Окраска по Нейссеру

Метод используется для выявления зерен волютина у возбудителей дифтерии (С. diphtheria). В отличие от других коринобактерий у возбудителей дифтерии зерна волютина распалагаются на концах палочек .Этот сложный метод окраски включает несколько этапов:

1) фиксированный мазок окрашивают ацетатом синьки Нейссера

( основная окраска) в течение 2-3 мин.

2) наносят раствора Люголя (протрава) на 10-30 секунд;

3) промывают препарат водой;

4)окрашивают везувином (дополнительная окраска) в теч. 0,5-1 мин.

5) промывают препарат водой, высушить и микроскопируют.

Зерна волютина представляют собой соединения, имеющие в отличие от цитоплазмы щелочную реакцию, и поэтому избирательно воспринимают ацетат синьки, окрашиваясь в темно-синий цвет. Цитоплазма клетки, обладающая кислой реакцией, воспринимает щелочной краситель везувин и окрашивается в желтый цвет (рис.4).

Окраска по способу Ожешки

Метод Ожешки применяется для выявления спор. Этапы окраски:

1) на нефиксированный мазок наносят 0,5% раствор соляной кислоты и подогревают на пламени спиртовки 2-3 минуты;

2) кислоту сливают, препарат промывают водой, высушивают и фиксируют над пламенем ;

3) окрашивают по Циль-Нильсену.

Споры бактерий окрашиваются в красный цвет, а вегетативные формы в синий (рис.5).

Обнаружение капсул по методу Бурри-Гинса

1. Смешать каплю взвеси микробных клеток с каплей туши и при помощи стекла со шлифовальным краем сделать мазок таким же образом, как мазок из крови, высушить и фиксировать.

2. На мазок нанести водный раствор фуксина на 1-2 мн.

3. Промыть водой, высушить на воздухе и микроскопировать. Бактерии окрашиваются в красный цвет, а неокрашенные капсулы контрастно выделяются на черно- розовом фоне (рис.6).

2.4 Методы определения подвижности бактерий Микроскопические

Определение подвижности микроорганизмов методом

«раздавленной капли»

Жгутики являются органами движения бактерий, состоят из белка флагеллина. По количеству и характеру расположения жгутиков различают бактерии: монотрихи, лофотрихи, амфитрихи и перитрихи. Жгутики обладают антигенными свойствами (Н-антиген) и дают возможность бактериям перемещаться в жидкой среде.

О наличии жгутиков можно судить по характеру движения бактерий в «раздавленной» и «висящей» каплях при опущенном конденсоре и частично прикрытой диафрагме микроскопа.

Метод «раздавленной капли»

Культуру в изотоническом растворе хлорида натрия наносят на предметное стекло и сверху накладывают покровное. Капля материала должна быть такой величины, чтобы она заполняла все пространство между покровным и предметным стеклом и не выступала за пределы покровного. Препарат рассматривают с иммерсионной системой и слегка опущенным конденсором.

Метод «висячей капли»

Необходимо иметь предметное стекло с лупочкой. Каплю культуры наносят на покровное стекло. Сверху накладывают предметное стекло с лупочкой посредине, края которого предварительно обмазаны вазелином. Затем предметное стекло слегка прижимают к покровному, и препарат переворачивают покровным стеклом кверху. Получается герметично закрытая камера, в которой капля долго не высыхает.