ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ

ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ

«БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ»

МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Кафедра микробиологии, вирусологии

Практические навыки

По дисциплине «Микробиология, вирусология»

УЧЕБНОЕ ПОСОБИЕ

Уфа – 2016

УДК 579 (075.8)

ББК 52.6Я7

П 69

Рецензенты: Телешева Л.Ф., проректор по научной работе, профессор кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ГБОУ ВПО «Южно-Уральский государственный медицинский университет» МЗ РФ, д.м.н.:

Чайникова И.Н, ведущий научный сотрудник Лаборатории биомониторинга и молекулярно-генетических исследований ФГБУН Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения РАН, д.м.н., профессор.

«Практические навыки» по дисциплине «микробиология, вирусология»: учебное пособие /соавт.: Г.К.Давлетшина,, М.М.Туйгунов, Ю.З.Габидуллин, А.А.Ахтариева, А.К.Булгаков, Т.А.Савченко, - Уфа:изд-во ГБОУ ВПО БГМУ Минздрава РФ, 2016 . - 84 с.

Учебное пособие подготовлено на основании рабочей программы по дисциплине «микробиология, вирусология» (2016г.), действующего учебного плана ГБОУ ВПО БГМУ Минздрава РФ (2016г.) и в соответствии с требованиями. ФГОС ВО по специальностям: 31.05.01 - лечебное дело и 31.05.02. – педиатрия.

Издание предназначено для самостоятельной аудиторной работы студентов лечебного и педиатрического факультетов. В пособии излагаются основные практические навыки по дисциплине «микробиология, вирусология», приведены основные принципы и этапы постановки микробиологических методов.

УДК 579 (075.8)

ББК 52.6Я7

© Изд-во ГБОУ ВПО БГМУ МЗ РФ

Содержание

ВВЕДЕНИЕ 6

1. СОБЛЮДЕНИЕ ПРАВИЛ ПРОТИВОЭПИДЕМИЧЕСКОГО РЕЖИМА И ТЕХНИКИ БЕЗОПАСНОСТИ В БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИХ ЛАБОРАТОРИЯХ 8

1.1 Основные правила поведения в бактериологической лаборатории 8

1.2 Правила забора материала для микробиологических исследований 9

1.3 Правила забора материала, хранения и транспортировки при особо опасных инфекциях (ООИ) 10

1.4 Оформление направления на микробиологическое исследование 11

1.5. Дезинфекция в микробиологической лаборатории: рук, рабочего места, выделений больного, предметных и покровных стекол. 12

1.6 Стерилизация лабораторной посуды, подготовка к стерилизации 12

2. ОВЛАДЕНИЕ НАВЫКАМИ ИЗУЧЕНИЯ МОРФОЛОГИИ И ТИНКТОРИАЛЬНЫХ ПРИЗНАКОВ МИКРООРГАНИЗМОВ 13

2.1 Этапы приготовления мазка для иммерсионной микроскопии 13

2.2 Овладение методикой микроскопирования с иммерсионной системой 15

2.3 Сложные методы окраски: методы Грама, Циля- Нильсена, Нейссера и Бурри-Гинса 16

2.4 Методы определения подвижности бактерий 20

3.1 Механические и биологические методы выделения чистых культур аэробных и факультативно-анаэробных бактерий 22

3.2 Метод Дригальского 24

3.3 Методы создания анаэробных условий 28

(механические, физические, химические и биологический) 28

3.4 Этапы выделения чистой культуры анаэробных бактерий 29

3.5 Вирусологические методы 31

3.6 Реакция гемагглютинации (РГА) 33

3.7 Методы индикации бактериофагов (качественные и количественные методы) 34

3.8 Реакция фаголизиса 36

3.9 Реакция фаготипирования S.aureus 36

4. ОВЛАДЕНИЕ НАВЫКАМИ ИДЕНТИФИКАЦИИ МИКРООРГАНИЗМОВ ПО ГЕНЕТИЧЕСКОЙ СТРУКТУРЕ 37

4.1 Полимеразная цепная реакция (ПЦР) 37

4.2 Метод рекомбинации 38

5. ОСВОЕНИЕ ПРИНЦИПОВ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ОЦЕНКИ КАЧЕСТВА СТЕРИЛИЗАЦИИ И НАВЫКОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИБИОТКОЧУСТВИТЕЛЬНОСТИ 39

5.1 Контроль эффективности физического способа стерилизации (кипячение) бактериологическим методом 39

5.2 Определение антибиотикочусвтвительности бактерий методами «бумажных дисков» и серийных разведений 40

6. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ДИСБАКТЕРИОЗА КИШЕЧНИКА 42

7. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО МИКРОБНОГО ЧИСЛА (МЕТОД КОХА) И САНИТАРНО - ПОКАЗАТЕЛЬНЫХ МИКРОБОВ ВОЗДУХА 44

8. БИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД И МЕТОДЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ БАКТЕРИЙ ПО ВИРУЛЕНТНОСТИ 45

8.1 Заражение экспериментальных животных 45

(биологический метод) 45

8.2 Методы определения факторов вирулентности микроорганизмов (адгезивности, ферментов агрессии бактерий: гиалуронидазы, лецитовителлазы, лизоцима; токсигенности, гемолизинов) 48

8.3 Методы определения персистентных свойств бактерий: капсулообразования, антигенов-ингибиторов фагоцитоза, антилизоцимной, антикомплементарной и антиинтерфероновой активностей 50

9. ИММУНОЛОГИЧЕКИЕ МЕТОДЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ МИКРООРГАНИЗМОВ И СЕРОДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ 53

9.1 Реакция агглютинации (РА) на стекле. 53

9.2 Развернутые реакции агглютинации Видаля, Вейгля и Райта 54

9.3 РПГА – реакция пассивной гемагглютинации (определение напряженности поствакцинального противодифтерийного и противоскарлатинозного антитоксических иммунитетов) 56

9.4 Реакция преципитации (РП): термопреципитации по Асколи и РП в геле по Оухтерлони 58

9.5 Идентификация С.рerfringens по токсигенности в реакции нейтрализации токсина антитоксином (РН) на мышах 60

9.6 Идентификация вируса клещевого энцефалита в реакции нейтрализации вирусов (РН) на мышах 60

9.7 Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) (определение серотипа вируса гриппа А) 61

9.8 Реакции связывания комплемена: РСК Борде-Жангу, РСК, 62

Вассермана, РИБТ – реакции иммобилизации бледной трепонемы 62

9.10 Реакции непрямой иммунофлюоресценции (РИФ) (экспресс-диагностика и серологическая диагностика гриппа А) 67

9.11 Иммуноферментный анализ (ИФА): конкуретный способ (определение HBs-АГ вируса гепатита В) и непрямой способ (серологическая диагностика ВИЧ - инфекции) 69

9.12 Серологическая диагностика ВИЧ-инфекции с помощью реакции иммуноблоттинга 72

РИСУНКИ 74

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 83

3. Микробиология, вирусология: руководство к практическим занятиям: учебное пособие / Зверев В.В. ( и др.); под ред. В.В. Зверева, М.Н. Бойченко. – М.:ГЭОТАР- Медиа, 2015. – 360 с.:ил. 84

4. Медицинская микробиология и иммунология: Учебник / В.Н.Мальцев, Е.П.Пашков; под ред. В.В. Зверева. – М.: Практическая медицина, 2014. – 512 с.:ил. 84

Коллектив авторов 85