70. Действие факторов внешней среды на спермиев (t,осмотич давление, pH, свет и др.)

Температура. При более высокой температуре обменные процессы ускоряются, увеличивается число токсических веществ, возникает необратимая денатурация.. При снижении температуры обменные процессы замедляются, количество токсинов снижается. При постепенном снижении температуры в спермиях протекает кристаллизация, что приводит к их разрушению. Поэтому необходимо пройти эту фазу, быстро охладив ее при приближении температуры к t= 0.

Оптимальный уровень +40 ̊С, но при этом быстро расходуются питательные вещества и быстро накапливаются токсины, спермии погибают. Температурный шок /температурный удар: при попадании спермиев после получения спермы в температуры ниже +18 ̊С (слишком быстрая смена температуры или скачкообразные перепады температур).

Свет. Рассеянный дневной свет не воздействует на спермии – необходимо проводить работы со спермой в помещениях. Прямые солнечные лучи сначала усиливают двигательную активность спермиев, через 20-40 мин они погибают (губительны УФ части спектра). Стекло (особенно оранжевое) не пропускает УФ.

Осмотич. Давление. Очень чувствительны к ее изменению. При гипотонич р-ре – набухают, хвостик вздувается. При гипертонич – сморщиваются. У каждого вида животного свое осмотич давление спермы. По виноградному сахару у БАРАНА 6,4; жеребца 7,2, быка и хряка 6, собака 5,7%. Необходимо следить за осмотическим давлением при искусственном осеменении, р-ры д.б. изотоничными. Следить за высыханием спермы, т.к. концентрация солей увеличется.

Реакция среды. pH спермы колеблется 7,0-7,5. Изменение реакции среды в резкощелочную приводит к гибели спермиев. Органические кислоты сильнее воздействуют на спермиев, неорганические не вызывают их гибели (т.к. в р-ре неорг кислоты распадаются на ионы и не воздействуют на спермии изнутри).

Химические в-ва. Дез ср-ва в мельчайших кол-ве губительны для спермиев. Сурьма, перманганат калия, щелочи и кислоты, металлы ( для искусств осеменения используют стеклынные или никелевые инструменты), полиэтилен, резина, дистил. Вода. Для дезинфекции инструментов применяют этиловый спирт, т.к. он быстро испаряется с пов-тей.

Микробная и грибковая обсемененность. Сперма загрязняется при прохождении через мочеполовой канал и соприкосновении с внеш средой. Загрязнение патогенными МО может привести к распространению таких заболеваний, как бруцеллез, трихомоноз, вибриоза, туберкулеза, паратуберкулеза, лептоспира, ящура и др. болезней. Сперма – хорошая пит.среда для сохранения и размножения многих пат и непатогенных МО. При этом ни длительная заморозка, ни антибиотики не приводят к уменьшению количества микробных тел. При воздействии микробов на спермии, последние набухают, часть разрушается, и распадается вся оболочка спермия.

71. Методы оценки качества спермы

Определение концентрации спермиев при помощи счетной камеры Горяева. Наиболее точный метод определения концентрации спермиев – подсчет клеток в камере Горяева. Счетная камера Горяева представляет собой пластинку из толстого стекла, поделенную желобами на поля: центральное и два опорных. Центральное поле разделено средним поперечным желобом на две части. Это поле на 0,1 мм ниже опорных полей; на каждой половине его нанесена сетка. При помещении на опорные поля покровного стекла над сетками образуется камера 0,1 мм глубиной. Чтобы шлифованное покровное стекло прочно держалось, его помещают на чистую и обезжиренную спиртом камеру и, прижимая пальцами к опорным полям, притирают до появления радужных колец.

Для спермы быка и барана применяют эритроцитарный смеситель (с красным шариком), для спермы жеребца и хряка – лейкоцитарный (с белым шариком).

Сперму барана разбавляют в 200 раз, набирая сперму до метки 0,5, а воду – до 101.

Сперму быка разбавляют в 100 раз, набирая ее до метки 1,0, а воду – до 101.

Сперму жеребца и хряка разбавляют в 20 раз, набирая ее до метки 0,5, а воду – до метки 11.

Спермии подсчитывают в нескольких больших квадратах (не менее 5). Концентрацию спермиев во всем эякуляте и в дозе спермы определяют по формуле:

C= млрд/мл,

где С – концентрация спермиев; N – число подсчитанных спермиев; Д – степень разбавления; n – число малых квадратиков (80); р – глубина счетной камеры (0,1 мм); 400 – множитель для пересчета на 1 мм2 (поскольку площадь одного малого квадратика равна 400 1 мм2 ); 1000000 – число для перевода миллионов в 1 мм3 или миллиардов в 1 мл (см3).

Методика определения концентрации спермы при помощи фотоэлектроколориметра. После включения и прогревания прибора установить зеленый светофильтр на пути светового потока, барабаны – на нулевое деление по красной шкале оптической плотности. В три чистые флаконы внести пипеткой по 5 мл 3,5% раствора цитрата натрия и в один из них добавить 0,1 мл свежеполученной спермы. Тщательно смешать. Затем две кюветы наполнить до метки раствором цитрата натрия, а третью заполнить смесью цитрата натрия со спермой. Поместив кюветы в кюветодержатели, поворотом рукояток барабанов необходимо стрелку микроамперметра привести в положение «0». Отсчитать по шкале барабана (взятого в качестве измерительного) оптическую плотность взвеси спермиев и на основании полученных данных судить о концентрации.

Методика определения концентрации спермы хряка при помощи стандарта предложенного С. И. Сердюком. В пустую пробирку вносят 1 мл 1% раствора хлористого натрия и 0,1 мл спермы. Кладут на лист с напечатанным шрифтом две пробирки стандарта и между ними пробирку со спермой. Обращают внимание на высоту шрифта против каждой пробирки, которая должна быть одинаковой. При необходимости добавляют раствор хлористого натрия по 1 мл до тех пор, пока высота букв против каждой пробирки будет одинаковой. Вычисляют концентрацию по формуле:

С = 50 ∙ ( Н + 0,1 ),

где С – концентрация спермы, млн; 50 – постоянное число; Н – количество израсходованного 1% раствора хлористого натрия, мл; 0,1 – количество внесённой спермы, мл.

Методика определения концентрации спермы жеребца при помощи стандарта, предложенного Г. В. Паршутиным и Е. В. Румянцевой. В пустую пробирку наливают сперму и просматривают на свет, сравнивая со стандартными пробирками. Подбирают стандарт, наиболее близкий по мутности к исследуемой сперме, и указанную на стандарте концентрацию принимают за концентрацию исследуемой спермы.