- •Практические навыки
- •Содержание
- •Введение
- •1. Соблюдение правил противоэпидемического режима и техники безопасности в бактериологических лабораториях
- •1.1 Основные правила поведения в бактериологической лаборатории
- •1.2 Правила забора материала для микробиологических исследований
- •1.3 Правила забора материала, хранения и транспортировки при особо опасных инфекциях (оои)
- •1.4 Оформление направления на микробиологическое исследование
- •1.5. Дезинфекция в микробиологической лаборатории: рук, рабочего места, выделений больного, предметных и покровных стекол.
- •1.6 Стерилизация лабораторной посуды, подготовка к стерилизации
- •2. Овладение навыками изучения морфологии и тинкториальных признаков микроорганизмов
- •2.1 Этапы приготовления мазка для иммерсионной микроскопии
- •2.2 Овладение методикой микроскопирования с иммерсионной системой
- •2.3 Сложные методы окраски: методы Грама, Циля- Нильсена, Нейссера и Бурри-Гинса Окраска мазка по Граму
- •Окраска мазка по Циль-Нильсену
- •Окраска по Нейссеру
- •Окраска по способу Ожешки
- •Обнаружение капсул по методу Бурри-Гинса
- •2.4 Методы определения подвижности бактерий Микроскопические
- •Бактериологические
- •3. Овладение навыками изучения культуральных, биохимических признаков микроорганизмов и фагочувствительности бактерий
- •3.1 Механические и биологические методы выделения чистых культур аэробных и факультативно-анаэробных бактерий
- •3.2 Метод Дригальского
- •3.3 Методы создания анаэробных условий (механические, физические, химические и биологический)
- •Физические методы удаления кислорода
- •Биологический метод удаления кислорода по Фортнеру
- •3.4 Этапы выделения чистой культуры анаэробных бактерий
- •3.5 Вирусологические методы
- •3.6 Реакция гемагглютинации (рга)
- •3.7 Методы индикации бактериофагов (качественные и количественные методы)
- •Индикация фага на твердой питательной среде по Отту.
- •3.8 Реакция фаголизиса
- •3.9 Реакция фаготипирования s.Aureus
- •4. Овладение навыками идентификации микроорганизмов по генетической структуре
- •4.1 Полимеразная цепная реакция (пцр)
- •4.2 Метод рекомбинации
- •5. Освоение принципов бактериологической оценки качества стерилизации и навыков определения антибиоткочуствительности
- •5.1 Контроль эффективности физического способа стерилизации (кипячение) бактериологическим методом
- •5.2 Определение антибиотикочусвтвительности бактерий методами «бумажных дисков» и серийных разведений Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом «бумажных дисков»
- •Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом серийных разведений
- •6. Бактериологическая диагностика дисбактериоза кишечника
- •7. Определение общего микробного числа (метод коха) и санитарно - показательных микробов воздуха
- •8. Биологический метод и методы идентификации бактерий по вирулентности
- •8.1 Заражение экспериментальных животных (биологический метод)
- •8.2 Методы определения факторов вирулентности микроорганизмов (адгезивности, ферментов агрессии бактерий: гиалуронидазы, лецитовителлазы, лизоцима; токсигенности, гемолизинов)
- •8.3 Методы определения персистентных свойств бактерий: капсулообразования, антигенов-ингибиторов фагоцитоза, антилизоцимной, антикомплементарной и антиинтерфероновой активностей
- •9. Иммунологичекие методы идентификации микроорганизмов и серодиагностики инфекционных заболеваний
- •9.1 Реакция агглютинации (ра) на стекле.
- •9.2 Развернутые реакции агглютинации Видаля, Вейгля и Райта
- •9.3 Рпга – реакция пассивной гемагглютинации (определение напряженности поствакцинального противодифтерийного и противоскарлатинозного антитоксических иммунитетов)
- •9.4 Реакция преципитации (рп): термопреципитации по Асколи и рп в геле по Оухтерлони
- •9.5 Идентификация с.Рerfringens по токсигенности в реакции нейтрализации токсина антитоксином (рн) на мышах
- •9.6 Идентификация вируса клещевого энцефалита в реакции нейтрализации вирусов (рн) на мышах
- •9.7 Реакция торможения гемагглютинации (ртга) (определение серотипа вируса гриппа а)
- •9.8 Реакции связывания комплемена: рск Борде-Жангу, рск, Вассермана, рибт – реакции иммобилизации бледной трепонемы
- •9.9 Опсоно-фагоцитарная реакция
- •9.10 Реакции непрямой иммунофлюоресценции (риф) (экспресс-диагностика и серологическая диагностика гриппа а)
- •9.11 Иммуноферментный анализ (ифа): конкуретный способ (определение hBs-аг вируса гепатита в) и непрямой способ (серологическая диагностика вич - инфекции)
- •9.12 Серологическая диагностика вич-инфекции с помощью реакции иммуноблоттинга
- •Рисунки
- •Список использованной литературы Основная литература
- •Дополнительная литература
- •3. Микробиология, вирусология: руководство к практическим занятиям: учебное пособие / Зверев в.В. ( и др.); под ред. В.В. Зверева, м.Н. Бойченко. – м.:гэотар- Медиа, 2015. – 360 с.:ил.
- •4. Медицинская микробиология и иммунология: Учебник / в.Н.Мальцев, е.П.Пашков; под ред. В.В. Зверева. – м.: Практическая медицина, 2014. – 512 с.:ил.
- •Коллектив авторов
1.4 Оформление направления на микробиологическое исследование
Направление на исследование является сопроводительным документом, который прилагается к инфекционному материалу, предназначенному для лабораторных исследований.
Составляется по следующей форме:
1) название материала;
2) учреждение, направляющее материал;
3) фамилия, имя, отчество больного;
4) возраст;
5) адрес обследуемого;
6) дата заболевания;
7) дата взятия материала;
8) предполагаемый клинический диагноз;
9) подпись врача, направляющего материал.
Поступивший в лабораторию инфекционный материал регистрируется в специальном журнале.
1.5. Дезинфекция в микробиологической лаборатории: рук, рабочего места, выделений больного, предметных и покровных стекол.
Дезинфекция - это обеззараживание объектов окружающей среды с помощью химических веществ, обладающих антимикробным действием.
Цель дезинфекции – предупредить передачу возбудителей от инфицированного организма не инфецированному.
В микробиологической лаборатории используют:
1) хлорную известь (0,1 - 10% раствор);
2) хлорамин (0,5 - 5% раствор), для дезинфекции рук 0,25 – 0,5% раствор, для дезинфекции предметов ухода за больными при кишечных и воздушно-капельных инфекциях 1-3% раствор, при туберкулезе – 5% раствор;
3) фенол (карболовая кислота) в виде 3 - 5%раствора для дезинфекции помещений;
4) лизол (3 – 5% раствор);
5) биглюконат хлоргексидин (гибитан), для дезинфекции рук 0,5% раствор, для дезинфекции помещений 0,1% раствор;
6) дихлорид ртути (сулема) – иногда используют для дезинфекции предметов ухода за больными. Препарат высокотоксичен, всасывается через кожу;
7) этиловый спирт (70%), вызывающий коагуляцию белков микробов.
1.6 Стерилизация лабораторной посуды, подготовка к стерилизации
В бактериологических и вирусологических лабораториях используют обычную лабораторную посуду: цилиндры, колбы, склянки для растворения и хранения реактивов, химические пробирки. Помимо этого используют специальную посуду:
Пробирки
биологические – с крупным дном, неразвернутым краем;
центрифужные – сужены книзу, конической формы
преципитационные – очень узкие с внутренним диаметром 2-3мм
Стеклянные чашки Петри для выращивания микроорганизмов на плотных питательных средах. Их изготавливают из прозрачного стекла, не имеющего камней, пузырей. Высота чашки 20-30мм, диаметр 60-200мм
Пипетки
градуированные должны соответствовать параметрам ГОСТа
пастеровские – стеклянные трубки диаметром 5-7мм, у которых один конец оттянут над пламенем горелки в виде капилляра
Специальная лабораторная посуда должна быть чистой и стерильной. Мытье производят ершами с мылом и содой. Новую посуду следует до мытья прокипятить в 1-2% растворе хлористоводородной кислоты. Сушат посуду в сушильном шкафу.
Сухую посуду закрывают и помещают в пеналы. В пробирки вставляют ватные пробки и заворачивают в пачки по 5–10штук. К чашкам Петри подбирают крышки и завертывают по одной или несколько штук.
Пипетки закрывают ваткой с того конца, который берут в руки. Готовые пипетки заворачивают в бумагу и укладывают в пеналы.
Стерилизация проводится в сухожаровом шкафу при температуре 180°С в течение 1 часа.
