Лабораторная диагностика вирусных инфекций птиц

Все методы лабораторной диагностики вирусных инфекций можно разделить на три группы:

1. Экспресс-методы, основанные на обнаружении в патматериале следов пребывания вирусов, позволяют относительно быстро установить наличие вируса. Для обнаружения вирусных антигенов и их следов пребывания в организме птиц используют:

– серологические реакции с заведомо известными специфическими сыворотками (РИФ, РСК, РРП в агаровом геле, ИФА (ELISA), РГА, РТГА);

- генетические методы – ПЦР, ДНК-зондов;

- обнаружение специфических вирусных телец-включений;

- микроскопию – электронная (хотя и не имеет практического значения) и вирусоскопия при оспе птиц (оспенный вирус – единственный, который обнаруживается в световом микроскопе). Положительная вирускопия в сочетании с биопробой достаточна для постановки диагноза на оспу.

- биопробу - её тоже можно отнести к экспресс-методам, особенно, если можно надеяться на получение характерной клинической картины или характерных патологоанатомических изменений.

После проведения экспресс-исследований диагноз ставят предварительно в течении 1-2 суток и в этом их главное достоинство. Но высокой достоверностью они не отличаются, поэтому нуждаются в подтверждении другими методами.

2. Вирусологический метод – основан на обнаружении и изоляции активных форм вирусов из патматериала и их идентификации в серологических реакциях. Метод отличается длительными и трудоемкими исследованиями, но дает точный и уверенный ответ о возбудителе болезни.

Индикацию и изоляцию обычно осуществляют путем биопробы на чувствительных лабораторных объектах. Поэтому при исследовании патматериала от больных птиц для заражения используют цыплят или куринные эмбрионы (КЭ), или культуру клеток (КК). Главным показателем размножения вируса служит:

- в КЭ – гибель его и характерные патологоанатомические признаки (кровоизлияния на ХАО, оспины, мумифмцирование плода, скручивание шеи и т.д.);

- в КК – ЦПЭ (ЦПД) – бляшки, тельца включения, дегенерация монослоя.

Для идентификации выделенного вируса используют серологические реакции с диагностическими специфическими сыворотками. Выбор реакции определяется в основном свойствами самого вируса – это может быть РТГА, если вирус проявил гемагглютирующую активность, РТГАд – если вирус проявил гемадсорбирующие свойства.

Применяют для идентификации вируса также РН, РДП в агаровом геле, ИФА, в том числе метод ELISA, основанный на использовании ферментов в качестве метки антигенов и антител. Этот метод применяют также и для ранней диагностики инфекционных, опухолевых болезней птиц, и для контроля эпизоотической ситуации в птицеводстве, и для контроля уровня поствакциннальных антител.

После идентификации вируса необходимо доказать его этиологическую роль в заболевании. Так, выделение от погибших кур вируса Ньюкаслской болезни не всегда свидетельствует о его этиологической роли – это может быть непатогенный, к примеру, вакциный штамм. Этиологическая роль выделенного вируса может считаться доказанной, если будет установлено нарастание титра антител к вирусу в парных сыворотках от птиц, послуживших источником получения патматериала.

3. Серологический метод (иммунологический) – основан на установлении динамики титра антител в парных сыворотках от группы птиц, которые исследуют с интервалом в 2-3 недели.

Основанием для предположения, к каким вирусам искать антитела, служит предварительный диагноз, поставленный по данным эпизоотологических и эпизоотологических наблюдений, клинических и патологоанатомических симптомов.

Наличие в сыворотках антител и их титры определяют в серологических реакциях с использованием антигенов предполагаемых вирусов.

Наиболее достоверные результаты практически к любым вирусам дает РН. Результат нейтрализации эталонного вируса антителами исследуемой сыворотки устанавливают на цыплятах, в культуре ткани и эмбрионах по феномену утраты ими биологической активности.

Важным методом диагностики большого количества вирусных болезней является постановка РДП в агаровом геле. Но условие ее методики - довольно высокий титр антител (в противном случае полосы преципитации получаются не яркие).

Наиболее проста по технике исполнения и быстроте реакция торможения гемагглютинации (РТГА); её применяют в случаях, если вирус обладает гемагглютицирующими свойствами.

Используют и другую методику – ИФА (в т.ч. ELISA).

После установления титра антител в парных сыворотках результаты интерпретируют, исходя из динамики титра. Считается, что нарастание титра антител во второй сыворотке в 4 и более раз по сравнению с первой уверенно свидетельствует об активном инфекционном процессе у птицы в период взятия у них крови. При этом болезнь была вызвана тем возбудителем, к которому было найдено повышение титра антител в парных сыворотках. Поставленный серологическим методом диагноз дает уверенное представление о болезни и важное значение для мероприятий ликвидации вспышки эпизоотий. Недостатком его является – ретроспективность, т.к. к моменту установки диагноза птицы, от которой получены сыворотки, уже или выздоровела, или пала.