Лечебное дело микро / книга / Основы частной микробиологии-4-4

генерализованной формы и приводит к летальному исходу. Рецедивы простого герпеса возникают от 4 до 6 раз в год и могут сопровождаться общей интоксикацией с повывшением температуры. Факторами, провоцирующими рецедивы, являются различные заболевания, в том числе инфекционные, переохлаждение, воздействие солнечных лучей, стрессы и другие воздействия, снижающие иммунный статус организма.

Лабораторная диагностика

Исследуемый материал – содержимое пузырьков, слюна, соскобы со слизистой оболочки. Основные методы диагностики – вирусоскопический, вирусологический и серологический.

При вирусоскопическом исследовании в мазках из исследуемого материала, окрашенных по Романовскому– Гимзе, выявляют гигантские многоядерные клетки с внутриядерными включениями.

Вирусологический метод позволяет выделить возбудителя. С этой целью исследуемый материал выращивают в культуре клеток, в куриных эмбрионах или в организме лабораторных животных.

Серологический метод используется для обнаружения антител в реакциях латекс-агглютинации (РЛА), РСК, РИФ, РНИФ, ИФА. Исследуют парные сыворотки, чтобы, определить титры антител в динамике и сделать вывод о том первичное это заболевание или обострение хронической инфекции. Вирусные белки можно выявить с помощью моноклональных антител.

Проводят также ДНК-гибридизацию и ПЦР (полимеразную цепную реакцию).

131

10.2. ВИРУСЫ ГРИППА

Характеристика вирусов гриппа

Вирусы гриппа являются РНК-содержащими и относятся к семейству Orthomyxoviridae (ortho – правильный, myxo – слизь), которое включает роды Influenzavirus (от итал. influere – вторгаться) типы А, B, и C. Название родов обусловлено с появлением жестоких эпидемий гриппа в Италии в XV–XVIII вв., которые связывают с вторжением холода и действием неблагоприятных погодных условий.

Вирус гриппа типа А был выделен в 1933 г. английскими учеными У. Смиттом, К. Эндрюсом и П. Лейдлоу. В 1940 г. Т. Френсис и Т. Мэйджил открыли вирус гриппа типа В. В 1947 г. Р.Тейлор обнаружил вирус гриппа типа С. В России первым был выявлен вирус гриппа типа А в 1936 г. А. Смородинцевым.

Вирусы гриппа имеют сферическую форму диаметром 80–120 нм и относятся к сложно организованным: имеют сердцевину (нуклеокапсид) и наружную оболочку (суперкапсид).

Геном вирусов спиральной симметрии и представлен минус однонитевой РНК, состоящей из 8 отдельных фрагментов, каждый из которых кодирует свой вирионный протеин. С геномом вируса связаны внутренние высокомолекулярные белки Р1, Р2, Р3, участвующие в репликации вируса. Снаружи от нуклеокапсида расположена наружная оболочка, состоящая из матричного (мембранного) М-протеина и наружной липипротеидной оболочки. На поверхности суперкапсида имеются шипы гликопротеидной природы – гемагглютинин (Н) и нейраминидаза (N). Гемагглютинин осуществляет адсорбцию вирионов на клеточных рецепторах макроорганизма и вызывает выработку вируснейтрализующих антител. Нейраминидаза обладает ферментативной активностью и имму-

132

ногенностью. На поверхности вириона находится 300 субъединиц гемагглютинина и до 80 субъединиц нейраминидазы.

Химический состав вириона гриппа: РНК – 1–2%,

белки – 50–70%, липиды – 20–24%, углеводы – 5–8%. Синтез вирусной РНК осуществляется в ядре клетки-хозяина.

Культивирование вирусов гриппа осуществляют в первично трипсинизированных культурах клеток (куриных фибробластах, клетках почек эмбриона человека, обезьян, свиней, хомяков и др.), в куриных эмбрионах 11-дневного возраста при заражении в амнион и аллантоис.

К биологическим свойствам относится способность вызывать гемагглютинацию эритроцитов животных (кур, морских свинок и др.) и человека.

Резистентность. Вирусы гриппа чувствительны к действию УФ-лучей, повышенной температуре, многим дезинфицирующим веществам (формалину, хлорамину, спирту, кислотам и др.). Они длительно – до 5 нед. сохраняются в высушенных каплях аэрозолей, в замороженном состоянии

(–4°С и ниже).

Антигенная структура и антигенная изменчивость.

Выделяют следующие антигены:

–стабильные рибонуклеопротеидные антигены (S-Ag). На основании этих антигенов вирусы гриппа делят на 3 ти-

па: А, B и C;

–поверхностные антигены представлены гемагглютинином (Н) и нейраминидазой (N). У вируса типа А эти антигенные субстанции очень изменчивы. Известны 2 пути их изменчивости:

•антигенный дрейф – обусловлен точечными мутациями в РНК вируса под влиянием антител, которые обусловливают небольшие изменения в пределах одного подтипа, что сообщает ему некоторую антигенную «новизну». Этот вид изменчивости описан у вирусов гриппа типа А каждые 1–

133

3 года,у вирусов типа В – значительно реже, у вирусов типа С отсутствует антиген N, а антиген Н – стабилен;

•антигенный скачок (шифт) – характеризуется по-

явлением «новых» вирусов, имеющих абсолютно разные субъединицы H и/или N. У вирусов гриппа А человека известно три разновидности гемагглютинина и две – нейраминидазы и выявлено 4 сероподтипа вируса гриппа А с антигенной формулой:

H0N1 (1933), H1N1 (1918, 1947, 1976), H2N2 (1957), H3N2 (1968). У вирусов типа В и С антигенный

скачок не выявлен.

Причины появления антигенных скачков:

–мутационная (антропонозная) изменчивость в результате появления «новых» поверхностных антигенов в организме человека под влиянием иммунитета;

–рекомбинационная (зооантропонозная) изменчивость, возникающая в результате реассортации геномных сегментов (генетических рекомбинаций) между вирусом гриппа А и аналогичными вирусами животных и птиц.

Поэтому вирус гриппа типа А получил название «вирусхамелион», «вирус-оборотень».

Антигенный скачок возникает редко, с интервалом 10– 15–28 лет, и так как население к этому подтипу вируса не имеет иммунитета, заболевания носят массовый характер.

Для характеристики вирусов гриппа предложена формула антигенных различий, в которой указываются тип вируса, вид хозяина, от которого выделен вирус (кроме человека), номер лабораторного штамма, год выделения и формула

Ни N. Например: А/Иоганесбург/33/1994/Н3N2.

Впоследние годы, по данным ВОЗ, в мире циркули-

руют вирусы гриппа типа А (Н3N2 и Н1N1)+вирус гриппа типа В, которые являются причиной эпидемического неблагополучия в различных районах мира.

134

Эпидемиология, патогенез, клинические проявления, иммунитет

Грипп (от фр. grippe – схватывать) – острое инфекционное заболевание вирусной этиологии, характеризуется лихорадкой, поражением верхних дыхательных путей, интоксикацией.

Источником инфекции является больной человек. Путь передачи – воздушно-капельный. Он реализуется при кашле, чихании, разговоре на близком от больного расстоянии (до 4 м), в местах скопления людей (детские сады, школы и пр.). Восприимчивость людей к этим вирусам очень высока, особенно у детей и пожилых людей.

Заболеваемость гриппом носит характер пандемий и эпидемий. Пандемия гриппа – это глобальная вспышка, которая возникает при появлении «нового» вируса гриппа и распространяется по всему миру. Они приводят к высокому уровню заболеваемости, смертности, социальной нестабильности и экономическим потерям. В ХХ в. наблюдались 3 пандемии (1918 г. – «испанка», 1957 г. – «азиатский» (сингапурский) грипп, 1968 г. – «гонконгский») и одна глобальная эпидемия, близкая к пандемии (1977 г.). Между пандемиями могут возникать локальные эпидемии, вызванные дрейф-вариантами вирусов.

Заболеваемость повышается в холодное время года (зима, весна).

Входными воротами инфекции является слизистая оболочка верхних дыхательных путей. Здесь в клетках эпителия вирусы гриппа репродуцируются, затем проникают в кровь и разносятся по всему организму. Повышается проницаемость сосудистых стенок, что приводит к геморрагическим проявлениям в легких, миокарде, ЦНС и других органах. Развиваются токсические и токсико-аллергические реакции на продукты поврежденных клеток и некоторые ви-

135

русные белки. Повреждение лимфоцитов сопровождается развитием иммунодефицитного состояния, что приводит к развитию бактериальных осложнений со стороны органов дыхания и других систем организма. Формирование иммунитета сопровождается обратным развитием патологических процессов.

Инкубационный период продолжается 1–3 дня. Начало болезни острое. Оно сопровождается быстрым повышением температуры тела, миалгиями, головной болью, чувством разбитости, кашлем, болями за грудиной, резью в глазах, светобоязнью, слезотечением, насморком. Возможно появление герпетических высыпаний на губах, носовое кровотечение. Продолжительность лихорадочного периода 3–5 сут. Затем наступает период выздоровления или течение болезни осложняется присоединением бактериальных инфекций: пневмонии, отита, гайморита и др.

По данным ВОЗ, на долю гриппа приходится 35,8% смертных случаев от всех вирусных инфекций.

Новорожденные обладают пассивным естественным иммунитетом, полученным от матери. Он сохраняется 6– 8 мес.

После перенесенного заболевания формируется типо- и штаммоспецифический иммунитет, обусловленный гуморальными и клеточными факторами. Он длительный и прочный, сохраняется десятки лет, иногда пожизненно. Повторные заболевания связаны с другими типами и субтипами возбудителя.

Лабораторная диагностика

Материалом для исследования служат мазкиотпечатки со слизистой носа и носоглотки, слизистое отделяемое и смывы из носоглотки. К методам ранней диагностики относят: выделение возбудителя на куриных эмбрионах или культуре клеток, исследование мазков-отпечатков в

136

ИФА, риноцитодиагностика в РНИФ, постановку РГА с це-

лью идентификации вируса. Ретроспективную диагностику

проводят путем обнаружения противогриппозных антител в РСК, РТГА, РН, ИФА в парных сыворотках с интервалом 8- 14 суток. Экспресс-диагностику проводят путем определения антигенов вируса в цитоплазме эпителия в мазках-отпечатках методом РИФ или ИФА.

Лечение и профилактика

В первые дни болезни для лечения применяют интерназальное введение препаратов интерферона. Используют противовирусные препараты производные амантадина (ремантадин А, адапрамин и др.), иммуномодулирующие препараты (дибазол, левамизол и др.), ингибиторы клеточных протеаз (гордокс, контрикал и др.). При тяжелом течении, особенно у детей, применяют донорский противогриппозный иммуноглобулин.

Разработаны методы активной и пассивной иммунопрофилактики гриппа. Для активной иммунизации применяют живые и инактивированные вакцины:

•ослабленную живую интерназальную вакцину, обладающую наибольшей иммуногенностью;

•инактивированные вакцины: цельновирионные, сплитвакцины (расщепленные, субвирионные), субъединичные, содержащие поверхностные антигены вирусов ге-

магглютинин и нейраминидазу.

Вакцины готовят из штаммов, циркулирующих в настоящее время (А/Н1N1 + А/Н3N2 + В). При введении этих вакцин формируется местный и гуморальный иммунитет.

Пассивная иммунизация проводится противогриппозным донорским иммуноглобулином.

137

10.3. ВИРУС БЕШЕНСТВА

Характеристика вируса

Возбудитель бешенства относится к семейству Rhabdoviridae, роду Lyssavirus (от греч. lyssa – бешенство). Он имеет палочковидную или пулевидную форму. В центре вириона расположен геном, представленный однонитевой линейной нефрагментированной молекулой негативной РНК. Капсид, окружающий нуклеиновую кислоту, имеет белковую природу и спиральный тип симметрии. Выявлено 5 генов, кодирующих синтез структурных белков, и установлен порядок их расположения. Возбудитель бешенства имеет также вторую двуслойную липидную оболочку – суперкапсид, на поверхности которой расположены в виде шипов суперкапсидные вирусные белки, в состав которых входит гликопротеин. С их помощью вирус распознает клеточные рецепторы, связывается с ними и осуществляет слияние своей мембраны с мембраной клетки и лизосомами. Это способствует распространению вируса в организме.

Взаимодействие вируса с клеткой начинается с ад-

сорбции. Далее, путем эндоцитоза, он проникает в клетку, где депротеинизируется и при этом высвобождается геномная РНК. Репродукция вируса проходит в цитоплазме клет- ки-хозяина. На рибосомах клетки идет синтез вирусспецифических белков. Затем образуется нуклеокапсид, который при прохождении через клеточную мембрану, одевается суперкапсидом. Сформировавшийся вирион выходит из клетки путем почкования.

Вирусы бешенства культивируют в желточном мешке куриных эмбрионов и в культуре клеток почек новорожденных хомячков или диплоидных клеток человека.

Эти вирусы содержат 2 антигена: растворимый S- антиген, общий для всех лиссавирусов, и поверхностный V-

138

антиген. Вирусы бещенства разделяют на два варианта: уличный (дикий), к которому относятся штаммы, циркулирующие в природе, и фиксированный, представленный вирусами, используемыми для приготовления вакцины.

Вирусы бешенства обладают низкой устойчивостью во внешней среде. Они погибают при кипячении через 2 мин., не выдерживают воздействия прямых солнечных лучей и УФ, ряда дезинфектантов (лизол, хлорамин, фенол и др.). Более длительно сохраняются при низких температурах, на трупах животных (до 4 мес.). При лиофильном высушивании вирус бешенства не теряет жизнеспособности годами.

Эпидемиология, патогенез, клинические проявления, иммунитет

Резервуаром инфекции при бешенстве служат различные теплокровные животные (волки, лисы, собаки, кошки, грызуны, ежи, лошади, крупный и мелкий рогатый скот, летучие мыши и др.). В нашей стране выделяют очаги бешенства 3 типов: природные, в которых вирус наиболее часто циркулирует среди лисиц, волков, барсуков и др.; природные полярные (арктические), основным резервуаром в которых являются песцы, и антропургические, где вирус циркулирует среди собак, кошек и сельскохозяйственных животных. От человека к человеку вирус не передается. Как исключение описаны случаи заражения при пересадке роговицы глаза от умерших от бешенства людей. Бешенство – зоонозная инфекция. Основной, главный путь проникновения вируса осуществляется при укусах больных животных или попадании их слюны на поврежденную кожу и слизистые оболочки (при ослюнении). Больное животное заразно уже в инкубационном периоде за 2–3 и более дней до появления первых клинических признаков. В пещерах, где обитают ле-

139

тучие мыши, а также при внутрилабораторном заражении возможен аэрогенный путь передачи. Установлено, что возбудитель может передаваться также алиментарным и трансплацентарным путями.

Продолжительность инкубационного периода варьирует в зависимости от места укуса или ослюнения. Поскольку основной мишенью поражения при бешенстве является головной и спинной мозг, при укусах в область лица и шеи он сокращается до 2 нед. – 1 мес. При поражении нижних конечностей его срок увеличивается до 1–3 мес. и даже до 1 года. Проникнув в организм человека, вирус устремляется по периневральным пространствам в нейроны головного и спинного мозга, где репродуцируется. Особенно интенсивно поражаются аммонов рог, продолговатый мозг и мозжечок. В клетках ЦНС появляются цитоплазматические тельца включения (тельца Бабеша–Негри).

В клинической картине бешенства отмечены 3 основные периода: начальный, период возбуждения и период параличей. Начальный период называют депрессивным. Больной в это время замкнут, раздражителен, испытывает общее недомогание, головную боль, бессонницу, апатию, чувство страха, боязнь смерти. Через 2–3 сут. наступает второй период, который длится 2–3 дня (редко 6). Развиваются наиболее характерные и известные для этого заболевания симптомы – водобоязнь, светобоязнь. Больной страшится громких звуков, дуновения воздуха. При гидрофобии попытки сделать глоток воды вызывают болезненный спазм глотки. В дальнейшем такие спазмы провоцируют даже воспоминания о воде, ее шум. Усилено слюноотделение, больной агрессивен, перевозбужден, возникают галлюцинации, но сознание пока сохранено. Температура тела субфебрильная. Заключительный период – паралитический. Он длится от 1 до 3 дней. Температура возрастает до высоких показателей, наступает апатия, могут исчезнуть признаки второго периода. Создается об-

140