Биоинженерия / ТИ_кожа / Культура_кожи

Культура клеток кожи

Самым первым этапом является отбор и транспортировка кусочков кожи от больных для последующего выращивания клеточных пластов.

Кусочки кожи для выращивания клеток можно срезать различными способами (скальпелем, дерматомом, ножом Тирша) под общей и местной анестезией.

Обработка кожи перед отбором лоскутов кожи. Одним из необходимых условий успешного осуществления технологии является отсутствие микробной загрязненности кусочков кожи, взятых для выделения из них клеток. Поэтому, следует тщательно обрабатывать участок, с которого планируется срезать биоптат. Для этого вполне достаточно тщательно промыть избранный участок мыльным раствором или поверхностно-активными веществами (шампунями, моющими порошками). Допускается использование растворов йодопирона, сульйодопирона или их аналогов, при условии, что перед срезанием кожи остатки этих веществ будут удалены. После этого кожу следует 2—3 раза обработать бензином и 2—3 раза протереть 70—90% спиртом. Для обработки кожи вместо бензина можно также использовать диэтиловый эфир.

Обезболивание. В нашей практике чаще всего срезание кожи производили под местной инфильтрационной анестезией 0,25—0,5% раствором новокаина и реже — во время операций или перевязок под наркозом. В результате проведенного анализа сделан вывод, что использование различных видов обезболивания существенно не влияет на жизнеспособность выделенных кератиноцитов. Однако на сей счет существуют и другие мнения. В частности, по мнению М. Tazio, I. Zitelli (1995) срезание кожных лоскутов под местной анестезией смесью лидокаина и адреналина приводит к снижению жизнеспособности клеток. В значительно меньшей степени на витальные функции клеток оказывает анестезия, проводимая одним только лидока-ином.

Толщина срезанного кожного лоскута. Жизнеспособность выделяемых из кусочков кожи кератиноцитов в определенной мере зависит от толщины срезаемых лоскутов кожи. Это связано с особенностями технологии выделения клеток из кожи, а именно, с необ-ходмостью проведения ферментной обработки. В связи с тем, что тонкие расщепленные лоскуты кожи (толщиной 0,2—0,3 мм) лучше пропитываются ферментом, чем более толстые и, тем более, полно-слойные, выделение клеток из них происходит быстрее. Уменьшение продолжительности процедуры трипсинизации снижает опасность избыточного действия фермента и благоприятно сказывается на жизнеспособности кератиноцитов.

аким образом, при отборе кожных лоскутов для выращивания клеток кожи следует стремиться срезать тонкие кожные лоскуты толщиной не более 0,2—0,3 мм.

В какие сроки лучше всего срезать кожные лоскуты для выделения и последующего выращивания клеток. В процессе отработки метода было установлено, что кератиноциты из кожи тяжело-обожженных пролиферируют в культуре значительно хуже, чем клетки, взятые от здоровых доноров. Представляется возможным даже говорить о наличии определенной связи между тяжестью травмы и степенью ухудшения пролиферативных свойств клеток. В ходе проведенных исследований было установлено, что лучше всего выделение и последующее культивирование клеток происходило в случае, если биоптаты кожи были взяты в течение первых суток после получения травмы. Кератиноциты, выделенные из кожи обожженных в периоде токсемии, обладали меньшей жизнеспособностью и проли-феративной активностью. По-видимому, способность клеток кожи расти в культуре во многом зависит от общего состояния организма в момент отбора проб кожи [Терских В. В., Васильев А. В., 1995]. Можно предположить, что метаболические нарушения, характерные для ожоговой болезни, проявляются на уровне каждой отдельно взятой клетки организма, что отрицательно сказывается и на процессе культивирования кератиноцитов. По этой причине биоптаты кожи лучше всего отбирать в первые часы после травмы или непосредственно после выхода пострадавшего из состояния ожогового шока. Отбор проб кожи у доноров для получения аллогенной культуры клеток осуществляется по тем же правилам, что и при использовании аутологичных кератиноцитов. Жизнеспособные клетки можно выделить (и культивировать) даже из кожи трупа, при условии отбора биоптата через небольшие промежутки времени (не позднее 6 часов) после наступления смерти и при хранении трупа на холоде.