Лабораторная работа № 8 Определение свойств белка
Цель работы: научиться определять изоэлектрическую точку белка, выявить влияние различных электролитов на степень набухания белка
Посуда: набор пробирок в штативе, линейка.
Реактивы и материалы: желатин порошкообразный, буферные растворы с разным значением рН (от1 до 12),.растворы сульфата калия, хлорида калия, хлорида натрия, ацетата натрия, ацетат калия и сульфат натрия, вода.
Ход работы
Опыт 1. Определение изоэлектрической точки желатина.
В шесть сухих пробирок поместите примерно одинаковое количество желатина высотой 1см - h0. В каждую пробирку налейте с помощью мерной пробирки по 7 мл растворов с различными значениями рН. Через 1 - 2 мин содержимое пробирок осторожно перемешайте, а через 20 мин добейтесь, чтобы осели всплывшие частицы желатина и измерьте высоту слоя набухшего желатина (h).
Для определения изоэлектрической точки желатина постройте график зависимости h = h – h0 = f(рН), опустите из точки минимума на кривой перпендикуляр к оси абсцисс. Данное значение и будет являться изоэлектрической точкой желатина.
Опыт 2. Влияние электролитов на степень набухания желатина.
В семь сухих пробирок насыпьте по 1 см (V0) желатина и налейте с помощью мерной пробирки по 10 мл растворов электролитов. Через 30 - 60 минут измерьте увеличение объема желатина (V) и вычислите степень набухания желатина (α).
Результаты записываете в таблицу
|
|
электролиты | ||||||
|
H2O |
NaCl |
KCl |
CH3COONa |
CH3COOK |
Na2SO4 |
K2SO4 | |
|
объем желатина до набухания |
|
|
|
|
|
|
|
|
объем желатина после набухания |
|
|
|
|
|
|
|
|
степень набухания, %
|
|
|
|
|
|
|
|
Контрольные вопросы
1.Что называется изоэлектрической точкой?
2.В каком из растворителей: воде, спирте, толуоле, физиологическом растворе – желатин будет набухать, а в каком – нет? Почему?
3.Что такое набухание ВМС и что называется степенью набухания?
4.Чем обусловлено направление движения частиц под действием электрического поля?
5.К какому электроду будет перемещаться при электрофорезе β – лактоглобулин в растворе с рН равном 7, если его изоэлектрическая точка равна 5,2. Почему?
6.В растворе содержится смесь белков: α – глобулин крови, фибриноген крови и рибонуклеаза. При каком значении рН можно электрофоретически разделить эти белки?