- •3. Микробные токсины.
- •4. Черты инфекционной болезни.
- •6. Элементы эпидемического процесса.
- •8. Иммунитет, его виды
- •10. Фагоцитарная теория Мечникова.
- •12. Иммунная система организма.
- •13. Взаимодействие клеток в иммунном ответе.
- •14. Понятие об антителах.
- •15. Динамика антителообразования. Скорость образования антител ( ат ). Первичный иммунный ответ. Вторичный иммунный ответ. Иммунологическая память
- •17. Реакции с участием меченых антигенов и антител
- •22. Медицинские биологические препараты для профилактики и лечения инфекционных заболеваний.
- •23.Вакцины и анатоксины, виды вакцин, получение, применение.
- •24.Антитоксические сыворотки, получение, очистка, титрование, применения
- •25. Иммуноглобулины, получение, применения.
- •26.Понятие об аллергии, ее типы. Основные особенности и механизм формирования реакций гиперчувствительности немедленного типа; анафилактических, цитотоксических, болезней иммунных комплексов.
- •28.Лекарственная аллергия
17. Реакции с участием меченых антигенов и антител
Реакция иммунной флюоресценции (риф)
Реакция основана на том, что иммунные сыворотки обрабатывают флюорохромами (метками), которые соединяются с антителами. Сыворотки при этом не теряют своей иммунной специфичности. При взаимодействии полученной люминесцентной сыворотки с соответствующим антигеном образуется специфический светящийся комплекс, легко видимый в люминесцентном микроскопе.
Различные иммунофлюоресцентные сыворотки могут быть использованы для прямого и непрямого метода иммунофлюоресценции.
При прямом методе специфические флюоресцирующие иммунные сыворотки готовят для каждого микроба путем иммунизации кролика убитой культурой возбудителя, затем иммунную сыворотку кролика соединяют с флюорохромом. Метод применяется для экспресс-диагностики с целью обнаружения бактериальных или вирусных антигенов.
Механизм прямого метода: на предметном стекле готовят мазок из исследуемого материала, фиксируют на пламени. На фиксированный препарат наносят конъюгат (флуоресцирующую сыворотку к предполагаемому вирусу). Для образования комплекса антиген — антитело препарат помещают во влажную камеру и инкубируют при 37 °С в течение 15 мин, после чего тщательно промывают изотоническим раствором хлорида натрия для удаления не связавшихся с антигеном антител, подсушивают на воздухе, наносят нефлуоресцирующее масло и исследуют под микроскопом.
Непрямой метод предусматривает использование диагностической иммунной не флюоресцирующей сыворотки (иммунизированного кролика или больного человека) и флюоресцирующей сыворотки, имеющей антитела против видовых глобулинов диагностической сыворотки.
Метод непрямого метода . на фиксированный препарат наносят немеченую сыворотку, содержащую антитела к предполагаемому вирусу, выдерживают 30 мин при 37 °С, отмывают несвязанные антитела. На препарат наносят флуоресцирующую антивидовую сыворотку, соответствующую виду животного — продуцента гомологичных противовирусных антител, выдерживают 30 мин при 37 °С. Затем препарат отмывают от несвязанных меченых антител, подсушивают на воздухе, наносят нефлуоресцирующее масло и исследуют под люминесцентным микроскопом.
Непрямой метод позволяет не только обнаружить и идентифицировать антиген, но и выявить и определить титр антител. Кроме того, этим методом можно обнаруживать одной меченой сывороткой антигены различных вирусов, так как он основан на использовании антивидовых сывороток. Чаще применяют антикроличьи, антибычьи, антилошадиные сыворотки и сыворотки против глобулинов морской свинки.
Реакция иммунофлюоресценции. Механизм. Компоненты. Применение.
Иммунофлюоресцентный метод (РИФ, реакция иммунофлюоресценции, реакция Кунса) - метод выявления специфических Аг с помощью Ат, конъюгированных с флюорохромом. Обладает высокой чувствительностью и специфичностью.
Применяется для экспресс-диагностики инфекционных заболеваний (идентификация возбудителя в исследуемом материале), а также для определения Ат и поверхностных рецепторов и маркеров лейкоцитов (иммунофенотипирование) и др. клеток.
Обнаружение бактериальных и вирусных антигенов в инфекционных материалах, тканях животных и культурах клеток при помощи флюоресцирующих антител (сывороток) получило широкое применение в диагностической практике. Приготовление флюоресцирующих сывороток основано на способности некоторых флюорохромов (например, изотиоцианата флюоресцеина) вступать в химическую связь с сывороточными белками, не нарушая их иммунологической специфичности.
Различают три разновидности метода: прямой, непрямой, с комплементом. Прямой метод РИФ основан на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа. Бактерии в мазке, обработанные такой люминесцирующей сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета. Непрямой метод РИФ заключается в выявлении комплекса антиген - антитело с помощью антиглобулиновой (против антитела) сыворотки, меченной флюорохромом. Для этого мазки из взвеси микробов обрабатывают антителами антимикробной кроличьей диагностической сыворотки. Затем антитела, не связавшиеся антигенами микробов, отмывают, а оставшиеся на микробах антитела выявляют, обрабатывая мазок антиглобулиновой (антикроличьей) сывороткой, меченной флюорохромами. В результате образуется комплекс микроб + антимикробные кроличьи антитела + антикроличьи антитела, меченные флюорохромом. Этот комплекс наблюдают в люминесцентном микроскопе, как и при прямом методе.
+Механизм. На предметном стекле готовят мазок из исследуемого материала, фиксируют на пламени и обрабатывают иммунной кроличьей сывороткой, содержащей антитела против антигенов возбудителя. Для образования комплекса антиген — антитело препарат помещают во влажную камеру и инкубируют при 37 °С в течение 15 мин, после чего тщательно промывают изотоническим раствором хлорида натрия для удаления не связавшихся с антигеном антител. Затем на препарат наносят флюоресцирующую антиглобулиновую сыворотку против глобулинов кролика, выдерживают в течение 15 мин при 37 °С, а затем препарат тщательно промывают изотоническим раствором хлорида натрия. В результате связывания флюоресцирующей антиглобулиновой сыворотки с фиксированными на антигене специфическими анти телами образуются светящиеся комплексы антиген — антитело, которые обнаруживаются при люминесцентной микроскопии.
ИФА
ИЭМ, РИА\
18. реакции иммунитета при вирусных заболеваниях
19. Диагностические препараты, содержащие антиген и антитела
I.Диагностические препараты.
Препараты, содержащие антигены - диагностикумы, аллергены,токсины.
Препараты, содержащие антитела - диагностические сыворотки.
Диагностические бактериофаги.
II.Лечебно-профилактические препараты.
Препараты, содержащие антигены - вакцины.
Препараты, содержащие антитела - лечебные сыворотки и гамма-глобулины и иммуноглобулины.
Бактериофаги.
Микробы-антагонисты.
Интерфероны и другие цитокины.
Диагностические препараты
Диагностические препараты используются при лабораторной диагностике ряда заболеваний, точный диагноз которых может быть поставлен только при помощи бактериологических и вирусологических исследований. Кроме того, диагностические препараты необходимы при подтверждении лабораторными методами диагноза заболевания, имеющего атипичное течение, либо заболевания, характеризующегося полиморфизмом симптомов. Помимо этого, диагноз заболеваний, не встречающихся на данной территории и в данное время, должен быть обязательно подтвержден лабораторными методами.
В диагностике инфекционных заболеваний широко применяются микробиологические приемы диагностирования. При этом используются бактериологический, вирусологический, серологический, аллергический,иммунологические методы диагностики, а также методы молекулярной гибридизации и ПЦР. Для каждого из этих методов необходимы определенные диагностические иммунобиологические препараты: диагностикумы, диагностические сыворотки (видовые, типовые, комплексные, адсорбированные и др.), комплемент, аллергены, бактериофаги, системы для проведения РИФ и ИФА, зонды нуклеиновых кислот.
Классификация диагностических препаратов
1.Препараты, содержащие антитела - диагностические сыворотки:
агглютинирующие;
преципитирующие;
антитоксические;
гемолитические;
противовирусные;
люминесцирующие;
антиглобулиновые.
1. Диагностические сыворотки
В диагностике инфекционных заболеваний широко используются иммунные реакции для идентификации микроорганизмов (бактерий и вирусов) или токсинов. Для постановки таких реакций необходимы специфические диагностические сыворотки.
1.1. Агглютинирующие сыворотки.
Агглютинирующие сыворотки получают путем иммунизации кроликов взвесью убитых микроорганизмов или их антигенов с последующим взятием у них крови и приготовлением сыворотки. Агглютинирующие сыворотки применяют для идентификации микроорганизмов в реакции агглютинации. Недостатком таких сывороток является то, что они способны давать групповые реакции агглютинации, т.к. они содержат антитела к бактериям, имеющим общие антигены. Поэтому, в настоящее время большинство сывороток используется адсорбированными , Адсорбированные сыворотки содержат только типовые или видовые антитела, соответствующие определенному типу или виду антигена. Для получения таких сывороток применяют метод Кастеллани - метод адсорбции. Этот метод заключается в истощении сыворотки на групповые агглютинины путем насыщения ее родственными гетерогенными бактериями. При этом происходит адсорбция групповых антител, а специфические антитела остаются в сыворотке. Таким путем можно получить монорецепторные сыворотки - сыворотки, содержащие антитела только к одному антигену, и поливалентные сыворотки, дающие реакции агглютинации с двумя-тремя родственными бактериями, имеющими общий антиген. Титром агглютинирующей сыворотки называется то ее наибольшее разведение, при котором идет реакция агглютинации.
Агглютинирующие сыворотки широко применяют, например, при диагностике заболеваний, вызываемых эшерихиями, сальмонеллами и другими представителями семейства энтеробактерий.
1.2. Преципитирующие сыворотки.
Преципитирующие сыворотки получают иммунизацией кроликов антигенами бактерий, их экстрактами и токсинами. Титром преципитирующей сыворотки называется то максимальное разведение антигена, при котором идет реакция преципитации. Преципитирующие сыворотки выпускаются с высоким титром - не менее 1:100000. Это связано с тем, что антиген, определяемый в реакции преципитации, имеет мелкодисперсную структуру и в единице объема его может содержаться больше, чем в таком же объеме сыворотки - антител.
Специфические преципитирующие сыворотки применяются при диагностике инфекционных заболеваний (сибирская язва, чума, туляремия, дифтерия, и др.), в судебно-медицинской экспертизе для определения видовой принадлежности белка, в санитарной практике для обнаружения соответствия белковых веществ в продуктах (при подозрении на фальсификацию).
Реакция преципитации может быть поставлена в виде кольцепреци-питации или реакции преципитации в геле.
1.3.Гемолитические сыворотки.
Гемолитические сыворотки получают путем иммунизации кроликоввзвесью эритроцитов барана. Титром сыворотки называют то ее максимальное разведение, которое в присутствии комплемента вызывает гемолиз 3% взвеси эритроцитов барана. Гемолитические сыворотки используют для титрования комплемента и при постановке реакции связывания комплемента в индикаторной системе.
1.4.Противовирусные сыворотки.
Иммунные противовирусные сыворотки получают путем иммунизации различных животных в зависимости от вида вируса. Например, сыворотку против аденовирусов получают иммунизацией кроликов, сыворотку против вируса гриппа - иммунизацией белых хорьков и т.д.
Диагностические противовирусные сыворотки используются для определения вида или типа вируса в РТГА, РСК., РН.
1.5.Люминесцирующие сыворотки. Люминесцирующие сыворотки представляют собой иммунные сыворотки, содержащие специфические антитела, меченые флюоресцирующими красителями. При приготовлении люминесцирующих сыворотокпроводят присоединение к глобулиновой фракции иммунной сывороткиразличных флюорохромов путем прочной химической связи. Люминесцирующие сыворотки используют при постановке РИФ.
1.6. Анпшглобулиновые сыворотки.
+Антиглобулиновые сыворотки (АГС) содержат антитела к иммуноглобулинам сыворотки человека или кролика - в зависимости оттого, какая иммунная сыворотка используется в реакции. АГС получают путем иммунизации животных иммуноглобулинами человека или кролика. Такие сыворотки используют для постановки непрямой РИФ, реакции ИФА, реакции Кумбса.
2.Препараты, содержащие антигены:
2.1) диагностикумы:
2.1.1.бактериальные;
+2.1.2.эритроцитарные;
2.1.3.вирусные;
2.2.)токсины;
2.3.)аллергены.
2.1. Диагностикумы
+При серологической диагностике инфекционных заболеваний необходимы препараты, содержащие антигены. Такие препараты называются диагностикумы. Для приготовления диагностикумов подбираются штаммы микроорганизмов с высокой чувствительностью к антителам и способностью длительно сохранять антигенные свойства. Для инактивации микроорганизмов при приготовлении диагностикумов чаще всего используют химические вещества, особенно формалин, являющийся лучшим консервантом. Убитые нагреванием микроорганизмы хуже сохраняют антигенные свойства и используются редко.
2.1.1.Бактериальные диагностикумы.
Бактериальные диагностикумы содержат инактивированную микробную взвесь или отдельные антигенные компоненты бактерий. Примером таких диагностикумов являются:
а)бактериальные диагностикумы сальмонелл брюшного тифа, паратифа А и В, шигелл Флекснера, Зонне, единый бруцеллезный диагностикум и др.; они содержат взвесь бактерий, инактивированных формалином, и применяются в реакции агглютинации для обнаружения антител в сыворотке больных;
б)сальмонеллезные О-диагностикумы - содержат О-антигены различных групп сальмонелл, применяются для выявления антител к О-антигену при сальмонеллезных инфекциях в реакции агглютинации с сывороткой больных;
в)сальмонеллезный Н-диагностикум и Vi-диагностикум брюшноготифа.
2.1.2..Эритроцитарные диагностикумы.
Эритроцитарные диагностикумы представляют собой эритроциты (обработанные танином или формалином) с адсорбированными на их поверхности антигенами, извлеченными из бактерий. Эритроцитарные диагностикумы используются в РНГА (реакция непрямой гемагглютинации) для обнаружения антител. В том случае, когда РНГА используется для выявления антигена в патологическом материале, применяют антительные диагностикумы, т.е. эритроциты с адсорбированными на них антителами. Существуют дизентерийный, сальмонеллезный, псевдотуберкулезный и др. эритроцитарные диагностикумы.
2.1.3. Вирусные диагностикумы.
Вирусные диагностикумы содержат инактивированные вируссодержащие жидкости или живые вирусные частицы, используются при серологической диагностике вирусных инфекций в реакциях связывания комплемента, торможения гемагглютинации, нейтрализации для обнаружения антител и определения их титра.
2.2. Токсины.
Примером подобного препарата является токсин Шика. Это дифтерийный токсин, который вводится в ладонную поверхность предплечья в объеме 0,2 мл. В 0,2 мл препарата содержится 1/40 Dlm дифтерийного токсина для морской свинки. С помощью такой пробы определяют степень напряженности противодифтерийного антитоксического иммунитета. Если в месте введения токсина появляется воспалительная реакция, считают, что антител к дифтерийному токсину в организме нет, такого человека необходимо ревакцинировать. Если же воспалительная реакция не возникает, считается, что иммунитет к дифтерийному токсину достаточно напряженный и ревакцинация не нужна. Метод диагностики серологический.
2.3.Аллергены
Аллергены - это препараты, представляющие собой взвесь убитых микробных клеток или извлеченных из них различных фракций. Аллергены применяются для выявления гиперчувствительности замедленного типа при аллергической диагностике различных инфекционных заболеваний. Положительная реакция ГЗТ может свидетельствовать об инфицированности организма определенным возбудителем, либо об активном инфекционном процессе. Примером таких диагностических препаратов являются туберкулин, тулярин, бруцеллин, токсоплазмин, дизентерии и др.
21. Патология иммунного ответа. Классификация по механизму нарушений иммунной системы. Иммунодефицитные состояния; первичные иммунодефициты, их генетические механизмы; вторичные иммунодефициты, причины возникновения; клинические проявления иммунодефицитов и принципы их лечения. Иммунодефицитные состояния.
Иммунодефицитами называют неполноценное функционирование иммунной системы. Иммунодефицитные состояния разделяют на первичные (врожденные) и вторичные (приобретенные).
Врожденные иммунодефициты связаны с генетическими дефектами развития иммунной системы. Дефекты В-снстемы ведут к пониженной выработке или полному отсутствию Ig-глобулинов. Чаще наблюдается избирательная недостаточность SIgA, что ведет к снижению местной защиты слизистых оболочек. Преимущественные дефекты Т-системы - это недоразвитие тимуса, которое обусловливает недостаточность клеточного иммунитета. Тяжелые последствия вызывают комбинированные дефекты Т- и В-системы. Наблюдаются также избирательные дефекты фагоцитов и дефекты системы комплемента.
Вторичные (приобретенные) иммунодефициты развиваются при многих бактериальных и вирусных инфекциях, при болезнях, сопровождающихся потерей белка (ожоги, болезни почек), при применении с лечебной целью рентгеновских лучей или иммуносупрессивных средств. Причинами развития вторичных иммунодефицитов могут быть диабет, ожирение, атеросклероз, истощение.
Приобретенные иммунодефициты инфекционной природы возникают вследствие размножения возбудителей непосредственно в клетках иммунной системы. Вирус иммунодефицита человека репродуцируется в Т-хелперах и макрофагах, и при этом страдают и клеточный, и гуморальный иммунитет, поскольку Т-хелперы являются регуляторами иммунного ответа.
Иммунодефицитные состояния способствуют возникновению инфекций, вызванных условно-патогенными микроорганизмами, и развитию опухолей. Например, у больных СПИДом часто развивается саркома Капоши или пневмония, вызванная Pneumocysta carinii - микроскопическим грибом, который у людей с нормальным уровнем иммунитета не вызывает заболевания.