2. Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации. Механизм. Практическое применение.

Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА, РПГА) основана на использова­нии эритроцитов (или латекса) с адсорбиро­ванными на их поверхности антигенами или антителами, взаимодействие которых с соот­ветствующими антителами или антигенами сыворотки крови больных вызывает склеива­ние и выпадение эритроцитов на дно пробирки или ячейки в виде фестончатого осадка.

Компоненты. Для постанов­ки РНГА могут быть использованы эритроциты барана, лошади, кролика, курицы, мыши, человека и другие, которые заготавли­вают впрок, обрабатывая формалином или глютаральдегидом.

Эритроциты, сенсибилизированные АГ, называются эритроцитарными диагностикумами. Для приготовления эритроцитарного диагностикума чаще всего используют эритроциты барана, обла­дающие высокой адсорбирующей активностью.

Применение. РНГА применяют для диагностики инфекционных болезней, определения гонадотропного гор­мона в моче при установлении беременности, для выявления повышенной чувствительнос­ти к лекарственным препаратам, гормонам и в некоторых других случаях.

Механизм. Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) отличается значительно более высокой чувствительностью и специфич­ностью, чем реакция агглютинации. Ее используют для иденти­фикации возбудителя по его антигенной структуре или для индикации и идентификации бактериальных продуктов — токси­нов в исследуемом патологическом материале. Соответственно используют стандартные (коммерческие) эритроцитарные анти­тельные диагностикумы, полученные путем адсорбции специфи­ческих антител на поверхности танизированных (обработанных танином) эритроцитов. В лунках пластмассовых пластин готовят последовательные разведения исследуемого материала. Затем в каждую лунку вносят одинаковый объем 3 % суспензии на­груженных антителами эритроцитов.

Через 2 ч инкубации при 37 °С учитывают результаты, оценивая внешний вид осадка эритроцитов (без встряхивания): при отри­цательной реакции появляется осадок в виде компактного.диска или кольца на дне лунки, при положительной реакции — харак­терный кружевной осадок эритроцитов, тонкая пленка с неров­ными краями.

3. Гепатит в. Этиология, принципы лабораторной диагностики, профилактика.

Вирус гепатита В (HBV) вызывает сывороточный гепатит, относится к семейству гепадновирусов - оболочечных ДНК – вирусов.

Гепадновирусы поражают преимущественно клетки печени. Геном HBV представлен двуцепочечной кольцевой молекулой ДНК, наружная цепь длиннее внутренней. имеет однонитевой участок. Днк может принимать линейную форму.

Строение и антигенная структура.

Вирусные частицы размером 42 - 45 нм (частицы Дейна) имеют достаточно сложное строение и включают ДНК, ассоциированную с ней ДНК - полимеразу и четыре антигена

- поверхностный (HBs Ag - “австралийский”)- pre-S2 адсорбирует вирус на аналогичных рецепторах гепатоцита, pre-S1-обладает выраж иммуногенными св-ми. сердцевинный или коровский (HBc Ag или cor Ag), антиген инфекционности (HBe Ag, выявляемый в крови при активной репликации HBV) и наименее изученный HBx- Ag -возможно имеет отнош к раковой трансформации гепатоцитов.

Эпидемиологические особенности.

Ист-к ифн- больные люди и вирусоносители. искусственные парентеральные пути заражения - через медицинские манипуляции. Среди естественных путей - вертикальный ( от матери - потомству), половой и контактный. Передача возбудителя обеспечивается устойчивостью во внешней среде, вирус передается при контакте с кровью и другими биологическими жидкостями организма (слюна, сперма, содержимое носоглотки, вагины и др.). Факторами передачи могут быть различные предметы личной гигиены (зубные щетки, бритвенные и маникюрные приборы, мочалки, расчески и др.). В последние годы увеличилось значение наркозависимого и полового пути передачи.

Патогенез и иммунитет. входными воротами инфекции являются кровеносные сосуды, вирус сразу же попадает в кровь, с которой разносится по всему организму, фиксируясь прежде всего на гепатоцитах. Однако репродукция вируса не сопровождается цитолизом данных клеток. Это свидетельствует о том, что вирус гепатита В не обладает прямым цитопатическим действием, а патологический процесс в печени возникает только после распознавания иммуноцитами его антигенов на наружной мембране этих клеток. Многообразие патогенетических форм данного заболевания (острые, подострые, хронические или персистирующие) определяется АГ возбудителя и характером его взаимодействия с гепатоцитами, в результате которого развивается продуктивная или интегративная инфекция, с одной стороны, формой иммунного ответа и

выраженностью иммунопатологических процессов — с другой.При острых формах подавляется активность Т-хелперов(хелперов нарушается распознавание вирусных антигенов), при хронических — в процесс вовлекаются Т-супрессоры(формируются условия для развития аутоиммунных реакций).При нормальном развитии иммунного ответа представленные на мембране макрофагов вирусные антигены индуцируют гуморальный ответ, который заканчивается синтезом HBs-, НВс-, НВе-антител. Это приводит к формированию напряженного гуморального иммунитета, вследствие чего повторные заболевания встречаются редко.

Лаб д-ка. Серологическая основана на выявлении вирусных АГ и АТ к ним иммуноферментным или радиоиммунным методом. Основное диагностическое значение имеет определение в сыворотке больных HBs-антигена, которые появляется в инкубационном периоде и исчезает при благоприятном течении острого гепатита через 6-8 мес. после начала заболевания. при переходе заболевания в хроническую форму и при вирусоносительстве данный АГ циркулирует в крови длительное время. В продромальный период появляются НВс-АТ, затем — НВе-АТ и в последнюю очередь после исчезновения HBs-АГ из крови — HBs-АТ. По наличию АТ к тем или иным АГ вируса можно судить о периоде заболевания. Для постановки диагноза острого гепатита В важное значение имеет обнаружение антител класса IgM против НВс-антигена. В настоящее время используют метод выявления ДНК вируса гепатита В из исследуемого материала.

профилактика. Существует вакцина первого поколения, полученная из плазмы крови хронических носителей HBs-АГ. Она состоит из частиц HBs-АГ и является достаточно эффективной, хотя ее производство затруднено из-за ограниченных резервов исходного материала— плазмы крови.Вакцины нового поколения получены генноинженерным путем при встраивании гена, контролирующего образование HBs-АГ, в генном клеток эукариот или вируса осповакцины.

Билет № 7