- •Практические навыки
- •Содержание
- •Введение
- •1. Соблюдение правил противоэпидемического режима и техники безопасности в бактериологических лабораториях
- •1.1 Основные правила поведения в бактериологической лаборатории
- •1.2 Правила забора материала для микробиологических исследований
- •1.3 Правила забора материала, хранения и транспортировки при особо опасных инфекциях (оои)
- •1.4 Оформление направления на микробиологическое исследование
- •1.5. Дезинфекция в микробиологической лаборатории: рук, рабочего места, выделений больного, предметных и покровных стекол.
- •1.6 Стерилизация лабораторной посуды, подготовка к стерилизации
- •2. Овладение навыками изучения морфологии и тинкториальных признаков микроорганизмов
- •2.1 Этапы приготовления мазка для иммерсионной микроскопии
- •2.2 Овладение методикой микроскопирования с иммерсионной системой
- •2.3 Сложные методы окраски: методы Грама, Циля- Нильсена, Нейссера и Бурри-Гинса Окраска мазка по Граму
- •Окраска мазка по Циль-Нильсену
- •Окраска по Нейссеру
- •Окраска по способу Ожешки
- •Обнаружение капсул по методу Бурри-Гинса
- •2.4 Методы определения подвижности бактерий Микроскопические
- •Бактериологические
- •3. Овладение навыками изучения культуральных, биохимических признаков микроорганизмов и фагочувствительности бактерий
- •3.1 Механические и биологические методы выделения чистых культур аэробных и факультативно-анаэробных бактерий
- •3.2 Метод Дригальского
- •3.3 Методы создания анаэробных условий (механические, физические, химические и биологический)
- •Физические методы удаления кислорода
- •Биологический метод удаления кислорода по Фортнеру
- •3.4 Этапы выделения чистой культуры анаэробных бактерий
- •3.5 Вирусологические методы
- •3.6 Реакция гемагглютинации (рга)
- •3.7 Методы индикации бактериофагов (качественные и количественные методы)
- •Индикация фага на твердой питательной среде по Отту.
- •3.8 Реакция фаголизиса
- •3.9 Реакция фаготипирования s.Aureus
- •4. Овладение навыками идентификации микроорганизмов по генетической структуре
- •4.1 Полимеразная цепная реакция (пцр)
- •4.2 Метод рекомбинации
- •5. Освоение принципов бактериологической оценки качества стерилизации и навыков определения антибиоткочуствительности
- •5.1 Контроль эффективности физического способа стерилизации (кипячение) бактериологическим методом
- •5.2 Определение антибиотикочусвтвительности бактерий методами «бумажных дисков» и серийных разведений Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом «бумажных дисков»
- •Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом серийных разведений
- •6. Бактериологическая диагностика дисбактериоза кишечника
- •7. Определение общего микробного числа (метод коха) и санитарно - показательных микробов воздуха
- •8. Биологический метод и методы идентификации бактерий по вирулентности
- •8.1 Заражение экспериментальных животных (биологический метод)
- •8.2 Методы определения факторов вирулентности микроорганизмов (адгезивности, ферментов агрессии бактерий: гиалуронидазы, лецитовителлазы, лизоцима; токсигенности, гемолизинов)
- •8.3 Методы определения персистентных свойств бактерий: капсулообразования, антигенов-ингибиторов фагоцитоза, антилизоцимной, антикомплементарной и антиинтерфероновой активностей
- •9. Иммунологичекие методы идентификации микроорганизмов и серодиагностики инфекционных заболеваний
- •9.1 Реакция агглютинации (ра) на стекле.
- •9.2 Развернутые реакции агглютинации Видаля, Вейгля и Райта
- •9.3 Рпга – реакция пассивной гемагглютинации (определение напряженности поствакцинального противодифтерийного и противоскарлатинозного антитоксических иммунитетов)
- •9.4 Реакция преципитации (рп): термопреципитации по Асколи и рп в геле по Оухтерлони
- •9.5 Идентификация с.Рerfringens по токсигенности в реакции нейтрализации токсина антитоксином (рн) на мышах
- •9.6 Идентификация вируса клещевого энцефалита в реакции нейтрализации вирусов (рн) на мышах
- •9.7 Реакция торможения гемагглютинации (ртга) (определение серотипа вируса гриппа а)
- •9.8 Реакции связывания комплемена: рск Борде-Жангу, рск, Вассермана, рибт – реакции иммобилизации бледной трепонемы
- •9.9 Опсоно-фагоцитарная реакция
- •9.10 Реакции непрямой иммунофлюоресценции (риф) (экспресс-диагностика и серологическая диагностика гриппа а)
- •9.11 Иммуноферментный анализ (ифа): конкуретный способ (определение hBs-аг вируса гепатита в) и непрямой способ (серологическая диагностика вич - инфекции)
- •9.12 Серологическая диагностика вич-инфекции с помощью реакции иммуноблоттинга
- •Рисунки
- •Список использованной литературы Основная литература
- •Дополнительная литература
- •3. Микробиология, вирусология: руководство к практическим занятиям: учебное пособие / Зверев в.В. ( и др.); под ред. В.В. Зверева, м.Н. Бойченко. – м.:гэотар- Медиа, 2015. – 360 с.:ил.
- •4. Медицинская микробиология и иммунология: Учебник / в.Н.Мальцев, е.П.Пашков; под ред. В.В. Зверева. – м.: Практическая медицина, 2014. – 512 с.:ил.
- •Коллектив авторов
2.3 Сложные методы окраски: методы Грама, Циля- Нильсена, Нейссера и Бурри-Гинса Окраска мазка по Граму
Метод Грама применяется для выявления грамположительных и грамотрицательных бактерий (рис.1).
Методика окраски:
Ход работы
____________________
1.На фиксированный мазок накладывают фильтровальную бумагу, пропитанную генцианвиолетом и наносят каплю воды на 2 минуты. |
Методические указания
____________________
Генцианвиалет – основная краска.
Раствор Люголя - протрава: усиливает действие основной краски у грамположительных бактерий.
Спирт – обесцвечивающий фактор.
Водный фуксин – дополнительная краска. |
Ориентировочные данные ___________________
Грамположительные бактерии (кокки) синефиолетового цвета, грамотрицательные (палочковидные формы) розового цвета. |
2.Бумагу сбрасывают и, не промывая водой, наливают раствор Люголя на 1 минуту. |
||
3.Препарат обесцвечивают 3-5 каплями спирта в течении 30 секунд до прекращения отхождения фиолетовых струек краски. |
||
4.Промывают водой. |
||
5.Докрашивают водным фуксином Пфейффера в течении 1-2 минут. |
||
6.Промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют под иммерсией. |
Способность грамположительных бактерий при окраске по Граму удерживать комплекс генцианвиолета с йодом связана со свойствами многослойного пептидогликана. Обработка спиртом вызывает сужение пор пептидогликана и тем самым задерживает краску. Наоборот, грамотрицательные бактерии после воздействия спиртом утрачивают краситель, обесцвечиваются и окрашиваются фуксином в красный цвет вследствие меньшего содержания пептидогликана, у них наиболее выражен липополисахаридный слой.
Окраска мазка по Циль-Нильсену
Метод используется для окраски кислотоустойчивых бактерий (M. tuberculosis, M leprae). Кислотоустойчивость связана с наличием в клеточной стенке и цитоплазме бактерий повышенного количества липидов, воска и оксикислот, в частности миколовой кислоты. Карболовая кислота разрыхляет клеточную стенку и тем самым повышает тинкториальные свойства, высокая концентрация красителя и нагревание усиливают реакцию взаимодействия клетки с красителями. При обработке препарата серной кислотой некислотоустойчивые бактерии обесцвечиваются и окрашиваются метиленовым синим в голубой цвет (рис.2 и 3).
Методика окраски:
Ход работы __________________________ 1.На фиксированный мазок накладывают белую фильтровальную бумагу и наливают фуксин Циля. Препарат 2-3 раза подогревают, держа высоко над пламенем до появления паров и каждый раз отставляя препарат в сторону для охлаждения. |
Ориентировочные данные ___________________________ Карболовый фуксин- основная краска; прогревание – протрава.
Наблюдать за появлением паров, глядя на мазок сбоку, а не сверху.
__________________________ Серная кислота - обесцвечивающий фактор.
Синька Леффлера – дополнительная краска.
Кислотоустойчивые бактерии рубиново – красного цвета, а остальная микрофлора – синего цвета. |
2.Дают препарату остыть, бумагу сбрасывают и препарат промывают водой. |
|
3.Препарат обесцвечивают в 5% растворе серной кислоты. |
|
4.Промывают водой. |
|
5.Докрашивают синькой Леффлера 3-5 минут. |
|
6.Промывают водой, высушивают, смотрят под иммерсией. |