3 курс / Микробиология / инт16 (Вирусологическая диагностика натуральной оспы)

ВИРУСОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА НАТУРАЛЬНОЙ ОСПЫ

Вирус натуральной оспы относится к семейству Poxviridae роду Orthopoxvirus.

Материалом для исследования служат содержимое кожных элементов (папул, везикул, пустул), корочки. При отсутствии кожных поражений (на начальной стадии заболевания) – смывы или мазки из зева и крови. Отбор клинического материала осуществляют медицинские работники, предварительно вакцинированные, с соблюдением правил работы с возбудителями особо-опасных инфекций.

Используют методы диагностики: экспресс-метод (РИФ), микроскопический (электронная микроскопия), вирусологический (индикация и идентификация), серологический.

Экспресс-метод. Для быстрого обнаружения вируса в культуре клеток используют реакцию иммунофлуоресценции (РИФ). На покровные стекла с культурой клеток, обработанной исследуемым материалом наносят противооспенную люминесцирующую сыворотку, в которой специфические антитела мечены изотиоционатом флуоресцеина. Положительный ответ дают на основании обнаружения в люминесцентном микроскопе ярко-зеленого свечения в цитоплазме клеток, обусловленного наличием антигена вирусов натуральной оспы.

Микроскопический метод. Электронная микроскопия является эффективным методом быстрого выявления вируса натуральной оспы. Обнаружение 2-3 и более характерных частиц вируса считается достаточным для постановки диагноза. В отпечатках из повреждений кожи и отделяемого носовой части глотки можно обнаружить тельца Гварниери, которые располагаются в цитоплазме вблизи ядра. В стадии папулы или везикулы ответ можно получить через 30 минут.

Вирусологический метод. Исследуемый материал вводят в 12-дневный куриный эмбрион, инкубируют при t 35°С 48-72 часа. При вскрытии эмбрионов на хорион-аллантоисной оболочке (ХАО) выявляют специфические элементы (бляшки). Они круглой формы серо-белого цвета с гладкой блестящей выпуклой поверхностью с ровным краем, диаметром 0,5-1 мм. Идентификацию проводят с помощью специфической сыворотки, содержащей вируснейтрализующие антитела

     1. в РН на курином эмбрионе из элементов поражения ХАО готовят 20% взвесь и после центрифугирования надосадочную жидкость соединяют со специфической сывороткой и эту смесь вводят в свежий куриный эмбрион. Эмбрион остается живым и бляшки отсутствуют.

     2. в РТГА с надосадочной жидкостью

     3. в РСК с надосадочной жидкостью

Можно обнаружить вирус натуральной оспы путем обработки культур клеток исследуемым материалом. Индикацию проводят:

     1. по ЦПД. В клеточном монослое появляются очаги дегенерации, где выявляются округленные и многоядерные клетки, утрачивающие отросчатость

     2. в реакции гемадсорбции с куриными эритроцитами.

     Идентифицируют вирусы натуральной оспы в культурах клеток в реакции нейтрализации ЦПД, в реакции торможения гемадсорбции с иммунной сывороткой, РСК, РИФ, РОПГА.

Серологический метод. Выявляют нарастание титров антител в парных сыворотках крови обследуемого в реакциях: РН на куриных эмбрионах, РН ЦПД, РТГА, РСК.