4. Реакция Манчини: цель, механизм и ингредиенты реакции
Реакция радиальной иммунодиффузии (реакция Манчини). Иммунную антиглобулиновую сыворотку (анти-IgG) смешивают с расплавленным агаровым гелем и равномерно наливают на стекло. После застывания в геле делают лунки, в которые помещают антиген (Аг) в различных разведениях. В качестве антигена используют сыворотки человека с известной концентрацией IgG и исследуемые сыворотки с неизвестной концентрацией IgG. Антиген, диффундируя в гель, образует с антителами антиглобулиновой сыворотки кольцевые зоны преципитации вокруг лунок. Диаметр кольца преципитации пропорционален концентрации антигена (рис. 29). Реакцию используют для определения в сыворотке крови иммуноглобулинов различных классов, компонентов системы комплемента и др. Постановка реакции (см. практическую часть).
Рис. 29. Реакция радиальной иммунодиффузии по Манчини
5. Механизм, ингредиенты, постановка реакции определения титра комплемента
Комплемент — это совокупность нескольких нормальных компонентов свежей сыворотки с различными физико-химическими свойствами. Он содержится в большинстве сывороток теплокровных и холоднокровных животных. Основным свойством комплемента является его способность вызывать лизис сенсибилизированных соответствующими иммунными сыворотками клеток, а также адсорбироваться системами антиген + антитело. Комплемент широко применяется для серологической диагностики ряда инфекционных заболеваний в реакции связывания комплемента (сифилис, гонорея, бруцеллез, туляремия, риккетсиозы, грипп, клещевой энцефалит и др.).
Учитывая чрезвычайную лабильность некоторых компонентов комплемента, для постановки РСК выбирают оптимальную дозу комплемента. Для этого производят его титрование в присутствии гемолитической системы. Титр комплемента минимальная его концентрация, обеспечивающая полный лизис 3 %-ной взвеси бараньих эритроцитов в присутствии гемолитической сыворотки. Рабочая доза комплемента увеличивается по сравнению с титром на 25–30 %. Избыток или недостаток комплемента могут значительно исказить результаты РСК. Реакция расчета титра комплемента (см. практическую работу).
6. Понятие об иммунопрофилактике и иммунотерапии. Показания к вакцинации и противопоказания
Иммунопрофилактика и иммунотерапия являются разделами иммунологии, которые изучают и разрабатывают способы и методы специфической профилактики, лечения и диагностики инфекционных и неинфекционных болезней с помощью иммунобиологических препаратов, оказывающих влияние на функцию иммунной системы, или действие которых основано на иммунологических принципах.
Иммунопрофилактика направлена на создание активного или пассивного иммунитета к возбудителю инфекционной болезни (антигену) с целью предупреждения возможного заболевания путем формирования невосприимчивости к ним организма.
Иммунотерапия направлена на лечение уже развившейся болезни, в основе которой лежит нарушение функции иммунной системы.
Разработкой и изучением иммунобиологических препаратов занимается раздел иммунологии иммунобиотехнология.
Показаниями к вакцинации являются наличие или угроза распространения инфекционных заболеваний, а также возникновение эпидемий среди населения. В России принят Федеральный закон «О вакцинопрофилактике инфекционных заболеваний человека», который предусматривает вакцинацию населения согласно национальному календарю вакцинации и по эпидемиологической ситуации, определяет права и обязанности граждан в области вакцинопрофилактики, а также правовое регулирование деятельности государственных органов, учреждений, должностных лиц и установливает их ответственность в области вакцинопрофилактики.
Принципы вакцинации:
Риск от вакцинации должен быть меньше, чем вред наносимый заболеванием.
Заболеваемость среди привитых должна быть примерно в пять раз меньше, чем среди непривитых.
Проведение вакцинации должно иметь эпидемиологическое обоснование.
Часть вакцин применяется для плановой обязательной профилактики инфекционных заболеваний и проводится в сроки, установленные Министерством здравоохранения: противотуберкулезная вакцина BCG, АКДС, против гепатита В, полиомиелитная вакцина, паротитная, коревая (календарь прививок смотри в приложении № 1).
Другие вакцины являются обязательными для ограниченного контингента людей, проживающих в определенной местности (например, вакцина против клещевого энцефалита) или при опасности профессионального контакта с возбудителем (например, сибиреязвенная, бруцеллезная, туляремийная, чумная вакцины).
Наконец, некоторые вакцины применяют по эпидемиологическим показаниям. Они предназначены для предупреждения распространения эпидемий (например, вакцины против гриппа).
Значительно реже вакцины применяют с целью иммуннотерапии, в основном, в тех случаях, когда инфекционный процесс носит затяжной хронический характер. С этой целью применяют убитые вакцины.
Вместе с тем, при применении вакцин следует помнить, что это грозное средство воздействия на иммунную систему организма. Поэтому применение вакцинных препаратов должно проводится при её нормальном функционировании, при относительно «спокойном» состоянии иммунной системы. В связи с этим, применение вакцин, особенно, у детей имеет ряд ограничений.
Противопоказания к применению вакцинации:
Острые заболевания инфекционной и неинфекционной природы.
Аллергические состояния и заболевания.
Аутоиммунные и коллагеновые болезни.
Гематологические заболевания.
Некоторые первичные и вторичные иммунодефициты.
Некоторые соматические заболевания: эндокринной, нервной, сердечно-сосудистой систем, преимущественно с хроническим течением.
Наличие злокачественных новообразований.
Примеры вакцин, применяемых с лечебной целью
стафилококковая аутовакцина готовится из убитых стафилококков, являющихся возбудителями заболевания у данного больного и используется для его лечения;
бруцеллезная вакцина представляет собой взвесь убитых нагреванием бруцелл овечьего и коровьего видов;
гонококовая вакцина взвесь убитых нагреванием гонококков, используется для провокации при хронической гонорее;
спиртовая дизентерийная вакцина содержит дизентерийные микробы Флекснера и Зонне, применяется для лечения затяжных и хронических форм дизентерии;
В отличие от иммунопрофилактики, когда антиген-содержащий препарат вводят для создания активного иммунитета с целью предупреждения инфекционного заболевания, иммуннотерапия служит вспомогательным методом лечения и применяется с целью повышения реактивности организма. Это бывает целесообразно, например, при хронических формах инфекционных заболеваний (хронический бруцеллёз, хроническая туляремия) и у пациентов с синдромом иммунодефицита.
Требования, предъявляемые к вакцинным препаратам:
высокая иммуногенность (способность создавать напряженный, прочный и длительный иммуннитет;
безвредность (отсутствие побочных реакций на введение вакцины;
ареактогенность (минимальное сенсибилизирующее действие);
стандартность (вакцинные препараты должны соответствовать международным стандартам, разработанным Международными лабораториями по биологической стандартизации в системе ВОЗ);
специфическая стерильность, т.е. отсутствие микробного загрязнения посторонними агентами (бактериями, спорами, грибами, вирусами).
Осложнения при применении вакцин:
Далеко не все вакцинные препараты отвечают выше изложенным требованиям, поэтому у определенной части вакцинированных людей возникают побочные реакции и осложнения.
К общим реакциям относятся такие объективные и субъективные показатели как повышение температуры, головная боль, боли в суставах, тошнота, рвота и т.д.
Под местной реакцией подразумевают реакции, которые возникают в месте введения вакцины:
при парентеральном введении отек, гиперемия, формирование инфильтрата и регионарного лимфаденита;
при аэрозольной, интраназальной иммунизации катаральные явления со стороны верхних дыхательных путей и конъюнктивит;
при энтеральной иммунизации тошнота, рвота, боли в животе.
При иммунизации убитыми вакцинами, химическими и анатоксинами общие и местные побочные реакции бывают однотипными, тогда как при введении живых бактериальных и вирусных вакцин они в значительной степени специфичны, что обусловлено свойствами вакцинного штамма.
Интервал между проведенной прививкой и появлением побочных реакций зависит от характера препарата и от иммунологического статуса прививаемого.
Подводя итог вышесказанному, еще раз следует подчеркнуть, что вакцины это препараты для создания искусственного АКТИВНОГО иммунитета, причем, вакцины, приготовленные из живых и убитых микробов, а также химические вакцины создают АНТИМИКРОБНЫЙ иммунитет, а анатоксины АНТИТОКСИЧЕСКИЙ иммунитет. Все перечисленные препараты обеспечивают формирование иммунной реакции организма, а применяемый метод получил название активной иммунизации.