metodichka_2

Облигатные анаэробы – микроорганизмы, которые растут и размно-

жаются только без доступа кислорода. Например: Clostridium botulinum, Clostridium tetani, Bacteroides fragilis.

Факультативные анаэробы – микроорганизмы, которые могут расти и размножаться как в присутствии кислорода, так и в бескислородных условиях.

Например: Escherichia coli, Salmonella typhi, Mycobacterium tuberculosis.

Микроаэрофильные бактерии – микроорганизмы, которые растут и раз-

множаются при повышенном содержании СО2 и низком содержании О2. На-

пример: Helicobacter pylori, Campylobacter coli.

5.Бактериологический метод диагностики инфекционных заболева-

ний. Методы культивирования бактерий. Получение чистой культуры аэ-

робов и анаэробов. Способы создания анаэробных условий.

Основным методом диагностики инфекционных заболеваний является

бактериологический. Он заключается в посеве исследуемого материала

(кровь, моча, фекалии, мокрота, мазок со слизистой оболочки ротоглотки и но-

са и др.) на искусственные питательные среды для выделения чистой культуры возбудителя. Затем проводят его идентификацию по морфологическим, тинкто-

риальным, культуральным, биохимическим, антигенным и др. признакам.

Выделение чистой культуры аэробных возбудителей достигается путем посева исследуемого материала на плотные питательные среды (в чашке Пет-

ри), что приводит к механическому разобщению отдельных микробных клеток друг от друга. Посев производят секторами бактериологической петлей и по-

мещают в термостат при температуре 370С. Размножение изолированных кле-

ток дает потомство (колонию) одного вида, т.е. чистую культуру микробов.

11

чашка Петри с плотной питательной средой

бактериологическая петля

Посев исследуемого материала секторами для получения изолирован-

ных колоний микроорганизмов

Для получения изолированных колоний и чистой культуры анаэробов

производят посев исследуемого материала петлей секторами на специальные

среды для анаэробов с последующим культивированием в анаэробных (бески-

слородных) условиях.

12

Способы создания анаэробных условий:

1) механическое удаление воздуха из анаэростата с последующим заполне-

нием газовой смесью (80% азота, 10% водорода, 10% углекислого газа);

2) использование газогенераторных пакетов с набором специальных реа-

гентов (боргидрит натрия, винная кислота, бикарбонат натрия) для создания бескислородной газовой среды в анаэростате.

13

Проведение бактериологического исследования по схеме.

Цель бактериологического исследования: выделение и идентификация (оп-

ределение вида) возбудителя.

I этап. Посев исследуемого материала на пластинчатый агар с целью полу-

чения изолированных колоний микроорганизмов.

II этап. Изучение выросших колоний и выделение чистой культуры с це-

лью накопления биомассы одного вида микроорганизмов.

III этап. Определение биохимических, антигенных, патогенных и других свойств выделенной культуры с целью идентификации бактерий.

IV этап. Учет свойств бактерий и вывод о виде возбудителя.

14

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

Выделение чистой культуры аэробов.

I этап исследования. Посев смеси бактерий (S.aureus+E.coli) на пластин-

чатый МПА в чашке Петри петлей секторами.

Этапы посева:

а) на дне чашки Петри с МПА карандашом по стеклу сделать надпись: но-

мер стола, номер группы, факультет;

б) прокалить петлю, над спиртовкой открыть пробирку, обжечь ее края,

внести петлю в пробирку и остудить ее о стенки пробирки. Забрать пет-

лей исследуемый материал. Закрыть пробирку над спиртовкой и поста-

вить в штатив;

в) взять чашку Петри, приоткрыть крышку и нанести петлей секторами ис-

следуемый материал на МПА, закрыть чашку, прожечь петлю;

г) посевы поставить в термостат при температуре 37°С на 24 часа.

15

Занятие №6

Тема. Рост и размножение бактерий. Выделение чистой культуры аэробов.

Влияние физических и химических факторов на микроорганизмы. Методы сте-

рилизации. Дезинфекция. Асептика. Антисептика.

Цель занятия. Изучить рост и размножение бактерий, действие физических и химических факторов на микроорганизмы, методы стерилизации, дезинфекции и антисептики. Освоить второй этап бактериологического исследования по выделению чистой культуры аэробов.

I.Теоретические знания:

1.Рост и размножение бактерий.

2.Характеристика роста бактериальной популяции на плотных и жидких пита-

тельных средах.

3.Фазы развития бактериальной популяции в жидкой питательной среде.

4.Влияние факторов окружающей среды на микроорганизмы.

5.Виды дезинфекции. Химические вещества, используемые для дезинфекции.

6.Асептика. Антисептика. Химические вещества, используемые для антисептики.

II.Практические навыки и знания:

1.Проведение II этапа бактериологического метода исследования по выделе-

нию чистой культуры аэробов.

2.Действия медицинского работника при аварийных ситуациях (угроза зара-

жения ВИЧ).

1

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К ЗАНЯТИЮ

1. Рост и размножение бактерий.

Рост бактерий – это увеличение линейных размеров и массы микробной

клетки.

Размножение бактерий – это увеличение количества особей в популяции за счет поперечного деления, реже путем почкования.

Интервал времени, за который число клеток удваивается, называется време-

нем генерации (Т-генерации). Для большинства бактерий время генерации со-

ставляет 20-30 мин., у возбудителя туберкулеза – 24 часа.

Популяция бактерий – совокупность особей одного вида, сформировавшаяся в определенных условиях внешней среды.

2. Характеристика роста бактериальной популяции на плотных и жидких

питательных средах.

Популяция бактерий, развившаяся из одной микробной клетки на плотной питательной среде, называется колонией.

Культура бактерий – популяция одного вида микроорганизмов.

Для учета количества жизнеспособных клеток в культуре определяют число

колониеобразующих единиц в 1 мл материала (КОЕ/мл).

Колонии характеризуют по следующим признакам:

1)по размеру: мелкие - 1-2 мм; средние - 2-4 мм; крупные - более 4 мм;

2)по форме: круглые или неправильной формы;

3)по рельефу: выпуклые, уплощенные;

4)по характеру поверхности: гладкие или шероховатые;

5)по характеру краев: ровные, изрезанные, волнистые;

6)по оптическим свойствам: прозрачные, полупрозрачные, непрозрачные;

7)по цвету: бесцветные или пигментированные (золотистые, красные, сине-

зеленого цвета и др.);

8)по запаху, например, колонии синегнойной палочки имеют запах жасми-

2

на, фиалки, карамели;

9) по консистенции: сухие, влажные, слизистые.

Гладкие колонии с ровными краями обозначаются как «S»-колонии (англ. smooth – гладкие), шероховатые с изрезанными краями - «R»-колонии (англ. rough – шероховатые). Внешний вид колоний у некоторых бактерий настолько характерен, что может служить одним из дифференциальных признаков при их идентификации. Например, R-колонии возбудителя чумы (Yersinia pestis) срав-

нивают с «кружевными платочками», т.к. они имеют плотный центр и прозрач-

ные волнистые края, R-колонии возбудителя сибирской язвы (Bacillus anthracis)

напоминают «гриву льва».

Характер роста микроорганизмов в жидкой питательной среде зависит от

скорости деления и типа дыхания бактерий и может быть:

1)диффузно-мутящий (Staphylococcus aureus, Escherichia coli);

2)придонный или придонно-пристеночный (Streptococcus pyogenes);

3)поверхностно-пленчатый (Vibrio choleraе, Mycobacterium tuberculosis).

3

Рост микроорганизмов в жидкой питательной среде.

Некоторые виды возбудителей дают характерный тип роста в жидкой пита-

тельной среде. Например, Y.pestis образует на поверхности пленку со спускаю-

щимися вниз тяжами (нитями) - «чумные сталактиты»; B.anthracis образует придонный осадок в виде «комочка ваты».

3. Фазы развития бактериальной популяции в жидкой питательной среде.

I – лаг-фаза (от англ lag – отставать) – начальная фаза от момента посева бактерий до начала размножения. Бактерии адаптируются к новым условиям обитания.

II – экспоненциальная (логарифмическая) фаза. Характеризуется макси-

мальной скоростью деления клеток, которая зависит от вида бактерий.

III – стационарная фаза. Характеризуется равновесием между количеством погибающих и вновь образующихся клеток. В эту фазу количество живых бак-

терий в популяции достигает максимальной концентрации.

4

IV – фаза отмирания. Характеризуется гибелью бактерий вследствие исто-

щения питательной среды и других факторов.

Непрерывное культивирование с накоплением бактериальной массы ис-

пользуется в биотехнологических процессах и на микробиологических произ-

водствах (получение бактерийных препаратов).

Фазы развития бактериальной популяции

вжидкой питательной среде

4.Влияние факторов окружающей среды на микроорганизмы.

Физические, химические и биологические факторы окружающей среды оказывают различное воздействие на микроорганизмы: бактерицидное – при-

водящее к гибели клеток; бактериостатическое – подавляющее размножение;

мутагенное – изменяющее наследственные свойства бактерий.

Влияние физических факторов на микроорганизмы.

Методы стерилизации. Аппаратура.

1. Ультразвук. Под его действием в цитоплазме бактерий образуются ка-

витационные полости, заполненные парами жидкости под высоким давлением до 10 000 атм. Это приводит к разрушению цитоплазматических и оболочечных структур клетки. Практическое применение: для стерилизации вакцин, жид-

ких пищевых продуктов и др.

5