9.5 Идентификация с.Рerfringens по токсигенности в реакции нейтрализации токсина антитоксином (рн) на мышах

РН токсина антитоксической сывороткой на животных основан на способности специфических антител – антитоксинов подавлять биологическую активность бактериальных экзотоксинов.

Компоненты:

1) исследуемый материал (экзотоксин С.рerfringens);

2) диагностические сыворотки с антитоксинами против С.рerfringens, C. novyi, C. septicum, C. histolyticum и др.;

3) мыши – индикатор реакции.

Диагностические сыворотки получают путем гипериммунизации кроликов анатоксинами - инактивированными эзотоксинами (формальдегидом), но сохранившими свои иммуногенные свойства, то есть способность индуцировать выроботку антител.

Принцип метода. К диагностическим видоспецифическим антитоксическим сывороткам добавляют исследуемого токсина, выдерживают в течение определенного времени и вводят внутрикожно животным. Учет реакции проводится по живой мышке.

С. рerfringens продуцирует шесть типов экзотоксина, различающихся по антигенной структуре (А, В, С, D, Е, F). Идентифицируют их с помощью диагностических типоспецифических сывороток.

9.6 Идентификация вируса клещевого энцефалита в реакции нейтрализации вирусов (рн) на мышах

Реакция нейтрализации вирусов основана на способности специфических вируснейтрализующих антител блокировать инфекционные, гемагглютинирующие, гемадсорбирующие, цитопатические, бляшкообразующие и др. свойства вирусов. Она применяется в двух направлениях:

1) для идентификации вирусов;

2) для серодиагностики вирусных инфекций, т.е. для определения нарастания титра вируснейтрализующих антител в «парных» сыворотках.

Для постановки РН на мышах с целью идентификации вируса клещевого энцефалита необходимы следующие компоненты:

1) исследуемый вируссодержащий материал (кровь, ликвор, выделенная чистая культура вируса и др.);

2) диагностическая сыворотка с антителами против вируса клещевого энцефалита;

3) индикаторный объект: две белые мыши (опыт и контроль).

Принцип. Смесью (вируссодержащий материал + диагностическая сыворотка), выдержанной в течение определенного времени, заражают лабораторных животных. При (+) реакции, т.е. при нейтрализации вируса антителами индикаторные объекты продолжают нормально существовать, а в контроле – у мышей развиваются параличи, затем погибают.

9.7 Реакция торможения гемагглютинации (ртга) (определение серотипа вируса гриппа а)

РТГА относится к реакциям нейтрализации in vitro.

Механизм. У некоторых вирусов (например, вируса гриппа) есть гемагглютинин, вызывающий агглютинацию эритроцитов различных животных в зависимости от вида вируса. При наличии в сыворотке антител – антигемагглютининов наблюдается ингибированные гемагглютинирующей активности вирусов (рис.32).

Компоненты.

1. исследуемый материал – аллантоисная жидкость куриного эмбриона;

2. диагностические противогриппозные сыворотки с антителами против серотипов вируса гриппа А: А(Н1N1), А(Н2N2), А(Н3N2 и др.;

3. 3,5% взвесь куриных эритроцитов – индикатор реакции;

4. физиологический раствор.

Реакция ставится на стекле капельным способом. На стекло наносят по 1 капле диагностических сывороток и исследуемого материала, перемешивают, затем добавляют 1 каплю взвеси эритроцитов. При положительной реакции наблюдается гомогенное покраснение, а при отрицательной – выпадение хлопьев красного цвета (гемагглютинация).