29. Воздействие на спермии гипо- и гипертонического растворов. Методика опыта.

Влияние гипертонического раствора. После предварительной оценки подвижности, к капле свежеполученной спермы добавляют каплю 3%-ного (гипертонического) раствора натрия хлорида, капли перемешивают, накрывают покровным стеклом и просматривают под микроскопом. Под влиянием гипертонического раствора спермин быстро погибают.

Влияние гипотонического раствора. На предметное стекло наносят каплю, спермы и определяют подвижность. На другое предметное стекло на-носят рядом капли спермы и дистиллированной воды. Капли, не смешивая, накрывают покровным стеклом и на границе слияния капель проводят наблюдение за спермиями. Под влиянием дистиллированной воды (гипотоническая среда) про-исходит набухание головки спермиев, закручивание хвоста, гибель спермиев.

29. Воздействие на спермии высокой и низкой температур, йода. Методика опыта.

При температуре 38-40 градусов жизненные процессы спермиев протекают с наибольшей скоростью и вне организма они погибают. Снижение температуры на каждые 10 градусов замедляет обмен веществ в 2-3 раза и жизнь спермиев значительно удлиняется. Для замедления процессов необходимо охладить сперму до отрицательных температур. При отрицательных температурах образуются кристаллы льда, что является главной причиной гибели спермиев. Чтобы этого избежать используют достаточно глубокое охлаждение. Так же, необходимо охлаждать не слишком медленно и не слишком быстро. Для правильного охлаждения используют жидкий азот с температурой -196 градусов.

При повышении температуры до 40 градусов спермии заметно активизируются, но при этом резко сокращается срок их жизни. При температуре 45 градусов спермии утрачивают оплодотворяющую способность, при температуре 48 градусов сперматозоиды погибают.

Методика: Определяют подвижность спермиев в свежеполученной сперме. Помещают препарат на столик с температурой 50-65 ⁰С и определяют подвижность спермиев. Вначале наблюдается усиление подвижности, а потом под влиянием высокой температуры спермин быстро погибают.

На другое предметное стекло наносят каплю спермы. Оценивают подвижность. Помещают стекло на 1-2 минуты на лед. Протирают препарат фильтровальной бумагой и проверяют подвижность при температуре 18-20 ⁰С. Все спермии остаются неподвижными. При подогревании препарата до 40 ⁰С у части спермиев подвижность восстанавливается, а остальные спермии остаются неподвижными в результате гибели от температурного шока.

Йод - окислитель - чрезвычайно сильно действует на спермии. Воздействие его паров губительно для сперматозоидов.

Методика: Если вокруг капли со спермой нанести в виде кольца 5% раствор йода, то йод, улетучиваясь, будет окрашивать сперму в желтый цвет. Под микроскопом можно отмечать массовую гибель спермиев от паров йода.

29. Разбавление и консервация спермы в жидком азоте.

Разбавленную сперму выдерживают в холодильнике при температуре +2...+4оС в течение 4–5 ч. Затем в теплоизолированную емкость или широкогорлый сосуд Дьюара наливают на 2/3 жидкий азот. Фторопластовую пластину обтирают спиртовым тампоном, опускают в жидкий азот в широкогорлом сосуде Дьюара и охлаждают в течение нескольких минут до прекращения кипения азота. Затем пластину поднимают к верхнему краю сосуда и после испарения азота протирают ее сухим стерильным ватным тампоном и с помощью бюретки, шприца или разливочной машины разливают сперму в лунки пластины. Пластина в это время должна иметь температуру минус 160...170  После того как в последней лунке сперма затвердеет, пластину опускают ближе к жидкому азоту и выдерживают на расстоянии 5–10 см от поверхности азота в течение 1–2 мин. Далее пластину погружают на 1 мин в жидкий азот, где происходит дальнейшее охлаждение гранул и отделение их от пластины. Затем пластину поднимают из жидкого азота до верхнего уровня сосуда, сгребают гранулы в охлажденный контейнер и переносят в сосуд Дьюара на длительное хранение. Этот способ расфасовки хранения спермы в настоящее время используется крайне редко.