Лечебное дело микро / книга / Основы частной микробиологии-4-4

Микробиологическая диагностика

Исследуемым материалом для лабораторной диагностики бруцеллеза служат: кровь, костный мозг, моча, грудное молоко (у кормящих матерей), пунктат лимфатических узлов. Основные методы диагностики – бактериологический,

биологический, серологический, аллергический. Для выделе-

ния чистой культуры материал засевают в две пробирки с мясопептонным печеночным бульоном, одну из которых инкубируют в анаэробных условиях, а к другой добавляют 10% углекислого газа. Затем из пробирки с признаками роста делают высев на плотную питательную среду. Выделенная культура идентифицируется: по способности расти на средах с красителями, образованию сероводорода, чувствительности к Тб-фагу (тбилисский фаг), реакции агглютинации с монорецепторными сыворотками. Биологическая проба проводится на морских свинках. Этот метод актуален в тех случаях, когда исследуемый материал контаминирован другими микроорганизмами и выделение чистой культуры из-за этого затруднено. Серологические методы включают постановку реакций агглютинации Хеддльсона и Райта. Первая ставится на стекле и актуальна при массовых обследованиях, так как дает возможность выявлять агглютинины в первые дни болезни и быстро получать результат. Для определения титра антител ставят развернутую реакцию Райта в пробирках. Используется также РНГА с эритроцитарным диагностикумом, РИФ, опсоно-фагоцитарная реакция, латекс-агглютинация. Для выявления неполных антител ставят реакцию Кумбса. Аллергический метод включает постановку внутрикожной пробы Бюрне с аллергеном бруцеллином. Положительной считается реакция, когда диаметр отека больше 2–3 см.

31

Лечение и профилактика

Для лечения бруцеллеза применяют антибиотики (стрептомицин, пенициллин, левомицетин, тетрациклины, эритромицин). Специфическая профилактика проводится по эпидемиологическим показаниям и лицам, входящим в профессиональные группы риска. С этой целью используют живую бруцеллезную вакцину (ЖБВ), приготовленную из штамма B.abortus. Недостатком этой вакцины является ее сильное аллергенное действие. Поствакцинальный иммунитет сохраняется в течение 1 года. Вместо вакцины ЖБВ предложена менее аллергенная химическая бруцеллезная вакцина (ХБВ), содержащая антигены клеточной стенки бруцелл. Указанные вакцины используют и для лечения хронических форм бруцеллеза.

2.2. ВОЗБУДИТЕЛЬ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ

Характеристика возбудителя

Возбудитель сибирской язвы Bacillus anthracis относится к роду Bacillus семейства Bacillaceae. Микроорганизм представляет собой неподвижную грамположительную палочку со слегка закругленными концами. Капсула образуется в организме человека и животных и на специальных кровяных или сывороточных средах. При неблагоприятных условиях возбудитель образует центрально расположенную спору. Бациллы сибирской язвы располагаются поодиночке, парами, но чаще цепочками (стрептобациллы).

Тип дыхания – аэробный. Растет на простых питательных средах при температуре +37˚С, рН 7,2–7,6 и образует на плотных средах колонии R-формы, похожие на гриву

32

льва. Такой тип колоний характерен для вирулентных штаммов. Слабовирулентные и авирулентные штаммы образуют S-формы колоний. В жидких средах дают придонный рост в виде осадка, похожего на комочек ваты.

Микроорганизм активен в биохимическом отношении. Он ферментирует глюкозу, мальтозу, сахарозу, трегалозу до кислоты, образует при разложении белков сероводород, пептонизирует молоко, превращает нитраты в нитриты и разжижает желатину.

Антигенная структура представлена соматическим и капсульным антигенами. Соматичекий антиген полисахаридной природы термостабилен, не разрушается при кипячении и выявляется в реакции термопреципитации по Асколи. Капсульный антиген имеет белковую природу и обусловливает антифагоцитарное действие.

К факторам патогенности Bacillus anthracis относятся капсула и экзотоксин. Потеря капсулы приводит к утрате патогенности. Экзотоксин представляет собой комплекс из 3 факторов, различающихся по химической природе и действию на макроорганизм, – фактор отечности, протективный антиген и летальный фактор. Синтез каждого фактора кодируется специальными генами. Наибольшей иммуногенностью обладают все 3 фактора в комплексе.

Возбудитель сибирской язвы в вегетативной форме достаточно быстро погибает под действием как физических, так и химических факторов. Высокой степенью устойчивости обладают споры, которые сохраняются десятилетиями и даже столетиями в почве, несколько лет не погибают в воде, выдерживают кипячение в течение 1 ч. и воздействие прямых солнечных лучей до 20 сут. и более. Споры долго сохраняются в шерсти и шкурах погибших животных и в засоленном мясе.

33

Эпидемиология, патогенез, клинические проявления, иммунитет

Сибирская язва – особо опасная зоонозная инфекция, которая получила свое название в связи с эпидемией, возникшей на Урале в конце XIX в. Эпидемиология этой болезни имеет особенность, состоящую в том, что от человека к человеку эта инфекция не передается (тем не менее при заболевании людей их изолируют и предпринимают необходимые меры предосторожности).

Источником инфекции являются больные животные (преимущественно травоядные – крупный и мелкий рогатый скот, лошади, верблюды, свиньи и др.). Они заражаются через корм или воду, в которых находятся споры возбудителя. Иногда сибиреязвенная бацилла может быть передана трансмиссивно при укусе мух, оводов, слепней и других кровососущих насекомых. Эти насекомые являются неспецифическими переносчиками, поскольку возбудитель не проходит никаких циклов развития в их организме. Человек может заразиться сибирской язвой при уходе за больными животными, разделке туш, употреблении мяса, а также при обработке кожи и меха. Существуют профессиональные группы риска: животноводы, ветврачи, работники боен, мясокомбинатов, предприятий кожевенной и меховой отраслей производства.

Входные ворота инфекции – кожа (чаще поврежден-

ная), слизистые оболочки дыхательных путей и пищеварительного тракта.

Инкубационный период – от 6 до 8 дней, чаще 2–3 дня.

Отмечен и еще более короткий период, составивший 15– 20 ч. Сибирская язва в зависимости от места проникновения возбудителя и вызываемых им поражений может протекать в нескольких клинических формах: кожной, кишечной, легочной и септической. При кожной форме в месте локализации возбудителя образуется карбункул – очаг геморрагического

34

некроза, покрытый блестящей корочкой черного цвета, похожей на каменный уголь – антрацит. Отсюда и латинское название болезни «anthrax» – углевик и название возбудителя – Bacillus anthracis. Нагноившийся карбункул вскрывается

иобразуется язва. Кишечная форма проявляется общей интоксикацией и сопровождается тошнотой, рвотой с примесью крови, кровяной диареей. Достаточно редкая легочная форма протекает по типу тяжелой бронхопневмонии. Наиболее тяжелая септическая форма сибирской язвы возникает при нарушении барьерной функции трахеобронхиальных, бронхопульмональных или мезентериальных лимфоузлов и проникновении возбудителя в кровь. Летальный исход при различных формах болезни может наступить через 2–5 сут.

Постинфекционный иммунитет достаточно стойкий

инапряженный, антимикробный и антитоксический, однако есть сведения о повторных случаях заболевания.

Микробиологическая диагностика

В зависимости от клинической формы заболевания материалом для исследования могут служить отделяемое карбункула или язвы, испражнения, моча, мокрота, кровь. При исследовании объектов внешней среды материалом являются почва, вода, корма, животное сырье (кожа, шерсть, щетина, мясо). Основные методы диагностики – бактерио-

скопический, бактериологический, биологический, аллергиче-

ский. Используется также серологический метод (реакция термопреципитации по Асколи) для выявления антигена в объектах внешней среды и патологическом материале. Бактериоскопический метод включает приготовление препаратов и окрашивание их по Граму и методами, позволяющими выявить капсулу. Для люминесцентной микроскопии мазок окрашивают флюорохромными красителями.

35

Чистую культуру возбудителя выделяют при посеве исследуемого материала на МПА и идентифицируют по морфологическим, тинкториальным, биохимическим свойствам и лизабельности специфическим фагом. Проводят тест «жемчужное ожерелье», засевая выделенную культуру на среду, содержащую пенициллин. Клетки возбудителя приобретают при этом овальную форму, так как пенициллин нарушает синтез клеточной стенки. Расположенные в виде цепочки овальные клетки сибиреязвенного микроба напоминают ожерелье. Проверяют гемолитические свойства посевом на кровяной агар. Дело в том, что в природе существует морфологически похожий на возбудителя сибирской язвы сапрофитный микроорганизм – Bacillus anthracoides (сибирязвенноподобный), который отличается от Bacillus anthracis тем, что он обладает подвижностью и вызывает гемолиз. Возбудитель сибирской язвы неподвижен и в отличие от большинства патогенных микроорганизмов не вызывает гемолиза эритроцитов. Биологический метод проводят на белых мышах или морских свинках, которым вводят исследуемый материал или выделенную чистую культуру, а затем из органов делают мазки-отпечатки или проводят посев методом отпечатков. Аллергическую пробу ставят с аллергеном антраксином, вводя его подкожно. Положительная реакция проявляется с первых дней заболевания и сохраняется в течение нескольких лет после выздоровления.

Лечебные и профилактические препараты

Для лечения сибирской язвы применяют антибиотики (пенициллинового и тетрациклинового ряда, фторхинолоны), а также сочетание антибиотиков с противосибиреязвенным иммуноглобулином. Такое же сочетание используют и для экстренной профилактики.

36

Специфическую профилактику сибирской язвы у людей и животным осуществляют с помощью вакцины СТИ (разработанной в Санитарно-технологическом институте). Она представляет собой живую вакцину, содержащую споры бескапсульного авирулентного штамма бацилл сибирской язвы. Вакцинируют лиц, входящих в группы профессионального риска, и животных. Длительность поствакцинального иммунитета 1 год. В случае необходимости проводят ревакцинацию.

2.3. ВОЗБУДИТЕЛЬ ЧУМЫ

Возбудитель чумы Yersinia pestis относится к семей-

ству Enterobacteriaceae. Родовое название Yersinia дано в честь французского бактериолога A. Yersena, который выделил возбудителя из материала людей, погибших от чумы

(1894 г.).

Чума (син.: лат. pestis – зараза, эпиделия, черная смерть, моровая язва) – острая зоонозная природно-очаговая трансмиссивная болезнь, относится к группе особо опасных, карантинных (конвенционных) инфекций, характеризуется поражением кожи, лимфатических узлов, легких и развитием сепсиса и сопровождается высокой летальностью. В группе карантинных болезней занимает первое место.

Характеристика возбудителя

Y. pestis – грамотрицательная мелкая овоидной формы палочка размером 0,5–1,0х1–2 мкм, образует нежную капсулу, имеет пили, выполняющие функцию адгезинов, неподвижна, спор не образует. Для бактерий характерен полимор-

37

физм (продолговатые, колбовидные, нитевидные, зернистые

идругие формы). В мазках из биоматериала и в молодых культурах при использовании метиленовой синьки выявляется биполярная окраска.

По типу дыхания Y. pestis является факультативным анаэробом. Хорошо размножается на простых питательных средах с рН 7,0–7,2 при оптимальной температуре 27–28˚С. В МПБ растет поверхностно, образуя пленку, от которой вниз спускаются тонкие слизистые нити в виде сталактитов,

ихлопьевидный осадок. На плотных питательных средах вирулентные штаммы образует колонии R- формы, имеющие 3 стадии развития:

– начальная фаза роста – стадия «битого стекла» в виде нежных пластинок неправильной формы, выявляющихся при микроскопическом исследовании поверхности питательной среды;

– стадия «смятого кружевного платка» имеет мутно-белый центр, окруженный нежной фестончатой каймой;

– зрелые колонии – стадия «ромашки» («маргаритки») – крупные, имеют грубый зернистый буроватый центр и неровные края.

Слизистые S-формы колоний образуют авирулентные штаммы.

Бактерии чумы ферментируют сахара (глюкозу, галактозу, маннозу, мальтозу и др.) с образованием кислоты без газа, восстанавливают нитраты. По отношению к глицерину выделяют два варианта – ферментирующие и не ферментирующие глицерин. Протеолитические свойства выражены слабо. Они не образуют индол и сероводород, не разжижают желатину, не свертывают молоко. Каталазоположительны.

Антигенная структура Y. pestis сложна. Выделяют родовой соматический термостабильный антиген (АГ-Т), видовой капсульный гликопротеиновый (фракция 1), антигены вирулентности (V-W антигены), поверхностный гетероанти-

38

ген, общий с антигенами эритроцитов О-группы человека, антигены пилей и др. Всего известно более 15 антигенов возбудителя чумы.

Патогенное действие возбудителей чумы обусловлено главным образом белковым «мышиным» экзотоксином и липополисахаридным эндотоксином. Важную роль играют капсула, белки наружной мембраны, пили, выполняющие роль адгезинов, антигены вирулентности, способность к синтезу пестицинов и другие факторы. Возбудитель выделяет многочисленные ферменты агрессии: фибринолизин, плазмокоагулазу, нейраминидазу, аденилатциклазу, гемолизин, РНКазу и др., которые способны усиливать и модифицировать эффекты бактериальных токсинов.

Патогенность для животных. В естественных усло-

виях к возбудителю чумы восприимчивы более 350 видов и подвидов грызунов, верблюды. Употребление мяса больных верблюдов приводит к заболеванию людей («караванная» чума). Лабораторные животные (морские свинки, белые мыши и др.) высокочувствительны к возбудителю чумы и погибают на 3–5-е сутки при внутрибрюшинном инфицировании.

Устойчивость к действию факторов внешней среды.

Возбудитель чумы быстро погибает при высушивании, действии солнечного света, высокой температуры и дезинфицирующих веществ. При 80˚С гибнет через 5 мин, кипячение убивает их мгновенно. Из дезинфицирующих веществ (сулема, карболовая кислота, фенол и др.), которые уничтожают эти бактерии в течение 2–10 мин, наилучшие результаты дает лизол.

Они хорошо переносят низкие температуры. При 0ºС сохраняют жизнеспособность в течение 6 мес, в замороженных трупах – 1 год и более.

39

Эпидемиология, патогенез, клинические проявления, иммунитет

Чума относится к природно-очаговым трансмиссивным инфекциям. Природные очаги чумы занимают 8–9% всей суши земного шара.

Резервуаром возбудителя чумы в природе являются дикие грызуны (сурки, суслики, хомячки и др.). В естественных условиях происходит непрерывная передача возбудителей от больных животных здоровым трансмиссивным путем с помощью блох грызунов. Чума среди грызунов регистрируется постоянно и может вызывать эпизоотии. В такие эпизоотии вовлекаются мышевидные грызуны (полевки и домовые мыши, крысы), которые формируют уже вторичные очаги в населенных пунктах (городские, портовые). Здесь происходит массовая гибель грызунов, что сопровождается значительным накоплением зараженных блох, которые в поисках прокормителя нападают и на человека.

Пути передачи возбудителя в природных и городских очагах от грызунов: трансмиссивный (через укусы блох), контактный (при снятии шкурок, разделке туш), алиментарный, воздушно-пылевой (редко).

Чума – единственная зоонозная инфекция, при которой возможно заражение человека от больного субъекта. В этом случае пути проникновения возбудителя в организм здорового человека – воздушно-капельный при легочной форме чумы (наиболее частый), контактный или пищевой.

Восприимчивость людей к Y. pestis очень высокая. Заболеваемость людей при чуме имеет характер эпидемий и пандемий, спорадические случаи заболевания регистрируются крайне редко.

Возбудитель чумы проникает в организм человека через поврежденные кожные покровы, слизистые оболочки глаз, рта и носоглотки, дыхательные пути и желудочно-

40