3. Разобрать схему постановки и учесть рск в серодиагностике Ку-лихорадки.

Метод диагностики: серологический — используют для выявления противококсиеллезных антител в сыворотке крови больного.

Компоненты: исследуемая сыворотка больного человека (в которой определяют антитела к возбудителю Ку-лихорадки), коксиеллезный диагностикум (взвесь убитых коксиелл), комплемент в рабочей дозе и гемолитическая система (состоящая из гемолитической сыворотки кролика и эритроцитов барана), коксиеллезная диагностическая сыворотка и физиологический раствор.

Постановка: в рабочую пробирку вносят исследуемую сыворотку больного человека в титре 1:40, коксиеллезный диагностикум, комплемент в рабочей дозе. Контроли: 1 пробирка — контроль сыворотки больного. В тест-системе находятся сыворотка больного, комплемент и физиологический раствор; 2 пробирка — контроль комплемента: коксиеллезная диагностическая сыворотка, коксиеллезный диагностикум и комплемент; 3 пробирка — контроль диагностикума: коксиеллезный диагностикум, комплемент и физиологический раствор.

После инкубации опытной и контрольных пробирок в течение 30-40 минут при температуре 37°C в них добавляют гемолитическую систему и снова инкубируют 40 минут при температуре 37 °C.

Учет реакции начинают с контролей.

1 контроль сыворотки больного — гемолиз эритроцитов («лаковая кровь»). Комплемент не связался в тест-системе с компонентами сыворотки, т.к. нет комплекса Аг-Ат, поэтому после добавления гемолитической системы в присутствии свободного комплемента произошел гемолиз эритроцитов. Контроль правильный.

2 контроль комплемента — гемолиз отсутствует, на дне пробирки осадок эритроцитов. В тест-системе составлен заведомо положительный комплекс Аг-Ат, и комплемент в рабочей дозе полностью с ним связался без остатка. При добавлении гемолитической системы в отсутствии комплемента гемолиза не происходит, и эритроциты выпадают в осадок. Контроль правильный.

В случае передозировки комплемента в данной пробирке произойдет гемолиз.

3 контроль диагностикума — гемолиз эритроцитов («лаковая кровь»). Комплемент не связался в тест-системе с антигенами диагностикума, т.к. нет комплекса Аг-Ат, поэтому после добавления гемолитической системы в присутствии свободного комплемента произошел гемолиз эритроцитов. Контроль правильный.

Опытная пробирка: положительная реакция «+» — пробирка с ровным осадком в виде «красной пуговки», гемолиз отсутствует (возбудитель Ку-лихорадки и антитело образуют иммунный комплекс, к которому через Fс-фрагмент антител присоединяется комплемент, т.е. происходит связывание комплемента комплексом Аг-Ат. При добавлении гемолитической системы гемолиз сенсибилизированных антителами эритроцитов не произойдет, т.к. комплемент весь израсходован на формирование первоначального иммунного комплекса. Отрицательная реакция «-» — содержимое пробирки равномерно красного цвета («лаковая кровь») — гемолиз эритроцитов. Если антиген и антитело не соответствуют друг другу, т.е. в исследуемом образце нет антитела, комплемент остается свободным и присоединится к комплексу эритроцит — антиэритроцитарное антитело (гемолитическая система), вызывая гемолиз.

Заключение: Исследуемая сыворотка содержит антитела к возбудителю Ку-лихорадки.