Частная бактериология

91

На энтерококк-агаре E. faecalis формирует круглые гладкие блестящие колонии бордового цвета (рисунок 1.90).

Рисунок 1.90 – Колонии E. faecalis на Энтерококк-агаре. Заимствовано из Интернетресурсов.

На чашках с хромогенным агаром (HiCrome UTI Agar) можно одновременно дифференцировать колонии голубовато-зеленого цвета Enterococcus faecalis от пурпурных колоний Escherichia coli, бесцветных колоний Staphylococcus aureus и

мукоидных колоний голубого цвета Klebsiella pneumoniae и др. (рисунок 1.91).

а б Рисунок 1.91 – Характер роста на хромогенной среде разных видов энтеробактерий

(а) и Enterococcus faecalis (б). Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Чистую культуру энтерококков высевают на желчно-щелочной агар (ЖЩА) или желчно-эскулиновый агар (ЖЭА) и в молоко с 0,1% раствором метиленового синего. На ЖЩА через сутки проявляется рост в виде круглых блестящих синеватого цвета слегка выпуклых колоний. На желчно-эскулиновом агаре образуются серые колонии, окруженные ободком коричнево-черного преципитата (рисунок 1.92).

92

Рисунок 1.92 – Колонии энтерококков на желчно-эскулиновом агаре. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

В пробирках с молоком происходит редукция метиленового синего и изменение цвета среды с голубого на белый (рисунок 1.93).

Рисунок 1.93 – Редукция метиленового синего в молоке энтерококками. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Способность культуры расти на ЖЩА и редуцировать метиленовый синий в молоке указывает на ее принадлежность к энтерококкам.

Идентификацию энтерококков по биохимическим признакам можно провести с помощью ЭН-КОККУСтеста (рисунок 1.94). Этот набор позволяет определять 19 видов энтерококков.

Рисунок 1.94 – ЭН-КОККУС-тест для энтерококков. Заимствовано из Интернетресурсов.

Идентификацию видовой принадлежности энтерококков проводят при выборе эффективной антибиотикотерапии или в целях эпидемиологического наблюдения.

93

Для видовой идентификации энтерококков применяют также ПЦР с использованием праймеров, позволяющих идентифицировать гены белковадгезинов и генов, кодирующих синтез цитолизинов, желатиназы, сериновой протеазы и феромона.

Золотым стандартом для обнаружения в пробе ванкомицин-резистентных энтерококков являются реакция гидролиза эскулина и PYR-тест. Ванкомицинрезистентный энтерококк (VRE) вызывает почернение среды (гидролиз эскулина) и красное окрашивание диагностического диска (PYR-тест). Для осуществления биохимической идентификации VRE на рынке предлагается специальная тестсистема (рисунок 1.95).

Гидролиз эскулина

Положительный результат

почернение среды

VSE

Рисунок 1.95 – Биохимическая идентификация ванкомицин-резистентных энтерококков. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Профилактика. Средства специфической профилактики энтерококковых инфекций отсутствуют. Основное внимание должно уделяться соблюдению правил стерилизации и асептики при выполнении медицинских лечебно-диагностических процедур и оперативных вмешательств.

Лечение энтерококковых инфекций осуществляют с помощью антибиотиков с учетом чувствительности выделенного возбудителя к антимикробным препаратам. Чаще всего используют ампициллин, ванкомицин, тетрациклины, хинолоны. Однако с середины 90-х годов ХХ века получили распространение штаммы энтерококка, устойчивые к ванкомицину (VRE, vancomycin-resistant enterococcus), что снижает эффективность лечения энтерококковой инфекции этим антибиотиком. Вирулентные штаммы энтерококков, резистентные к ванкомицину, чаще всего обусловливают развитие внутрибольничных инфекций.

94

Применение энтерококков в практике. Энтерококки обладают выраженной антагонистической активностью в отношении стафилококков и кишечных палочек. Основная причина этого – способность энтерококков продуцировать короткие пептиды – энтероцины. Антагонистическая активность в отношении патогенных и условно патогенных бактерий позволяет использовать разные штаммы энтерококков (E. faecium M-74, E. faecium Walthers ECOFLOR, E. faecium L3 и др.) в составе пробиотиков (Линекс, Симбиофлор, Бифиформ, Биофлорин и др.). Водный экстракт продуктов метаболизма E. faecalis входит в состав препарата Хилак форте.

Благодаря высокой устойчивости к воздействию кислот, солей и высокой температуры, энтерококки с давних пор используются в производстве пищевых продуктов (сыров, мясных продуктов, ферментированных продуктов на основе сои и зерновых) с целью подавления в самих продуктах болезнетворных бактерий. Наличие в колбасах, сырах и мясном фарше энтерококков не позволяет в них размножаться стафилококкам, кишечным палочкам, листериям и другим бактериям за счет синтеза энтерококками бактериоцинов - энтероцинов.

Вопросы для контроля усвоения материала

1. Таксономическое положение, морфологические, культуральные и биохимические свойства энтерококков.

2. Экология и факторы патогенности энтерококков.

3. Диагностика, профилактика и лечение энтерококковых инфекций.

Тренировочные тесты:

1.Энтерококки относятся к семейству (один правильный ответ): 1.1 Streptococcaceae

1.2 Enterococcaceae

1.3 Staphylococcaceae

1.4 Pseudomonadaceae

1.5 Bacillaceae

2.Для представителей рода Enterococcus характерно (несколько правлильных ответов):

2.1 относятся к семейству Streptococcaceae

2.2 относятся к семейству Enterococcus

2.3 являются представителями нормальной микробиоты кишечника

2.4 являются возбудителями дизентерии

2.5 полирезистентность к антибиотикам

3.Для представителей рода Enterococcus характерно (несколько правлильных ответов):

3.1 являются облигатными анаэробами

3.2 являются факультативными анаэробами

3.3 принадлежат к семейству Streptococcaceae

95

3.4являются представителями нормальной микробиоты кишечника

3.5являются условно-патогенными бактериями

4.Факторами патогенности энтерококков являются (несколько правлильных ответов):

4.1 шига-токсин

4.2 агрегирующая субстанция

4.3 капсула

4.4 поверхностные белки

4.5 муциназа

5.В состав нормальной микробиоты кишечника входит (один правильный ответ): 5.1 S. sonnei

5.2 S. pyogenes

5.3 Е. faecalis

5.4 S. pneumoniae

5.5 S. aureus

Правильные ответы: 1.2; 2.2, 2.3, 2.5; 3.2, 3.4, 3.5; 4.2, 4.4; 5.3.

96

2. Грамотрицательные аэробные кокки

Общая характеристика аэробных кокков. К грамотрицательным аэробным коккам относятся нейссерии. Род Neisseria назван в честь немецкого врача А. Нейссера (рисунок 2.1), обнаружившего возбудителя в выделениях больного гонореей.

Рисунок 2.1 - Альберт Людвиг Сигезмунд Нейссер (Albert Ludwig Sigesmund Neisser, 1855-1916 гг.). Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Род Neisseria относится к типу Proteobacteria, классу Betaproteobacteria,

порядку Neisseriales, семейству Neisseriaceae. Этот род включает несколько видов:

Neisseria meningitidis (менингококки), Neisseria gonorrhoeae (гонококки), N. flava, N. subflava, N. perflava, N. sicca, N. mucosa, N. flavescens, N. cinerea, N. elongate, N. lactamica и др. Видами, патогенными для человека, являются менингококки и гонококки.

Непатогенные нейссерии являются представителями нормальной микробиоты слизистой оболочки ротовой полости, верхних дыхательных путей и мочеполового тракта человека (N. sicca, N. flavescens, N. perflava, N. mucosa, N. lactamica). Условно-патогенные нейссерии являются этиологическими агентами отитов, синуситов и других гнойно-воспалительных заболеваний у лиц со сниженной резистентностью организма.

Морфологические и тинкториальные свойства нейссерий. Нейссерии представляют собой грамотрицательные кокки диаметром 0,6-10 мкм, неподвижные, спор не образуют. Отличительной особенностью нейссерий является то, что клетки располагаются попарно (диплококки), а обращенные друг к другу поверхности ровные или вогнутые, то есть нейссерии внешне напоминают кофейные зерна или бобы (рисунок 2.2).

97

а б Рисунок 2.2 – Нейссерии, электронная микрофотография (а) и компьютерная

визуализация (б). Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Среди нейссерий встречаются также короткие (0,5 мкм) палочки (диплобациллы), располагающиеся в цепочках (например, Neisseria elongate). Некоторые виды нейссерий имеют капсулу и микроворсинки - пили (рисунок 2.3).

Рисунок 2.3 - Капсула и пили у нейссерий, компьютерная визуализация. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Культуральные свойства нейссерий. Нейссерии являются аэробами.

Оптимальная температура роста 35-37°С, патогенные виды могут расти в интервале температур 24-41°С, а непатогенные виды способны к росту при температурах ниже 24°С. Оптимальное значение рН питательных сред для выращивания нейссерий составляет 6-8. Патогенные виды прихотливы к условиям культивирования, не растут на обычных питательных средах; непатогенные виды менее прихотливы. Для выращивания патогенных нейссерий используют среды с кровью, сывороткой крови, дополнительными факторами роста (сывороточный агар, кровяной агар, шоколадный агар, среда Мак-Конки и др.). Культивирование проводят в атмосфере углекислого газа (5-7%). На плотных питательных средах через 24 часа нейссерии образуют нежные мелкие выпуклые круглые колонии с ровными краями (рисунок

2.4).

99

**Тест используется только для дифференциации условно-патогенных

нейссерий.

***Биовар N. perflava имеет положительную реакцию.

****Некоторые штаммы редуцируют нитриты в низких концентрациях

(0,01%).

Антигенная структура. Все виды нейссерий имеют полисахаридный соматический О-антиген. Штаммы, образующие капсулу, также имеют капсульный антиген. В клеточной мембране патогенных нейссерий содержится нейссериальный поверхностный белок А (NspA).

Резистентность. Во внешней среде патогенные нейссерии не устойчивы. В связи с этим исследуемый материал доставляют в лабораторию в транспортных средах (транспортная среда для нейссерий, среда Эймса) в термоконтейнерах, обеспечивающих температуру 30-35°С. Нейссерии чувствительны к действию многих антисептиков и дезинфектантов. Они обладают высокой чувствительностью к пенициллинам, тетрациклинам, стрептомицину и другим антибиотикам. Однако в последнее время все чаще в клинической практике встречаются штаммы нейссерий, устойчивые к антибиотикам.

2.1. Менингококки

Менингококковая инфекция - это острое инфекционное заболевание человека, вызываемое Neisseria meningitidis и характеризующееся локальным поражением слизистой оболочки носоглотки с последующей генерализацией процесса в виде менингококковой септицемии (менингококцемии или менингококкемии) и воспаления мягких мозговых оболочек (менингококкового менингита, эпидемического цереброспинального менингита).

Первые клинические описания менингококкового менингита представили английские врачи Т. Уиллис (Вилизий) и Т. Сиденхэм (рисунок 2.5).

а б

Рисунок 2.5 – а - Томас Уиллис (Thomas Willis, 1621 – 1675 гг.); б - Томас Сиденхэм (Thomas Sydenham, 1624 – 1689 гг.). Заимствовано из Интернет-ресурсов.

100

Возбудитель менингита обнаружил в спинномозговой жидкости больного и детально описал в 1887 г. австрийский бактериолог А. Вайхзельбаум (рисунок

2.6).

Рисунок 2.6 - Aнтон Вайхзельбаум (A. Weichselbaum, 1845 – 1920 гг.). Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Таксономия. Вид Neisseria meningitidis относится к семейству Neisseriaceae

роду Neisseria. В составе этого вида по капсульным полисахаридным антигенам выделяют 13 серогрупп (A, B, C, D, X, Y, Z, W и др.). По белковым и полисахаридным антигенам клеточной стенки выделяют 20 сероваров или серотипов. Наиболее частыми возбудителями генерализованной менингококковой инфекции являются серогруппы A, B и C.

Морфологические и тинкториальные свойства. Менингококки имеют округлую форму диаметром 0,6-1,0 мкм, располагаются попарно. Поверхности, обращенные друг к другу, вогнутые или ровные (рисунок 2.7).

Рисунок 2.7 - Менингококки в препарате, компьютерная визуализация. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Менингококки по Граму окрашиваются в красный цвет (грамотрицательные). В мазках часто наблюдается неравномерное окрашивание: молодые клетки окрашиваются интенсивно, а старые клетки воспринимают краситель очень слабо (рисунок 2.8).