родильных залах, палатах для новорож-

денных, в бактериологических лабораториях и др.

Опыт Бухнера с культурой S.typhi

3. Гамма-излучение вызывает повреждение белков и нуклеиновых кислот мик-

робной клетки (микробицидное действие). Практическое применение: для стерили-

зации одноразовых шприцев, одноразовой пластиковой микробиологической посуды,

перевязочного материала, систем для переливания крови.

4. Высокая температура – вызывает денатурацию белков и инактивацию ферментов микроорганизмов. Практическое применение: для стерилизации

различных объектов.

Стерилизация или обеспложивание (лат. sterilis - бесплодный) – полное уничтожение всех микроорганизмов и их спор в различных объектах (хирурги-

ческие инструменты, перевязочный материал, питательные среды и др.).

6

Методы стерилизации:

I. Физический:

1. Прокаливание в пламени спиртовки. Этот способ имеет ограниченное применение, в частности, для стерилизации бактериологических петель.

2. Сухим жаром в печи Пастера (воздушный стерилизатор). Режим сте-

рилизации: 180°С, 1 час. Стерилизуют стеклянную посуду (чашки Петри, пи-

петки, пробирки), хирургические инструменты.

3. Паром под давлением в автоклаве.

Параметры автоклавирования выбирают в зависимости от свойств мате-

риала. Чаще используют следующие режимы: 1 атм (1210С), 1,5 атм (1250С),

7

2 атм (1340С). При таких режимах вегетативные формы микробов погибают в течение нескольких минут, а споры за 20-30 минут.

Способ автоклавирования основан на том, что образующийся при кипении воды пар не выходит наружу, а, скапливаясь в замкнутом пространстве, повы-

шает давление. Соответственно давлению увеличивается и температура кипе-

ния воды. Тепло, генерируемое при повышении давления, называется латент-

ным теплом, оно имеет большую проникающую способность, разрушающую структуру микроорганизмов и спор.

4. Стерилизация УФ-облучением. Применяется для стерилизации возду-

ха в микробиологических лабораториях, родильных залах, палатах для новоро-

жденных, операционных, процедурных кабинетах и др. Ее проводят ультра-

фиолетовыми бактерицидными лампами различной мощности.

8

II. Химический метод стерилизации основан на использовании токсичных газов: оксида этилена, формальдегида и др. Эти вещества инактивируют фер-

менты и нуклеиновые кислоты микроорганизмов. Химическая стерилизация проводится в специальных камерах при температуре газа от 20 до 600С. Прак-

тическое применение: стерилизация оптических приборов, предметов меди-

цинского назначения из полимерных материалов.

III. Механический метод стерилизации (фильтрование) основан на меха-

нической задержке микроорганизмов и их спор мелкопористыми фильтрами с определенным диаметром пор. В микробиологической промышленности и в ла-

бораторной практике широко применяется фильтрация материала через асбе-

стовые и нитроцеллюлозные фильтры. Фильтрование используют для стерили-

зации биологических препаратов, не выдерживающих нагревания (сывороточ-

ные препараты, антибиотики, бактериальные экзотоксины и др.).

5. Виды дезинфекции. Химические вещества, используемые для де-

зинфекции.

Дезинфекция (от франц. приставки des и лат. infectio – заражение) – это комплекс мероприятий, направленных на уничтожение и удаление возбудите-

лей инфекции из объектов окружающей среды. Дезинфекция отличается от сте-

рилизации по конечному результату. Путем стерилизации уничтожаются все виды микроорганизмов и их споровые формы. При дезинфекции погибают

только вегетативные формы болезнетворных микроорганизмов.

Для проведения дезинфекции обычно используют химические дезинфици-

рующие средства. Выбор дезинфицирующего средства, а также способ его применения определяются особенностями обеззараживаемого объекта и биоло-

гическими свойствами материала.

Различают профилактическую, текущую и заключительную дезинфек-

цию.

9

Химические вещества, используемые для дезинфекции:

1.Хлорсодержащие соединения.

2.Перекисные соединения (перекись водорода в различных концентрациях).

3.Производные фенола.

Помимо химической, существуют физическая, тепловая и комбинирован-

ные виды дезинфекции.

Примером тепловой дезинфекции является пастеризация – уничтожение только вегетативных форм патогенных бактерий (возбудителей кишечных ин-

фекций, бруцеллеза, туберкулеза). В зависимости от вида и свойств пищевого сырья используют различные режимы пастеризации. Например, пастеризацию молока в промышленных условиях проводят при температуре 740С, 15-20 се-

кунд.

6. Асептика и антисептика. Химические вещества, используемые для

антисептики

Асептика – система мероприятий, предупреждающих попадание микроор-

ганизмов из внешней среды в рану, органы больного при операциях, лечебных и диагностических процедурах. Асептика предусматривает меры защиты от микроорганизмов путем сохранения стерильности перевязочного материала,

перчаток, инструментов, материала для обработки ран, а также дезинфекцию рук врача, операционного поля, аппаратуры и др.

Антисептика – комплекс лечебно-профилактических мероприятий, направ-

ленных на уничтожение или подавление размножения микроорганизмов на ко-

же, слизистых оболочках, в ране.

Антисептика включает различные методы: механический (удаление некро-

тизированных тканей и др.); физический (дренирование ран и др.); биологиче-

ский (интраоперационное введение антибиотиков и др.); химический (примене-

ние антисептиков).

10

Химические вещества, используемые для антисептики:

1.Галогены (препараты йода и хлора).

2.Окислители (перекись водорода и др.).

3.Производные фенолов (резорцин и др.).

4.Красители (бриллиантовый зеленый, метиленовый синий и др.).

5.Соединения тяжелых металлов (серебра, ртути, цинка и др.).

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

1. Выделение чистой культуры аэробов (продолжение).

IIэтап исследования. Учет характера роста колоний на пластинчатом МПА:

1)средних размеров, полупрозрачные и 2) мелкие, непрозрачные.

Макро- и микроскопическое изучение колоний.

В целях изучения морфо-тинкториальных свойств микроорганизмов, часть колонии используют для приготовления мазка и окрашивают его по Граму. Затем мазки микроскопируют. После микроскопии другую часть колонии пересевают для выделения чистой культуры и накопления биомассы на следующие питательные среды: колонию №1 – в МПБ, колонию №2 – на скошенный МПА.

Этапы посева в МПБ:

11

а) прокалить петлю. Приоткрыть чашку Петри с культурами и охложденной петлей набрать культуру из колонии №1. Закрыть чашку;

б) над пламенем спиртовки открыть пробирку с МПБ, внести петлю с культурой в глубину МПБ. Закрыть пробирку над пламенем спиртовки. Прокалить петлю.

Этапы посева на скошенный МПА:

а) набрать культуру из колонии №2 так же, как из колонии №1; б) над пламенем спиртовки открыть пробирку со скошенным МПА. Внести

петлю культуры до дна пробирки и, скользя петлей по поверхности агара зигзагообразно снизу вверх, сделать посев. Закрыть пробирку, прокалить петлю.

Посевы поместить в термостат при температуре 37°С на 24 часа.

2. Действия медицинского работника при аварийной ситуации:

СП 3.1.5. 2826-10 «Профилактика ВИЧ-инфекции»

в случае порезов и уколов немедленно снять перчатки, вымыть руки с мылом под проточной водой, обработать руки 70% спиртом, смазать ранку 5% спиртовым раствором йода; при попадании крови и других биологических жидкостей пациента на сли-

зистую глаз, носа и рта: ротовую полость промыть большим количеством воды и прополоскать 70% раствором этилового спирта, слизистую оболочку носа и глаза обильно промыть водой (не тереть); при попадании крови и других биологических жидкостей пациента на халат,

одежду: снять рабочую одежду и погрузить в дезинфицирующий раствор или в бикс (бак) для автоклавирования; как можно быстрее начать прием антиретровирусных препаратов в целях

постконтактной профилактики заражения ВИЧ.

12

Занятие №7

Тема. Экология микробов (микроэкология). Распространение микробов в окру-

жающей среде. Микробиота организма человека.

Цель занятия. Изучить микрофлору воздуха, воды, почвы, продуктов питания и критерии оценки их чистоты по санитарно-микробиологическим показателям.

Изучить микробиоту различных биотопов организма человека в норме. Получить представление об эубиозе и дисбиозе.

I.Теоретические знания:

1.Экология микробов (микроэкология).

2.Распространение микробов в окружающей среде.

3.Санитарная микробиология.

4.Микрофлора воздуха.

5.Методы и критерии оценки чистоты воздуха в медицинских учреждениях.

6.Микрофлора воды.

7.Микробиологические показатели оценки качества питьевой воды.

8.Микрофлора почвы.

9.Микробиологические показатели доброкачественности пищевых продуктов.

10.Микробиота (нормальная микрофлора) организма человека.

II.Практические навыки:

1.Выполнение III и IV этапов бактериологического исследования выделения чис-

той культуры аэробов (продолжение).

2.Исследование микрофлоры воздуха аспирационным методом. Определение чистоты воздуха в помещениях медицинских учреждений по микробному числу и количеству S.aureus, как санитарно-показательного микроорганизма.

3.Микроскопия мазков чистых культур микробиоты кишечника.

1

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К ЗАНЯТИЮ

1. Экология микробов (микроэкология).

Экология (от греч. oikos – дом, место обитания) микроорганизмов изуча-

ет взаимоотношения микроорганизмов друг с другом и с окружающей средой.

Микроорганизмы обитают в почве, воде, воздухе, на растениях, в организ-

ме человека, животных и др. Они – составная часть биоценоза – совокупности животных, растений и микроорганизмов, заселяющих биотоп – участок суши или водоема с однородными условиями жизни. Сообщество микроорганизмов,

обитающих на определенных участках среды, называется микробиоценозом.

2. Распространение микробов в окружающей среде.

Микроорганизмы окружающей среды участвуют в процессах круговорота веществ в природе, уничтожают остатки погибших животных и растений, по-

вышают плодородие почвы, поддерживают устойчивое равновесие в биосфере.

В качестве нормальной микрофлоры они выполняют ряд полезных функций для организма человека.

3.Санитарная микробиология – раздел медицинской микробиологии, изу-

чающий микроорганизмы, содержащиеся в окружающей среде и способные ока-

зывать неблагоприятное воздействие на состояние здоровья человека. Санитар-

ная микробиология разрабатывает микробиологические показатели гигиениче-

ского нормирования, методы контроля за эффективностью обеззараживания объектов окружающей среды, а также выявляет в объектах окружающей среды патогенные, условно-патогенные и санитарно-показательные микроорганизмы.

Санитарно-показательные микроорганизмы используют для косвенного определения возможного присутствия в объектах окружающей среды патоген-

ных микроорганизмов. Выбор санитарно-показательного микроорганизма обу-

словлен: 1) одинаковым с патогенами способом попадания в данный объект; 2) одинаковыми с патогенами сроками выживания в данном объекте. Кроме то-

2

го, используют определение общего микробного числа – общего количества микроорганизмов в определенном объеме или массе исследуемого объекта

(почва, вода, воздух и др.).

4. Микрофлора воздуха.

Воздух является для микроорганизмов средой пребывания, а не средой оби-

тания. В нем отсутствуют питательные вещества и на бактерии губительно дей-

ствуют ультрафиолетовые лучи. Чаще всего в воздухе обнаруживают микрокок-

ки, споровые и пигментообразующие бактерии, плесневые грибы и другие са-

профитные микроорганизмы. Вместе с тем, воздушная среда является важным фактором в передаче многих инфекционных заболеваний (туберкулез, дифтерия,

коклюш, грипп и др.). Особенно высока частота передачи инфекционных агентов в воздухе закрытых помещений. Микробиологический анализ воздуха в жилых помещениях проводят только по эпидемическим показаниям при выявлении ин-

фекционного больного. В плановом порядке исследуют микробиологическую чистоту воздуха в помещениях медицинских учреждений: операционных, ро-

дильных залах, палатах новорожденных и других, требующих асептических ус-

ловий (Таблица 1).

С целью снижения микробной обсемененности воздуха в медицинских уч-

реждениях проводят влажную уборку и обработку помещений лампами УФ-

излучения, аэрозольную дезинфекцию в сочетании с вентиляцией и очисткой

(фильтрацией) поступающего воздуха (например, в операционных блоках).

5. Методы и критерии оценки чистоты воздуха в медицинских учреж-

дениях.

Санитарно-бактериологическое состояние воздуха оценивают по двум пока-

зателям:

1.Микробное число – это общее количество микробов в 1м3 воздуха.

2.Санитарно-показательный микроорганизм – S.aureus.

3