3 курс / Микробиология / инт12 (Герпесвирусы)
.docxГерпес-вирусы. Лабораторная диагностика
Начало формы
Семейство Herpesviridae состоит из 3 подсемейств и 9 родов, из которых представители 7 родов патогенны для человека.
Представители подсемейства Alphaherpesvirinae: HSV-1, HSV-2 и VZV.
Представители подсемейства Betaherpesvirinae: CMV, HHV-6, HHV-7.
Представители подсемейства Gammaherpesvirinae: вирус Эпштейна-Барр и HHV-8, обезьяний герпес-вирус Саймири (HVS).
ВПГ-1 и ВПГ-2
Материалом для исследования служат соскобы с роговой оболочки, содержимое везикул, слюна, кровь, спинномозговая жидкость.
Применяют: экспресс-метод, вирусологический и серологический методы.
Экспресс-метод. Световая микроскопия заключается в приготовлении мазков из свежих герпетических высыпаний, окрашивании их по Романовскому-Гимзе и выявлении многоядерных клеток, содержащих ацидофильные внутриядерные включения (тельца Липшютца). Люминесцентная микроскопия проводится с использованием иммунных противогерпетических сывороток.
Вирусологический метод включает индикацию герпесвирусов в культурах клеток по ЦПД – образование гигантских многоядерных клеток, внутриядерных телец-включений, лизис клеток, куриных эмбрионах образование бляшек на хорионаллантоисной оболочке) и на лабораторных животных при введении исследуемого материала в мозг (гибель мыши).
Идентификацию осуществляют в реакции нейтрализации на животных, куриных эмбрионах или клеточных культурах с использованием стандартных противогерпетических иммунных сывороток.
Серологический метод. Определяют антитела и нарастание титров антител к герпес-вирусам в РН ЦПД, РСК и ИФА. Наличие в исследуемой сыворотке специфических Ig М свидетельствует об острой первичной инфекции, наличие Ig G – об обострении хронической инфекции.
Род Varicellovirus (ВГЧ-3, синоним: вирус Varicella zoster).
Материалом для исследования являются содержимое везикул, кровь, спинномозговая жидкость.
Используют экспресс-метод, молекулярно-генетический, вирусологический и серологический методы.
Экспресс-метод. При световой микроскопии в ядрах пораженных клеток выявляются элементарные тельца Арагао. Используются также электронная и люминесцентная микроскопии.
Молекулярно-генетический метод. У больных опоясывающим лишаем применяется ПЦР.
Вирусологический метод. Индикацию осуществляют на клеточных культурах с последующей идентификацией вирусов в РСК и РН ЦПД.
Культивируется в клеточных культурах легких, почек и фибробластов эмбриона человека с образованием внутриядерных включений и агрегацией хроматина в «псевдоядрышки», остановкой деления клеток в метафазе, сморщиванием и разрывом хромосом. ВГЧ-3 не размножается в организме лабораторных животных и на хорион-аллантоисной оболочке куриного эмбриона.
Серологический метод. Исследуются парные сыворотки крови обследуемого в РН ЦПД, РСК и ИФА для выявления антител к ВГЧ-3 и нарастания их титра (при острой инфекции определяются Ig М, при хронической – Ig G).
Род Cytomegalovirus. ВГЧ-5
Материалом для исследования являются слюна, моча, кровь, соскобы со слизистых оболочек и пр.
Используют экспресс-метод, молекулярно-генетический, вирусологический и серологический.
Экспресс-метод. Применяются световая, люминесцентная, электронная микроскопия.
Молекулярно-генетический метод. Применяется ПЦР для накопления вирусного генома с помощью процесса амплификации цитомегаловируса и его идентификации после электрофореза в агаровом или полиакриламидном геле, а также с помощью тест-системы ИФА.
Вирусологический метод. Используют первичные культуры фибробластов кожи и легкого эмбриона человека, миоцитов, диплоидные клетки W1-38. ЦПД проявляется через несколько недель и выражается образованием гигантских округлых клеток, содержащих 1-2 базофильных внутриядерных тельца-включения, примыкающих к ядерной мембране. Пространство между включением и ядерной мембраной остается просветленным, что придает инфицированной клетке вид «совиного глаза». Возможно образование эозинофильных внутрицитоплазматических телец-включений, а также инфицирование тканей без морфологических изменений. ЦМВ выделяется в культуральную среду в незначительных количествах.
Серологический метод. Для выявления антител в сыворотке крови обследуемого и нарастания их титра применяются РСК, РПГА, РН ЦПД, ИФА
Род Roseolovirus. ВГЧ-6, ВГЧ-7
Используют экспресс-метод, молекулярно-генетический метод, вирусологический и серологический.
Экспресс-метод. Применяются световая, люминесцентная, электронная микроскопия.
Молекулярно-генетический метод. Применяется ПЦР для накопления вирусного генома с помощью процесса амплификации ВГЧ-6 и ВГЧ-7 и их идентификации после электрофореза в агаровом или полиакриламидном геле, а также с помощью тест-системы ИФА.
При проведении вирусологического метода лучше всего культивируются в активированных первичных Т-лимфоцитах и в Т-клеточных линиях.
Серологический метод. Для выявления антител в сыворотке крови обследуемого и нарастания их титра применяются ИФА и иммуноблоттинг.
Иммуноблоттинг – метод идентификации антигенов (или антител) с помощью известных сывороток (или антигенов). Представляет собой сочетание гель-электрофореза с ИФА. Первоначально вирионы разрушают при помощи ультразвука, а затем методом электрофореза разделяют все антигены вируса и получают коммерческий реагент на специальной нитроцеллюлозной плёнке. При постановке иммуноблоттинга на плёнку с известными антигенами наносится исследуемая сыворотка пациента. После инкубации и отмывания несвязавшихся антител, приступают к ИФА – на плёнку наносят антисыворотку к иммуноглобулинам человека, меченную ферментом, и хромогенный субстрат, изменяющий окраску при взаимодействии с ферментом. При наличии комплексов антиген-антитело-антисыворотка к иммуноглобулину-ферменту на носителе появляются окрашенные пятна. Метод иммуноблоттинга позволяет отдельно обнаружить антитела на различные антигены возбудителя.
Род Lymphocryptovirus. ВГЧ-4
Используют экспресс-метод, молекулярно-генетический, вирусологический и серологический.
Экспресс-метод. Применяются световая, люминесцентная, электронная микроскопия.
Молекулярно-генетический метод. Применяется ПЦР для накопления вирусного генома с помощью процесса амплификации ВГЧ-4 и его идентификации после электрофореза в агаровом или полиакриламидном геле, а также с помощью тест-системы ИФА.
При проведении вирусологического метода культивируют только в культуре В-лимфоцитов человека и приматов. Инфицирование лимфоцитов ВЭБ приводит к их трансформации в лимфобластоидные клетки, способные продолжительно расти в культурах. Штаммы типа А имеют больший трансформирующий потенциал.
Серологический метод. Для выявления антител в сыворотке крови обследуемого и нарастания их титра применяются ИФА.
Род Rhadinovirus. Вирус герпеса человека 8 типа (ВГЧ-8)
Используют молекулярно-генетический (ПЦР), вирусологический и серологический (ИФА) методы диагностики.
При проведении вирусологического метода для культивирования ВГЧ-8 используют культуру В-лимфоцитов, моноцитов, эндотелиоцитов человека.
Церкопитековый (обезьяний) вирус герпеса типа В (Herpesvirus saimiri).
Материалом для исследования являются везикулярная жидкость, носоглоточные смывы, смывы с кожи и конъюнктивы, кровь, спинномозговая жидкость, трупный материал.
Используют экспресс-метод, молекулярно-генетический (ПЦР), вирусологический и серологический (РСК, РН, ИФА).
Экспресс-метод. Применяются световая, люминесцентная, электронная микроскопия.
Молекулярно-генетический метод. Применяется ПЦР для накопления вирусного генома с помощью процесса амплификации церкопитекового (обезьяньего) вируса герпеса типа В и его идентификации после электрофореза в агаровом или полиакриламидном геле, а также с помощью тест-системы ИФА.
При проведении вирусологического метода вирус культивируют на первичных клеточных культурах почек кролика и обезьян, а также на перевиваемой культуре клеток НеLа. Цитопатический эффект типичный для большинства герпесвирусов. К вирусу чувствительны мышата-сосунки. Последующая идентификация производится в РСК или РН ЦПД.
Серологический метод. Выявляют в сыворотке крови больных вирусоспецифические антитела в РСК, РН ЦПД, ИФА.
Конец формы