•В течение седьмой, текущей с 1961 года пандемии, Vibrio cholerae биотипа El Tor распространился по всему миру. В ряде стран Африки, Азии и Америки отмечается неблагополучная эпидемическая ситуация по холере. С конца 2011 г. массовая заболеваемость холерой регистрируется на Американском континенте (Гаити, Доминиканская Республика), в странах Африки (Камерун, Республика Чад, Демократическая Республика Конго, Мали, Нигерия, Нигер, Республика Конго, Бурунди, Сомали, Гана) и Азии (Пакистан, Филиппины, Индия)

•Эпидемия холеры на Гаити, начавшаяся в 2010 году и продолжающаяся по настоящее время, вызвана Vibrio cholerae биовар Эль Тор O1. Источником инфекции на Гаити, с большой степенью вероятности, явились миротворцы ООН, прибывшие из Непала. За это время холера распространилась в Доминиканскую Республику, на Кубу, в США, Венесуэлу, Мексику, Чили

•В 1992 году новая серогруппа V. cholerae О139 Bengal, появилась в Южной Индии и Бангладеш, быстро распространилась по региону, позже штамм новой серогруппы О139 попал на другие континенты. Угроза распространения этого возбудителя по миру и развитие восьмой пандемии холерой остается актуальной

V. cholerae высеваются из водоемов в различных регионах (в том числе и не эндемичных по холере), размножению вибрионов способствует теплая, солоноватая, стоячая вода, кроме этого вибрионы способны размножаться в хитиновом покрове моллюсков, зоопланктоне, которые могут послужить фактором передачи инфекции (резервуар в окружающей среде)

Характеристика возбудителя холеры

•ГР «-» палочки

•Подвижны (монотрих)

•Спор НЕ образуют

•Капсулу НЕ образуют

•Факультативные

анаэробы

•НЕ требовательны к питательным средам

•Оптимальный рН 8,5 – 9,0

•Время генерации < 30 мин

Культуральные свойства

Посевы исследуемого материала на всех этапах выращивают:

•в 1 %-й пептонной воде 6—8 ч образуют нежную пленку

•на щелочном агаре (не менее 14—16 ч)

колонии холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп в типичной S-форме – круглые, гладкие, плоские, голубоватые, гомогенные, с ровными краями, прозрачные в проходящем свете и светло-серые с голубым или зеленоватым оттенком под стереоскопическим микроскопом в косо проходящем свете, которые легко эмульгируются в физиологическом растворе)

•на плотных элективных средах – 18—24 ч (Thiosulphate Citrate Bile Salts Sucrose Agar) образуют жёлтые колонии

Лактозу НЕ ферментируют На кровяном агаре – полный гемолиз

Признаки V.cholera

1.оксидазопозитивные

2.активно подвижные вибрионы

3.ГЛЮ (К+)

4.САХ (+), МАН (+), АРАБ (-)

5.амилаза (+)

6.агглютинирующиеся сыворотками О1

Дополнительные тесты

1.гемагглютинация

2.чувствительность к полимиксину

3.реакция Фогес-Проскауэра

4.определение антибиотикограммы

5.ПЦР на наличие генов сtx и tcp

6.определение токсигенности на модели кроликов-сосунков

7.для холерных вибрионов О1 серогруппы указывают биовар на основании чувствительности к одному из диагностических фагов (эльтор или классическому)

Определение диастатической активности

кроме среды Гисса с крахмалом может быть использована и среда Кодама. Культуру засевают в среду и также инкубируют при (37,0 ± 0,5) С. Через 18 ч в пробирку со средой Кодама добавляют 2—3 капли раствора Люголя. При разложении крахмала среда не окрашивается

Реакция Фогес-Проскауэра (на ацетилметилкарбинол)

Этот тест основан на выявлении ацетоина (ацетил-метилкарбинол) – промежуточного продукта в превращении пировиноградной кислоты (образующейся при расщеплении глюкозы) по бутиленгликолевому пути. В присутствии кислорода и КОН ацетоин окисляется в диацетил, образующий соединение красного цвета. Чувствительность теста возрастает с добавлением α-нафтола перед добавлением КОН.

Испытуемую культуру засевают в глюкозо-фосфатный бульон Кларка и инкубируют при температуре (37,0 ± 0,5) С в течение 1—3 суток. Затем к 1 мл бульонной культуры добавляют 0,6 мл 6 %-го спиртового раствора альфа-нафтола и 0,4 мл 40 %-го раствора едкого калия. Пробирки встряхивают и помещают в термостат на 1 ч. При положительной реакции среда окрашивается в розовый или ярко-красный цвет

Изучение восстановительных свойств (реакция холера-рот)

Холерные вибрионы восстанавливают нитраты в нитриты. При добавлении к 24-часовой культуре концентрированной серной кислоты из расчета 2-3 капли на 1 мл культуры освобождается азотистая кислота, которая, связываясь к индолом, образует новое соединение (нитрозоиндол). Среда окрашивается в рубиново-красный цвет

Признаки, дифференцирующие биовары V. cholerae О1