Реакция непрямой (нагрузочной) гемагглютинации (рнга)

Принцип метода: Реакции, в которой происходит склеивание эритроцитов с нагруженными с ними антигенами (эритроцитарный диагностикум) или антителами «укрупнителями» для придания молекулярным антигенам корпус-кулярности.

РНГА используется очень широко, благодаря высокой чувствительности особенно на ранних стадиях заболевания.

«+» феномен РНГА – «зонтик»

«-» феномен РНГА – «пуговка»

Применение рнга в серодиагностике

Принцип реакции: Сыворотку больного разводят в нескольких рядах. К каждому разведению прибавляют равное количество соответствующего эритроцитарного диагностикума.

Рнга с целью серодиагностики цепного тифа

Ингредиенты:

Исследуемый материал_______________________, содержит______________________

Диагностический препарат____________________, содержит______________________

С ыворотка больного

5 день болезни

1 4 день болезни

Ответ: Титр АТ на 5 день болезни = ___________________________________________

______________на 14 день болезни = __________________________________________

Вывод:____________________________________________________________________

__________________________________________________________________________

Реакция связывания комплемента (РСК)

Принцип метода: Спецефические комплекс АГ + АТ всегда атсорбирует на себе комплемент.

В РСК участвуют две системы:

1. Основная. Состоит из АГ и АТ (1комплемент известен, другой – нет). Если АГ соответствует АТ, то образуется комплекс, который свяжет комплемент. Этот комплекс невиден. Об образовании его узнают при помощи 2й системы.

2. Индикаторная (гемолитическая) система. Состоит из эритроцитов барана (АГ) и соответствующей им гемолитической сыворотки (АТ), т.е. это готовый иммунный комплекс.

« +» феномен РСК – отсутствие гемолиза (содержимое лунки мутное или на ее дне осадок эритроцитов)

«-» феномен РСК – гемолиз («лаковая кровь», жидкость прозрачна)

Иммуно-ферментный анализ (ифа)

Принцип метода: Антитела к искомому антигену фиксируют на носителе (в лунках полистироловой панели). Вносят исследуемый материал, добавляют антитела меченые ферментом, и хромогенный субстрат. Все этапы разделяются интенсивной промывкой лунок при соответствии АГ и АТ жидкость в лунке по завершении реакции меняет цвет, причем интенсивность окрашивания пропорционально количеству искомого компонента.

«+» феномен ИФА – появление окрашивания

«-» феномен ИФА – отсутствие окрашивание

Реакция иммуно-флюорисценции (риф)

Принцип метода: Антитела, соединенные с флюорохромом (флюорисцируещим красителем – ФИТЦ), фиксируются на соответствующих антигена. После промывки в люминесцентном микроскопе видны искомые микроорганизмы или пораженные клетки макроорганизма, интенсивно светящиеся на черном фоне.

« +» феномен – свечение в люминесцентном микроскопе

«-» феномен – темное поле зрения

ИФА и РИФ высокочувствительны, специфичны, не требуют много времени на постановку, поэтому их часто применяют для экспресс- диагностики инфекционных заболеваний (ИФА – гепатит В, СПИД; РИФ - сифилис, хламидийная, аденовирусная инфекция).

Заполните таблицу