6. Учесть реакцию гемагглютинации (рга) с целью индикации вируса гриппа

Ряд вирусов (ортомиксовирусы, парамиксовирусы) содержат в суперкапсиде гликопротеиновые шипы, обладающие гемагглютинирующей активностью и вызывающие гемагглютинацию («склеивание» эритроцитов).

Метод диагностики: вирусологический

Компоненты: вирусологический материал, 0,9% р-р NaCl, 1% суспензия отмытых куриных эритроцитов.

Постановка: Разведение вирусологического материала физиологическим раствором в ряде лунок по 0,5 мл. В каждую лунку вносят суспензию эритроцитов по 0,2 мл. Выдерживают при комнатной температуре в течение 40 мин.

Учет: Положительная реакция — осадок эритроцитов с неровными краями в виде зонтика. Отрицательная реакция — осадок эритроцитов с ровными краями в виде пуговки. Титр РГА определяют по максимальному разведению, при котором наблюдается гемагглютинация (красный зонтик).

Заключение: Вирусологический материал содержит вирус гриппа в титре 1:200.

IV. Примеры ситуационных задач

Ситуационная задача № 1

При учете реакции подавления метаболической активности (цветная проба) получены следующие результаты: через 48 ч. инкубации в рабочей пробирке выявлена жидкость желтого цвета. Сформулируйте заключение по этой реакции:

1. Вирусологический материал содержит вирус

2. Вирусологический материал не содержит вирус

3. ЦПД положительное

4. ЦПД отрицательное

Ситуационная задача № 2

В результате культивирования вируса гриппа в аллантоисной жидкости куриного эмбриона необходимо убедиться, что вирус размножился в достаточном количестве. Для этого нужно:

1. Произвести электронную микроскопию вируссодержащего материала

2. Добавить к аллантоисной жидкости индикатор рН среды

3. Сделать мазок, окрасить по Граму и микроскопировать

4. Поставить реакцию агглютинации

5. Поставить реакцию гемагглютинации

Тема 2: Идентификация вирусов. Серодиагностика. Генетические методы диагностики (молекулярная гибридизация, полимеразная цепная реакция).

Цель занятия: знать: методы серологической и генетической идентификации вирусов (молекулярная гибридизация (МГ), полимеразная цепная реакция (ПЦР).

уметь: учитывать и интерпретировать реакцию торможения гемагглютинации (РТГА), реакцию нейтрализации (РН) с учётом по цветной пробе, иммуноферментный анализ (ИФА), реакцию иммунофлюоресценции (РИФ), радиоиммунный анализ (РИА).

Задание на дом:

I. Вопросы для самоподготовки:

1. Идентификация вирусов и ее виды

2. Идентификация вирусов по антигенному строению:

а) реакция торможения гемагглютинации (РТГА)

б) реакция нейтрализации (РН)

в) реакция связывания комплемента (РСК)

г) иммуноферментный анализ (ИФА)

д) реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

е) радиоиммунный анализ (РИА)

3. Методы генетической идентификации вирусов

а) молекулярная гибридизация (МГ)

б) полимеразная цепная реакция (ПЦР)

II. Базовый текст

1. Иденификация вирусов и ее виды

Идентификация (определение вида, типа) вирусов осуществляется, в основном, с помощью иммунологических реакций, основанных на взаимодействии антигенов вирусов и соответствующих им антител.

1. При выделении вирусов от больного производят идентификацию возбудителя путем изучения его антигенных свойств с помощью иммунных диагностических сывороток, т.е. сывороток крови гипериммунизированных животных, содержащих специфические антитела. Это так называемая серологическая идентификация вирусов.

Для серологической идентификации вирусов (идентификация вирусов по антигенному строению) используют следующие наиболее распространенные реакции: реакция торможения гемагглютинации (РТГА), реакция нейтрализации (РН), реакция связывания комплемента (РСК), иммуноферментный анализ (ИФА), реакция иммунофлюоресценции (РИФ), радиоиммунный анализ (РИА).

Ретроспективным методом диагностики вирусных инфекций является серологический метод с парными сыворотками больного, взятых в период заболевания и период реконвалесценции с интервалом 2-3 недели.

2. Генетическая идентификация вирусов (идентификация по нуклеиновой кислоте)

а) молекулярная гибридизация (МГ),

б) полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Для проведения диагностики вирусных инфекций с помощью нуклеиновых зондов, ПЦР требуется 24-48 часов.