полимеразным комплексом, состоит из нескольких доменов и обладает 3 видами активности: обратной тран - скриптазы, РНКазы Н и ДНК-зависимой ДНК-полимеразы.
3. Благодаря наличию обратной транскриптазы РНК-геном вируса в клетке превращается в ДНК-геном и в таком виде интегрируется в хромосому клетки-хозяина, в результате чего она либо погибает (ВИЧ), либо превращается в опухолевую (онковирусы).
4. В связи с тем что функция обратной транскриптазы не контролируется, фермент допускает много ошибок. Это влечет за собой высокую частоту мутаций в генах, кодирующих структурные белки вируса, т. е. его постоянную изменчивость, что создает трудности в создании эффективных вакцин.
5.По структуре нуклеокапсида и расположению его в вирионе ретровирусы подразделяют на 5 форм: А, В, С, D, Е
6.Все ретровирусы имеют общие структурные гены: gag, pol, env.
Семейство Retroviridae включает три подсемейства.
A. Spumavirinae — «пенящие» вирусы; такое название дано потому, что при размножении в культуре клеток происходит интенсивное симпластообразование, которое придает культуре «вспененный» вид. Связи этих вирусов с какими-либо патологическими процессами не установлено.
Б. Oncovirinae — онкогенные вирусы, т. е. вирусы, ответственные за превращение нормальной клетки в опухолевую.
B. Lentivirinae — вирусы — возбудители медленных инфекций. К этому подсемейству относится вирус, вызывающий СПИД.
Онкоге?н — это ген, кодирующий белок, который, в случае нарушения регуляции, может вызвать образование злокачественной опухоли. Считается, что гены-супрессоры опухолей (ГСО) предохраняют клетки от ракового перерождения, и, таким образом, рак возникает либо в случае нарушения работы генов-супрессоров опухолей, либо при появлении онкогенов
Протоонкоген — это обычный ген, который может стать онкогеном из-за мутаций или повышения экспрессии. Многие протоонкогены кодируют белки, которые регулируют клеточный рост и дифференцировку. Протоонкогены часто вовлечены в пути передачи сигнала и в регуляцию митоза, обычно через свои белковые продукты. После активации (которая происходит из-за мутации самого протоонкогена или других генов) протоонкоген становится онкогеном и может вызвать опухоль.
16. Вирус бешенства. Штаммы вирусов бешенства, циркулирующие в природе у животных, называются уличными. Они вызывают заболевания с довольно длительным инкубационным периодом и обычно образуют специфические тельца-включения в цитоплазме клеток. У зараженных животных может наблюдаться длительный период возбуждения и агрессивности.
Специфическая профилактика и лечение. Профилактика заключается в борьбе с бешенством среди животных и предупреждении развития болезни у людей, подвергшихся укусам или ослюнению больным животным. Программу ликвидации бешенства наземных животных необходимо рассматривать в двух аспектах: 1) искоренение городского собачьего бешенства и 2) оздоровление природных очагов рабической инфекции.
При укусах или ослюнении необходимо тщательно промыть рану или кожу в месте попадания слюны мыльной водой, рану прижечь спиртовым раствором йода и начать проведение специфической профилактики антирабической вакциной и анти-рабическим гамма-глобулином. сейчас для профилактики бешенства рекомендована антирабическая инактивиро-ванная культуральная вакцина, которая изготовлена на культуре клеток, инфицированных аттенуированным вирусом бешенства.
Экстренная лечебно-профилактическая вакцинация проводится вакциной или вакциной в сочетании с антирабическим гамма-глобулином по схемам, указанным в наставлениях к их применению. Схема вакцинации определяется степенью тяжести укуса, его локализацией, временем, прошедшим после укуса, информацией об укусившем животном и другими обстоятельствами.
17. Арбовирусы. Под названием «арбовирусы» (лат. Arthropoda — членистоногие и англ. borne — передающийся) в настоящее время понимают вирусы, передающиеся восприимчивым позвоночным (в том числе и человеку) через укусы кровососущих членистоногих.В настоящее время насчитывается около 400 арбовирусов.
Заболевания, вызываемые арбовирусами, могут проявляться в виде трех клинических синдромов:
1) лихорадки недифференцированного типа, часто называемой «денгеподоб-ной», с наличием мелкопятнистой сыпи или без нее и с относительно легким течением;
2)энцефалита, нередко с летальным исходом;
3)геморрагической лихорадки
Клещевой энцефалит
В соответствии с видом переносчика различают два основных типа вируса клещевого энцефалита: персулькатный, восточный (переносчик Ixodes persukatus) и рици-нусный, западный (переносчик Ixodes ricinus)
Примерно в 80 % случаев заражение происходит трансмиссивным путем при укусе клещей и в 20 % случаев — алиментарным путем при употреблении сырого козьего, коровьего или овечьего молока.
Различают три основные формы клещевого энцефалита — лихорадочную, ме-нингеальную и очаговую.
Лабораторная диагностика осуществляется в основном вирусологическим и серологическим методами. Вирус выделяют из крови, ликвора, мочи, реже носоглоточных смывов, испражнений и секционного материала при заражении культур клеток. Типируют вирус в различных вариантах реакции биологической нейтрализации вируса. При серологическом методе обнаруживают специфические в отношении вируса антитела в РСК, нейтрализации, РТГА, иммуносорбентных реакциях.
Лечение симптоматическое. Для профилактики заболевания используют убитую культуральную вакцину.
Японский энцефалит. Японский энцефалит — природно-очаговое заболевание, передающееся комарами рода Сиleх и других родов подсемейства Culicinae.Заболевания японским энцефалитом выявляют ся исключительно в летне-осенний период. Это одно из самых тяжелых заболеваний С наиболее высокой летальностью, составляющей от 20 до 70 и даже 80 %. Основу патогенетических механизмов составляют поражения сосудистой системы как в ЦНС, так и во всех органах и тканях, где вирус интенсивно размножается. Инкубационный период от 4 до 14 дней.
диагностика, лечение профилактика как и при клещевом.
18. Возбудители желтой лихорадки. Желтая лихорадка — острое тяжелое инфекционное заболевание, для которого Характерны сильная интоксикация, двухволновая лихорадка, выраженный геморрагический синдром, поражение почек и печени.Возбудитель желтой лихорадки — вирус, относится к семейству Flaviviridae Во внешней среде малоустойчив; быстро погибает под влиянием обычных дезин-фектантов, в жидкой среде при температуре 60 °С погибает в течение 10 мин, но в высушенном состоянии сохраняется при 100—110 °С в течение 5 ч, в замороженном виде — в течение нескольких лет.
Переносчиками заболевания являются комары. Источником и резервуаром инфекции служат дикие животные, а также больной человек.
Желтая лихорадка существует в двух эпидемиологических формах: лихорадки джунглей и лихорадки населенных пунктов.
Лабораторная диагностика включает использование вирусологического, биологического и серологического методов. Вирус из крови может быть выделен путем заражения куриных эмбрионов или культур клеток. Для идентификации вируса используют реакцию нейтрализации. Биологическая проба заключается в заражении кровью больных внутримозговым путем мышей-сосунков, у которых вирус вызывает смертельный энцефалит. Для обнаружения вирусспецифических антител в парных сыворотках, которые берут через 7—8 дней, используют РСК, РТГА, РН и другое серологические реакции.
Основным методом борьбы с желтой лихорадкой является активная иммунизация в эпидемических очагах с помощью живой вакцины.Вакцинируют детей с первого года жизни и взрослых в дозе 0,5 мл подкожно. Поствакцинальный иммунитет развивается через 10 дней после прививки и сохраняется в течение 10 лет.
Омская геморрагическая лихорадка — эндемическое заболевание, передающееся через укусы клещей рода
Dermacentor.
Лабораторная диагностика. Для диагностики альфа-вирусных и флавивирус-ных инфекций могут быть использованы вирусологический, биологический и серологический методы. Материал от больного человека - кровь (в период вирусемии), ликвор (при развитии признаков менингоэнцефалита), секционный материал (ткань головного мозга) — используется для заражения культур клеток почек и фи-бробластов куриных эмбрионов, заражения куриных эмбрионов в аллантоисную полость и внутримозгового заражения белых мышей. В культурах тканей вирус обнаруживают по цитопатическому эффекту, бляшкообразованию, реакциям гемадсорбции и гемагглютинации. Типируют вирусы в РСК, РТГА, а также с помощью реакции нейтрализации на мышах или в культуре клеток. Для профилактики некоторых флавивирусных инфекций используют вакцины.
Крымская (Конго) геморрагическая лихорадка встречается на юге нашей страны и во многих других странах. Заражение наступает при укусах клещей родов Hyalomma, Rhipicephalus, Dermacentor, а также контактным путем.
Лабораторная диагностика. Буньявирусы могут быть выделены из патологического материала (кровь, секционный материал) при внутримозговом заражении мышей-сосунков, у которых наступают параличи и смерть. Типируют вирусы в реакции нейтрализации, РСК, РПГА и РТГА.
19.Вирусные гепатиты человека, особенности их эпидемиологии. Основные свойства возбудителей. Принципы лабораторной диагностики.
20. Герпесвирусы (герпесвириде, Herpesviridae) это большое семейство ДНК-содержащих вирусов, вызывающее разнообразные болезни не только у человека и других млекопитающих, но и у птиц , рептилий, амфибий, рыб.
Семейство Herpesviridae (греч. herpes — ползучий) по современной классификации подразделяют на 3 подсемейства. Alphaherpesvirinae К ним относятся вирусы простого герпеса 1-го и 2-го типов (соответственно ГВЧ-1* и ГВЧ-2 — род Simplexvirus), вирус ветряной оспы — опоясывающего лишая, или вирус VZV.
Betaherpesvirinae включают вирусы цитомегалии человека и мышей
Gammaherpesvirinae: вирус Эпстайна-Барр, вирус саркомы Капоши, вирус болезни Марека и некоторые герпесвирусы обезьян.
Вирус простого герпеса
Инфекция, вызванная вирусом простого герпеса, может иметь несколько клинических форм, но чаще всего бессимптомна. Обычными клиническими проявлениями бывают везикулярные высыпания на коже и слизистых оболочках. Иногда может быть тяжелый кератит, менингоэнцефалит.
Вирус герпеса типа 1 может вызвать развитие следующих клинических форм заболевания:
1)острый герпетический (афтозный) стоматит развивается чаще у первично инфицированных детей, инкубационный период 3—5 дней, повреждения слизистой заживают через 2—3 нед.;
2)герпетическая экзема (сыпь Капоши, сходная с сыпью при ветряной оспе) сопровождается лихорадкой и пузырьковыми высыпаниями на большей части поверхности тела, иногда наблюдается летальный исход;
3)кератоконъюнктивит; при частых рецидивах может наблюдаться необратимое помутнение роговицы и слепота;
4)менингоэнцефалит; летальность довольно высокая, в случае выздоровления — стойкие остаточные неврологические изменения;
5)герпес губной (лабиалис) — наиболее частая форма
Вирус ветряной оспы может вызывать высококонтагиозное легкое заболевание у детей — ветряную оспу, проявляющуюся в развитии везикулезной сыпи на коже и слизистых. У взрослых (и крайне редко у детей) этот же вирус вызывает опоясывающий лишай
Цитомегаловирус человека. Заболевание характеризуется возникновением крупных внутриядерных включений в слюнных железах, легких, печени, поджелудочной железе, почках, железах внутренней секреции и иногда в мозге.
21. Возбудитель ВИЧ-инфекции.
ВИЧ шаровидной формы, его диаметр 110 нм. Оболочка вируса имеет форму многогранника, составленного из 12 пятиугольников и 20 шестиугольников. В центре и углах каждого шестиугольника расположена молекула гликозилированного протеина gpl20
РНК-геном в клетке с помощью обратной транскриптазы превращается в ДНК-геном.Геном ВИЧ состоит из 9 генов, часть из которых перекрывается концами (имеет несколько рамок считывания) и имеет экзонинтронную структуру. Они контролируют синтез 9 структурных и 6 регуляторных белков.
22. Патогенез ВИЧ-инфекции. Вирус обладает очень высокой скоростью размножения, определяемой его регуляторными элементами. Благодаря наличию белка слияния (gp41) вирус индуцирует образование обширных синцитиальных структур за счет слияния инфицированных и неинфицированных Т-хелперов, следствием чего является их массовая гибель. Образующиеся в большом количестве молекулы белка gpl20 свободно циркулируют в крови и связываются с рецепторами неинфицированных Т-хелперов, в результате чего они также
распознаются и уничтожаются Т-кил-лерами. Вирус может распространяться по межклеточным каналам из клетки в клетку, в этом случае он становится мало доступен антителам.
Лабораторная диагностика. Основным способом диагностики вирусоноси-тельства и ВИЧ-инфекции является иммуноферментный метод. Для этой цели существуют различные тест -системы, с помощью которых обнаруживаются антитела ВИЧ. Однако в связи с тем, что gpl20 имеет структурн ое и антигенное сходство с рецепторами некоторых клеток человека, в том числе с рецепторами, которые осуществляют транспорт иммуноглобулинов через эпителиальные клетки слизистых оболочек, в организме могут появляться антитела, родственные антителам против gpl20. В этом случае могут быть ложнопозитивные результаты ИФМ. Поэтому все положительно реагирующие сыворотки исследуемых подвергаются дополнительному анализу с помощью метода иммуноблотинга, или вестернблотинга. В основе этого метода лежит идентификация исследуемых антител после электрофоретического разделения их и последующего тестирования с помощью меченых антивидовых антител. Вирусологический метод мало применяется из-за сложности культивирования вируса. Клон лимфоцитов Н9 используется для получения вирусных антигенов — необходимых компонентов диагностических тест-систем. Метод ЦПР позволяет выявить вирус уже на раннем этапе вирусемии.
Лечение и профилактика. Современная стратегия лечения ВИЧ-инфицированных основана на принципе комбинированного применения препаратов, ингибирующих вирусную протеазу (один из препаратов) и ревергазу (2 разных препарата), — комбинированная (тройная) терапия. В России для лечения ВИЧ-инфицированных рекомендовано совместное применение 2 отечественных препаратов: фосфазида и криксивана, специфически подавляющих репродукцию ВИЧ на ранних и поздних стадиях размножения, особенно при пониженной активности азидотимидина. С помощью имеющихся препаратов пока удается лишь продлить жизнь больных СПИДом на несколько лет, однако у ВИЧ-1 и ВИЧ-2 вырабатывается резистентность к этим препаратам.
Создание высокоэффективной вакцины против ВИЧ — неотложная фундаментальная проблема.
23. Эпидемиология и патогенез ВИЧ-инфекции.
Источником ВИЧ-инфекции является только человек — больной или вирусоно-ситель. Вирус содержится в крови, сперме, цервикальной жидкости; у кормящих матерей — в грудном молоке. Заражение происходит половым путем, через кровь и ее препараты, а также от матери к ребенку до родов, во время и после родов.
Вирус обладает очень высокой скоростью размножения, определяемой его регуляторными элементами (за 5 мин в активной стадии синтезируется до 5000 вирионов). Благодаря наличию белка слияния (gp41) вирус индуцирует образование обширных синцитиальных структур за счет слияния инфицированных и неинфицированных Т- хелперов, следствием чего является их массовая гибель. Образующиеся в большом количестве молекулы белка gpl20 свободно циркулируют в крови и связываются с рецепторами неинфицированных Т-хелперов, в результате чего они также распознаются и уничтожаются Т-кил-лерами. Вирус может распространяться по межклеточным каналам из клетки в клетку, в этом случае он становится мало доступен антителам.
Особо опасные инфекции.
1. Возбудитель чумы. Y. pestis имеет длину 1—2 мкм и толщину 0,3—0,7 мкм. В мазках из организма больного и из трупов погибших от чумы людей и грызунов выглядит как короткая овоидная (яйцевидная) палочка с биполярной окраской. В мазках из бульонной
культуры палочка располагается цепочкой, в мазках из агаровых культур — беспорядочно. по Граму окрашивается отрицательно.спор не образует, жгутиков не имеет. Оптимальная для роста температура 27— 28 °С
на жидких и плотных питательных средах: на бульоне он проявляется образованием рыхлой пленки, от которой спускаются нити в виде сосулек, напоминающих сталактиты, на дне — рыхлый осадок, бульон остается прозрачным. Развитие колоний на плотных средах проходит через три стадии: через 10—12 ч под микроскопом рост в виде бесцветных пластинок (стадия «битого стекла»); через 18—24 ч — стадия «кружевных платочков», при микроскопи-ровании заметна светлая кружевная зона, расположенная вокруг выступающей центральной части, желтоватой или слегка буроватой окраски. Через 40—48 ч наступает стадия «взрослой колонии» - буровато-очерченный центр с выраженной периферической зоной. На средах с кровью колонии У. pestis зернистые со слабо выраженной периферической зоной.
Для У. pestis характерно наличие капсуль-ного антигена (фракция I), антигенов Т, V—W, белков плазмокоагулазы, фибрино-лизина, белков наружной мембраны и рН6-антигена.
Основным источником чумы в природе являются грызуны и зайцеобразные.Чумной микроб размножается в просвете пищеварительной трубки блох. В ее переднем отделе образуется пробка («чумной блок»), содержащая большое количество микробов. При укусе млекопитающих с обратным током крови в ранку с пробки смывается часть микробов, что и ведет к заражению.
Заражение человека происходит через укус блох, при прямом контакте с заразным материалом, воздушнокапельным, редко алиментарным путем (например, при употреблении мяса верблюдов, больных чумой)
2. Микроскопический диагноз чумы.
Лабораторная диагностика. Используются бактериоскопический, бактериологический, серологический и биологический методы, а также аллергическая проба с пе-стином (для ретроспективной диагностики). Материалом для исследования служат: пунктат из бубона (или его отделяемое), мокрота, кровь, при кишечной форме - испражнения. У. pestis идентифицируют на основании морфологии, культуральных, биохимических признаков, пробы с чумным фагом и с помощью биологической пробы.
Простым и надежным методом определения антигенов чумной палочки в иссле-дуемом материале является применение РПГА, особенно с использованием эритро-цитарного диагностикума, сенсибилизированного моноклональными антителами к капсульному антигену, и ИФМ. Эти же реакции могут быть использованы для об-наружения антител в сыворотке больных.
Биологический метод диагностики заключается в заражении исследуемым мате-риалом (когда он очень загрязнен сопутствующей микрофлорой) морской свинки накожно, подкожно или, реже, внутрибрюшинно.
При работе с материалом, содержащим возбудителя чумы, требуется соблюдение строгого режима, поэтому все исследования проводятся только хорошо обученным персоналом в специальных противочумных учреждениях.
Профилактика. Постоянный контроль за природными очагами чумы и органи-ция мероприятий по предупреждению заболеваний людей в стране осуществляет-ся специальной противочумной службой. Она включает в себя пять противочумных иститутов и десятки противочумных станций и отделений.
Несмотря на наличие природных очагов, с 1930 г. на территории России в них не было ни одного случая заболевания людей чумой. Для специфической профилактики чумы используется живая ослабленная вакцина из штамма EV. Она вводится накожно, внутрикожно или подкожно. Кроме того, предложена сухая таблетирован - ная вакцина для перорального применения. Поствакцинальный иммунитет формируется к 5—6-му дню после прививки и сохраняется в течение 11—12 мес.
3. Возбудитель сибирской язвы.
Возбудитель - Bacillus anthracis относится к семейству Bacillaceae (класс Bacilli). Это крупная палочка длиной 5—8, иногда до 10 мкм, диаметром 1,0—1,5 мкм. Концы у живых палочек слегка закруглены, у убитых они как бы обрублены и слегка вогнуты. Палочки в мазках располагаются парами и очень часто — цепочками, особенно длинными на питательных средах, напоминая бамбуковую трость. Сибиреязвенная палочка хорошо красится всеми анилиновыми красителями, грамположительна. Жгутиков не имеет, образует споры, но только вне организма человека или животного при наличии кислорода и определенной влажности. Температурный оптимум для спорообразования 30—35 °С Споры располагаются центрально. Возбудитель сибирской язвы образует капсулу, но только в организме животного или человека, на питательных средах она наблюдается редко. Возбудитель сибирской язвы — аэроб или факультативный анаэроб. Температурный оптимум для роста 37-38 °С, рН среды 7,2-7,6. К питательным средам нетребователен. На плотных средах образует характерные крупные матовые шероховатые колонии R-формы. Структура колоний, благодаря цепочечному расположению палочек, которые образуют нити, отходящие от центра, имеет сходство с локонами или львиной гривой (рис. 98). На агаре, содержащем пенициллин (0,05-0,5 ЕД/мл), через 3 ч роста бациллы распадаются на отдельные шарики, располагающиеся в виде цепочки, образуя феномен «жемчужного ожерелья». В бульоне палочка, находяша-яся в R-форме, растет на дне, образуя осадок в виде комочка ваты, бульон при этом остается прозрачным. ферментирует с образованием кислоты без газа глюкозу, сахарозу, мальтозу, трегалозу, образует H2S, свертывает молоко и пептонизирует его, каталазопо-зитивна, имеет нитратредуктазу.
4. Микробиологический диагноз сибирской язвы
Лабораторная диагностика. Материалом для исследования служат: при кожной форме — содержимое пузырьков, отделяемое карбункула или язвы; при кишеч-ной — испражнения и моча; при легочной — мокрота; при септической — кровь. Ис-следованию могут подвергаться различные объекты внешней среды (почва, вода), пищевые продукты, сырье животного происхождения и прочий материал. Для обнаружения возбудителя используют бактериоскопический метод: обнаружение грам-положительных палочек, окруженных капсулой (в материале от животных или человека) или содержащих споры (объекты внешней среды). Основной метод
диагностики — бактериологический — выделение чистой культуры и ее идентификация, с обязательной проверкой на патогенность для лабораторных животных. В случаях, когда исследуемый материал сильно загрязнен сопутствующей, особенно гнилост-иой, микрофлорой, используют биологическую пробу: подкожно заражают белых мышей или морских свинок. При наличии В. anthracis мыши и морские свинки поги-бывают через 24—26 ч, кролики — через 2—3 сут., при явлениях общего сепсиса; селе-
зенка резко увеличена, в месте введения материала — инфильтрат. В препаратахмазках из крови и органов — капсульные палочки.
Из числа серологических реакций с диагностической целью применяется главнымобразом реакция термопреципитации Асколи. Ее используют в тех случаях, когда трудно рассчитывать на выделение чистой культуры возбудителя (в частности, при исследовании шерсти, шкур, щетины и прочих предметов). Реакция Асколи основана на обнаружении термостабильных антигенов возбудителя, которые сохраняются гораздо дольше, чем жизнеспособные вегетативные клетки и споры сибиреязвенной палочки. Для ретроспективной диагностики сибирской язвы используют аллергическую пробу с антраксином.
В настоящее время в России для профилактики сибирской язвы у людей и животных применяют живую споровую бескапсульную вакцину СТИ, которая готовится из авирулентного штамма сибиреязвенной палочки. Вакцина высоко эффективна. Прививки проводят однократно накожно или вну-трикожно тем лицам, у которых в силу их профессии существует возможность заражения сибирской язвой. Ревакцинацию проводят через год.
5. Возбудитель туляремии. Francisella tularensis. К этому же роду относится F. novicida.
Это очень маленькие (см. цв. вкл., рис. 96.2), размерами 0,2—0,7 мкм кокковидные или эллипсоидные полиморфные палочки, которые очень часто при специальных методах окрашивания дают биполярную окраску; йеподвижны, грамотрицательны, спор не образуют; каталазонегативны, образуют HjS, строгие аэробы, температурный оптимум для роста 37 °С. рН 6,7—7,2. Вирулентные штаммы имеют капсулу, образуют кислоту без газа при ферментации некоторых углеводов (глюкоза, мальтоза, манноза, фруктоза, декстрин)
Г. Мак-Кой и Ш. Чепин использовали свер-нутую желточную среду. На ней туляремийная палочка растет в виде нежных мелких колоний, напоминающих капельки росы, затем культура приобретает характер неж -ного шагреневого налета со слабо выраженной слизистой консистенцией. Э. Френсис предложил для выращивания туляремийной палочки питательный агар, содержащий 0,05—0,1 % цистина, 1 % глюкозы и 5—10 % крови. На такой среде рост более пышный и грубый: колонии круглые с гладкой поверхностью, молочного цвета, влажные, со слизистой консистенцией, окружены характерным зеленым ореолом.
F. tularensis в S-форме (вирулентный) имеет два антигена — О и Vi (капсульный антиген)
Основным резервуаром туляремии в природе являются грызуны, среди которых в естественных условиях наблюдаются эпизоотии. Человек заражается только от животных, от человека к человеку возбудитель не передается. Возбудитель обнаружен у 82 видов грызунов и зайцеобразных, наиболее часто встречается у представителей 4 семейств: мышевидных (Muridae), заячьих (Leporidae), беличьих (Sciuridae) и тушканчиковых
(Dipodidae).
Заражение человека происходит всеми возможными способами: прямым и непрямым контактом с больными грызунами, их трупами или с предметами, зараженными грызунами; алиментарным (при употреблении пищевых продуктов и воды, инфицированных грызунами), воздушно-пылевым и трансмиссивным путем.
6. Методы микробиологической диагностики туляремии.
Лабораторная диагностика. В связи с полиморфной клинической картиной ту-ляремии в ее диагностике решающее значение имеют лабораторные методы: бакте-риологический, биологический, серологические реакции и аллергическая проба. Бактериологический метод имеет существенную особенность: выделить возбудителя от больного человека непосредственно не удается. Поэтому исследуемым материалом (пунктат бубона, гной из конъюнктивы, пленка из зева, мокрота, испражне-ния, кусочки органов из трупов грызунов) вначале заражают подкожно белых мышей или морских свинок, а затем уже делают посев крови или материала из органов для получения чистой культуры, которую идентифицируют по морфологичес-ким, культуральным (не растет на обычных средах) свойствам, по реакции агглютинации со специфической сывороткой и окончательно — биологической пробой на белых мышах.
F. tularensis можно выделить также путем заражения в желточный мешок куриных эмбрионов. Возбудитель легко в нем обнаруживается с помощью метода им-
мунной флуоресценции. Однако биологические пробы и бактериологические иссле-
дования по туляремии возможно проводить только в специальных лабораториях. В обычных клинических условиях для диагностики туляремии применяют только серологические реакции (со 2-й нед. развернутая пробирочная агглютинация, РПГА.)
и аллергическую пробу с тулярином. Последняя является наиболее ранним
методом специфической диагностики. При внутрикожной постановке она бывает положительной с 3—5-го дня болезни, при накожной — с 6—8-го дня. В природных очагах туляремии для контроля эпизоотии среди грызунов используют РПГА и ее варианты (РНАг, РТПГА), а также ИФМ с целью обнаружения антигенов туляре -мийной палочки в трупах грызунов, погадках хищных птиц, помете хищников.
Специфическая профилактика. Основным методом предупреждения заболевания людей, проживающих на территории природных очагов туляремии, является вакцинация, осуществляемая с помощью живой (ослабленной) сухой накожной вакцины. Вакцину вводят однократно, иммунитет не менее 5—7 лет.
7. Возбудитель бруцеллеза. Характеристика его свойств. Виды и биовары бруцелл и методы их дифференциации.
В. melitensis подразделяют на 3 биовара, вид В. abortus — на 9 и В. suis — на 5 биова-ров.
Для их дифференциации на виды и биотипы и идентификации используют комплекс признаков, включающий в себя, помимо морфологических и тинкториальных свойств, также потребность в СО2 для роста, способность расти на средах в присутствии некоторых красителей (основной фуксин, тионин, сафранин), выделять H2S, образовывать уреазу, фосфатазу, каталазу (активность этих ферментов наиболее сильно выражена у В. suis, они же не растут на среде с сафранином), чувствительность к тбилисскому бактериофагу, агглютинация моноспецифическими сыворотками
Бруцеллы обладают сходными морфологическими, тинкториальными и культуральными свойствами. Они представляют собой грамотрицательные мелкие кокко-видные клетки диаметром 0,5—0,7 мкм и длиной 0,6— 1,5 мкм. располагаются беспорядочно, иногда парами, не имеют жгутиков, не образуют спор и капсул. Бруцеллы являются аэробами или микроаэрофилами. Температурный оптимум для роста 36—37 °С; рН 7,0—7,2; хорошо растут на обычных питательных средах, но лучше — с добавлением сыворотки или крови.Рост бруцелл в бульонных средах сопровождается равномерным помутнением. Колонии В. canis, В. ovis и 5-го биотипа В. suis всегда имеют R-форму. Для роста бруцелл необходимы тиамин, биотин, ниацин. Бруцеллы ферментируют глюкозу и арабинозу с образованием кислоты без газа, не образуют индола, восстанавливают нитраты в нитриты. Образование сероводорода наиболее сильно выражено у В. suis.
обнаружено 10—14 антигенных фракций. Бруцеллы имеют общий родоспецифический антиген, различные другие соматические антигены, в том числе видоспецифические М (преобладает У В. melitensis), А (преобладает у В. abortus) и R (у шероховатых форм).
8. Возбудитель бруцеллеза. Характеристика его свойств. Виды и биовары бруцелл. Резервуары бруцеллеза в природе.
Возбудитель бруцеллеза. Характеристика его свойств. Виды и биовары бруцелл и методы их дифференциации.
В. melitensis подразделяют на 3 биовара, вид В. abortus — на 9 и В. suis — на 5 биова-ров.
Бруцеллы обладают сходными морфологическими, тинкториальными и культуральными свойствами. Они представляют собой грамотрицательные мелкие кокко-видные клетки диаметром 0,5—0,7 мкм и длиной 0,6— 1,5 мкм. располагаются беспорядочно, иногда парами, не имеют жгутиков, не образуют спор и капсул. Бруцеллы являются аэробами или микроаэрофилами. Температурный оптимум для роста 36—37 °С; рН 7,0—7,2; хорошо растут на обычных питательных средах, но лучше — с добавлением сыворотки или крови.Рост бруцелл в бульонных средах сопровождается равномерным помутнением. Колонии В. canis, В. ovis и 5-го биотипа В. suis всегда имеют R-форму. Для роста бруцелл необходимы тиамин, биотин, ниацин. Бруцеллы ферментируют глюкозу и арабинозу с образованием кислоты без газа, не образуют индола, восстанавливают нитраты в нитриты. Образование сероводорода наиболее сильно выражено у В. suis.
обнаружено 10—14 антигенных фракций. Бруцеллы имеют общий родоспецифический антиген, различные другие соматические антигены, в том числе видоспецифические М (преобладает У В. melitensis), А (преобладает у В. abortus) и R (у шероховатых форм).
Основными носителями бруцелл являются овцы, козы (В. melitensis), крупный рогатый скот (В. abortus), свиньи (В. sub) и северные олени. Особенно большую эпидемиологическую опасность представляет переход Brucella
melitensis на крупный рогатый скот, так как в этом случае она сохраняет свою высокую патогенность для человека. Из всех видов наиболее патогенным для человека в нашей стране является В. melitensis.
Особенности патогенеза. Инкубационный период при бруцеллезе варьирует от 1 нед. до нескольких месяцев.
По лимфатическим путям возбудитель попадает в лимфатические узлы; размножаясь, образует «первичный бруцеллезный комплекс», локализация которого зависит от места входных ворот, но чаще всего это лимфатический аппарат ротовой полости, заглоточные, шейные, подчелюстные железы и лимфатический аппарат кишечника. Из лимфатических узлов возбудитель проникает в кровь и распространяется по всему организму, избирательно поражая ткани лимфо-гемопоэтической системы. Бактериемия и генерализация процесса приводят к сильной аллергизации организма.
9. Методы микробиологической диагностики бруцеллеза.
Лабораторная диагностика бруцеллеза осуществляется с помощью биологической пробы, бактериологического метода, серологических реакций, аллергической пробы Бюрне и метода ДНК—ДНК гибридизации. Материалом для исследования служат кровь, костный мозг, конъюнктивальный секрет, моча, грудное молоко (у кормящих матерей), реже — испражнения, околосуставная жидкость. Поскольку основным местом пребывания возбудителя в организме являются клетки гемоили лимфопоэтической систем, предпочтение следует отдавать выделению гемоили миелокультуры. При бактериологическом исследовании необходимо обеспечить условия для роста В. abortus (потребность в СО2). Идентификацию выделенных культур бру целл проводят на основании указанных в табл. 30 признаков. К биологической пробе (заражение морских свинок) прибегают в том случае, когда материал сильно загрязнен посторонней микрофлорой и получить непосредственно из него чистую культуру возбудителя трудно. Серологические реакции могут быть использованы либо для обнаружения антигенов возбудителя, либо для выявления антител к нему. Для обнаружения бруцеллезных антигенов, которые могут циркулировать в крови либо в свободном виде, либо в виде комплексов антиген + антитело (ЦИК
— циркулирующие иммунные комплексы), используют следующие реакции: РПГА (особенно с использованием эритроцитарных диагностикумов с моноклональными антителами к родоспецифическому антигену бруцелл); реакцию агрегат-гемагглю-тинации (РАГА); эритроциты несут антитела к бруцеллезным антигенам; реакции коагглютинации, преципитации и ИФМ. Для обнаружения антител в сыворотке больного используют: реакцию агглютинации Райта, реакцию Кумбса (для выявления неполных антител), реакцию иммунофлуоресцен ции в непрямом варианте, рПГА, ИФМ, РСК, ОФР, а также ускоренные реакции на стекле: Хеддльсона, роз-бенгал, латекс-агглютинации, непрямую реакцию гемолиза (эритроциты, сенсибилизированные ЛПС бруцелл, в присутствии антител и комплемента лизируются).
Специфическая профилактика осуществляется с помощью живой вакцины, приготовленной из штамма В. abortus (живая бруцеллезная вакцина — ЖБВ), только в очагах козье-овечьего бруцеллеза. Вакцина применяется накожно, однократно. Ревакцинацию проводят только лицам, у которых проба Бюрне и серологические реакции отрицательны.
10. Серологические методы диагностики бруцеллеза. Серологические реакции могут быть использованы либо для обнаружения антигенов возбудителя, либо для выявления антител к нему. Для обнаружения бруц еллезных антигенов, которые могут циркулировать в крови либо в свободном виде, либо в виде комплексов антиген + антитело (ЦИК — циркулирующие иммунные комплексы), используют следующие реакции: РПГА (особенно с использованием эритроцитарных диагностикумов с моноклональными антителами к родоспецифическому антигену бруцелл); реакцию агрегат-гемагглю-тинации (РАГА); эритроциты несут антитела к бруцеллезным антигенам; реакции коагглютинации, преципитации и ИФМ. Для обнаружения антител в сыворотке больного используют: реакцию агглютинации Райта, реакцию Кумбса (для выявления неполных антител), реакцию иммунофлуоресценции в непрямом варианте, рПГА, ИФМ, РСК, ОФР, а также ускоренные реакции на стекле: Хеддльсона, роз-бенгал, латекс-агглютинации, непрямую реакцию гемолиза (эритроциты, сенсибилизированные ЛПС бруцелл, в присутствии антител и комплемента лизируются).
ПАТОГЕННЫЕ
1. Неклостридиальная анаэробная микрофлора. Состав группы, роль в патологии человека.
2. Микрофлора почвы
Состав микрофлоры почвы зависит от ее типа и состояния, состава растительности, темпера¬туры, влажности. В почве живут азотфиксирующие бакте¬рии, способные усваивать молекулярный азот (Azotobacter,, Mycobacterium.). Почва является местом обитания спорообразуюших палочек родов Bacillus и Closlridium. Патогенные спорообразующие палочки (воз¬будители сибирской язвы, ботулизма, столб¬няка, газовой гангрены) способны длительно сохраняться, а некоторые даже размножаться в почве (Clostridium botulinum).
Кишечные бактерии (сем. Enterobacteriaceae) — кишечная палочка, возбудители брюшного тифа, сальмонеллезов, дизенте¬рии — могут попадать в почву с фекалиями. Обнаружение их в значительных количествах является показателем загрязнения почвы фекалиями человека и животных.
В почве находятся грибы, они участвуют в почвообразовании. Токсинообразующие грибы, попадая в продукты питания – вызывают интоксикацию.
Состав микрофлоры почвы зависит от ее типа и состояния, состава растительности, темпера¬туры, влажности. Большинство почвен¬ных микроорганизмов способны развиваться при нейтральном рН, высокой относительной влажности, температуре от 25 до 40С.
Почва является местом обитания спорообразуюших палочек родов Bacillus и Closlridium. Патогенные спорообразующие палочки (воз-будители сибирской язвы, ботулизма, столб¬няка, газовой гангрены) способны длительно сохраняться, а некоторые даже размножаться в почве (Clostridium botulinum).
Кишечные бактерии (сем. Enterobacteriaceae) — кишечная палочка, возбудители брюшного тифа, сальмонеллезов, дизенте¬рии — могут попадать в почву с фекалиями. Обнаружение их в значительных количествах является показателем загрязнения почвы фекалиями человека и животных
3. Возбудители газовой анаэробной инфекции. Характеристика их свойств. Патогенез заболевания. Микробиологический диагноз. Специфическая профилактика и терапия.
Газовая гангрена является полимикробной инфекцией. К ее возбудителям относят: С. perfringens, С. novyi, С. septicum, С. histolyticum, С. sordellii, С. difficile и С. sporogenes. Первое место в этиологии газовой гангрены принадлежит С. perfringens, второе — С. novyi. Нормальный обитатель кишечника человека и животных, в почве в виде спор сохраняется годами и обнаруживается почти в 100 % ее образцов. Представляет собой толстую неподвижную грамположитель-ную палочку со слегка закругленными концами, длиной 3,0—9,0 мкм и диаметром 0,9—1,3 мкм. Споры овальные, располагаются субтерминально или, чаще, центрально, образуются лучше в щелочной среде. В материале из ран и на среде с сывороткой образуют капсулу.
Газовая гангрена — это своеобразный патологический процесс, который дает различные клинические проявления в зависимости от места локализации. Различают следующие формы этой болезни: анаэробная инфекция мягких тканей конечностей и туловища; анаэробная инфекция мозга; послеродовая или послеабортная анаэробная инфекция; анаэробная инфекция органов брюшной полости и брюшины; анаэробная инфекция органов грудной полости и анаэробный остеомиелит.
Лабораторная диагностика. Материалом для исследования служат кусочки пораженных тканей (некротизированная и пограничные с ней участки) и отечная жидкость. Кроме того, исследованию в случае необходимости подвергают перевязочный и шовный материал (шелк, кетгут), одежду, образцы почвы; при пищевых интоксикациях, вызванных клостридиями, — испражнения и продукты. Микробиологическая диагностика заключается в выделении из исследуемого материала возбудителя и его идентификации, основанной на изучении морфологических, культуральных, биохимических свойств и определении токсигенности. Исследование состоит из нескольких этапов:
1)бактериоскопия отделяемого раны или экссудата;
2)выделение возбудителя и его идентификация;
3)заражение белых мышей исследуемым материалом, фильтратом бульонной культуры или кровью больных для обнаружения токсина;
4)идентификация токсина клостридий с помощью реакций нейтрализации специфическими антитоксическими сыворотками в биологических пробах на белых мышах или культурах клеток (С. difficile).
Главный метод предупреждения газовой гангрены — своевременная и правильная хирургическая обработка ран. В случае особо тяжелых ранений, которые могут повлечь развитие газовой гангрены, больному с профилактической целью вводят по 10 000 ME антитоксических сывороток против наиболее частых возбудителей — С. perfringem, С. novyi и С. septicum. С лечебной целью вводят те же сыворотки по 50 000 ME. При
отсутствии эффекта сыворотки вводят повторно. Серотерапия должна обязательно сочетаться с эффективной антибиотикотера-пией и соответствующим общеукрепляющим лечением.
Специфическая профилактика. Для создания искусственного иммунитета против анаэробной инфекции созданы препараты из различных анатоксинов, однако широкого применения они не получили.
4. Возбудитель столбняка, характеристика его свойств. Столбнячный токсин, его функции, механизм действия. Анатоксин. Специфическая профилактика и терапия столбняка
С. tetani — прямая палочка длиной 2,4—5,0 мкм, диаметром 0,5—1,1 мкм, иногда образующая длинные нити. Большинство штаммов подвижно (перитрихи). Споры круглые, располагаются терминально, придавая возбудителю вид булавки или барабанной палочки Грамположительна, но в старых культурах становится грамотри-цательной. Капсулы не образует
Главным фактором патогенности С. tetani, определяющим патогенез и клинику столбняка, является вырабатываемый им сильнейший экзотоксин. Смертельная доза его для человека составляет менее 2 нг/кг массы тела. Экзотоксин состоит из двух фракций — тетаноспазмина (нейротоксина) и тетаноли-зина (разрушает эритроциты).
Тетанолизин выделяется из клеток с первых дней развития культуры с помощью механизма активного транспорта. Тетаноспазмин через клеточную стенку клостридий не проходит, а выделяется в культуральную жидкость лишь при распаде микробных клеток, главным образом в фазе их ускоренной гибели, поэтому он накапливается в бульонной культуре к 5—7-му дню инкубации.
Тетаноспазмин синтезируется внутриклеточно в виде неактивного протоксина — одноцепочечного полипептида. Превращение протоксина в активный нейротоксин происходит после лизиса микробной клетки и осуществляется бактериальной протеазой, которая разрезает полипептид на две части. Активный внеклеточный нейротоксин («разрезанный» токсин) состоит из двух связанных между собой дисульфидными связями цепей: легкой — L (около 50 кД) и тяжелой -Н (около 100 кД).
Специфическое лечение и плановая профилактика столбняка.
Лечение. Для специфического лечения столбняка применяют противостолбнячную антитоксическую сыворотку, получаемую путем гипериммунизации лошадей столбнячным анатоксином и токсином. Сыворотка применяется в дозе 350 МЕ/кг веса больного. Сыворотку вводят после десенсибилизации внутримышечно (или внутривенно, это должно быть указано в инструкции). Лечение начинают при появлении первых симптомов столбняка, сыворотку вводят повторно до исчезновения рефлекторных судорог. Получен иммунохимически чистый столбнячный антитоксин, который, благодаря более высокой удельной активности и более длительной персистенции в организме, обеспечивает терапевтический эффект лучше, чем антитоксическая сыворотка, очищенная методом Диаферм-3. Хороший терапевтический эффект дает и гомологичный иммуноглобулин, т. е. иммуноглобулин людей, иммунизированных против столбняка. Серотерапию необходимо сочетать с антибиотикотерапией (пенициллины, цефалоспорины).
Специфическая профилактика столбняка включает два вида мероприятий.
1.Проведение плановой активной иммунизации детей и взрослых против столбняка.
2.Экстренная иммунопрофилактика в связи с травмами.
5.
Микробиологическая диагностика столбняка.
Наиболее простым и эффективным методом микробиологической диагностики столбняка является биологическая проба на белых мышах. С этой целью исследуемый материал (растертые в физиологическом растворе кусочки некротизированной ткани, гной и иной материал) или фильтрат изучаемой культуры делят на две фракции. Одну из них смешивают с антитоксической сывороткой и оставляют смесь при комнатной температуре на 40 мин (для нейтрализации токсина). После этого заражают белых мышей нативным матепиалом и смесью его с антитоксической сыворот-
Наиболее простым и эффективным методом микробиологической диагностики столбняка является биологическая проба на белых мышах. С этой целью исследуемый материал (растертые в физиологическом растворе кусочки некротизированной ткани, гной и иной материал) или фильтрат изучаемой культуры делят на две фракции. Одну из них смешивают с антитоксической сывороткой и оставляют смесь при комнатной температуре на 40 мин (для нейтрализации токсина). После этого заражают белых м ышей нативным материалом и смесью его с антитоксической сывороткой. При наличии в нативном материале столбнячного токсина опытные мыши погибают; контрольные мыши, которым вводят смесь нативного материала с
