3. Учесть опыт определения чувствительности микрофлоры гноя или фекалий к антибактериальным препаратам диско-диффузионным методом.

Диско-диффузионный метод используется для оценки эффективности антибиотиков в клини­ческих условиях. Питательную среду (Мюллера-Хинтона, АГВ) разливают в чаш­ки, помещенные на строго горизонтальной поверхности, заполнив их на одинаковую высоту 4 мм (25 мл среды для чашек с внутренним диаметром 9 см). Клинический материал (гной), выделенную от больного, засевают на поверхность питательного ага­ра сплошным газоном. После посева крышку чашки при­открывают не более чем на 15 мин и дают поверхности среды подсохнуть. Затем стерильным пинцетом следует положить на поверхность агара бумажные диски, про­питанные раствором определенного антибиотика, и слег­ка придавить. Расстояние между дисками и краем чаш­ки должно быть не менее 15-20 мм. Чашки инкубируют около 18-24 ч при 37°С в перевернутом положении. При на­личии чувствительной к антибиотику флоры вокруг со­ответствующих дисков отмечается зона угнетения роста микроорганизмов. Диаметр зоны измеряют в мм, определяя чувствительность: высокая (>25 мм), средняя (15-25 мм), низкая (10-15 м м).

4. Учесть результаты определения факторов патогенности стафилококков

Гемолизин (экзофермент, по механизму действия мембранотоксин) определяют путем посева испытуемой культуры на чашки Петри с кровяным агаром. Посевы инкубируют при 37°С в течение 18-24 часов. Вокруг колоний гемолитических микроорганизмов образуются зоны полного (β) или неполного, зеленящего (ά) гемолиза.

Для обнаружения лецитиназы (лецитовителазы) производят посев исследуемой культуры на питательный агар с лецитином (желточный агар). Вокруг колоний бактерий, выделяющих фермент, образуется зона помутнения с перламутровым блеском.

Плазмокоагулаза выявляется при посеве испытуемой культуры в 0,4 мл стерильной цитратной плазмы крови. Посевы инкубируют при 37°С в течение 2-5 ч. В случае образования фермента происходит свертывание плазмы (образование геля), а в контроле без стафилококка она остается жидкой (золь).

5. Микроскопировать с масляной иммерсией готовые микропрепараты различных видов стрептококков (s.Pyogenes, s.Pneumoniae), описать морфологические и тинкториальные свойства, зарисовать

S.pyogenes в мазках, окрашенных по Граму представлены неподвижными сферическими или слегка вытянутыми кокками размером 0,5-2,0 мкм, располагающиеся парами или короткими цепочками (от греч. streptos — цепочка и kokkos — ягода); грамположительны.

Пневмококки (S.pneumoniae ) представлены неподвижными овальными или ланцетовидными кокками диаметром около 1 мкм. В мазках из клинического материала располагаются парами, окруженными толстой капсулой.

6. Произвести учёт реакции, поставленной на определение антител к о-стрептолизину в диагностике ревматизма.

Реакция основана на подавлении (нейтрализации) антителами сыворотки крови способности О-стрептолизина вызывать гемолиз. Реакцию ставят со стандартным сухим О-стрептолизином. Компоненты реакции: 1. Исследуемая сыворотка

2. О-стрептолизин

3. 5% взвесь эритроцитов

4. фосфатный буфер

Для постановки реакции исследуемую сыворотку прогревают при 56°С в течение 30 минут и разводят фосфатным буфером 1:50, 1:250, 1:1000. Диагностический препарат О-стрептолизина также разводят буфером и применяют в количестве 0,3 мл, в котором содержится 1 рабочая доза О-стрептолизина. Рабочая доза — это количество О-стрептолизина, которое почти полностью нейтрализуется половиной международной единицы анти-О-стрептолизина стандарта ГИСК. О-стрептолизин в рабочей дозе должен вызывать полный лизис 0,2 мл 5% взвеси эритроцитов. Разведенную сыворотку и другие ингредиенты разливают по пробиркам согласно таблице №5 инкубируют. После инкубации отмечают последнюю пробирку, в которой сыворотка еще нейтрализует рабочую дозу О-стрептолизина (гемолиз отсутствует).

Таблица 5. Схема постановки антистрептолизиновой реакции с О-стрептолизином

Ингредиент	Количество материала (мл)
Номера пробирок	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	Контроль
Исследуемая сыворотка 1:50	0,4	0,2	0,15	0,1	-	-	-	-	-	-	-	--
Исследуемая сыворотка 1:250	-	-	-	-	0,4	0,3	0,25	0,2	0,1	-	-	--
Исследуемая сыворотка 1:1000	-	-	-	-	-	-	-	-	-	0,25	0,1	--
Фосфатный буфер, мл	0,1	0,3	0,35	0,4	0,1	0,2	0,25	0,3	0,4	0,25	0,25	0,8 0,5
Стрептолизин О, мл	По 1 мл в каждую пробирку, инкубация 45 мин при 37º С											— 0,3
5% взвесь эритроцитов, мл	По 0,2 мл в каждую пробирку, инкубация 1 ч при 37º С											— -
Число АЕ St-О в 1 мл в международных единицах	65	125	165	250	313	413	500	625	1250	2000	3000	--

Титр сыворотки выражают числом единиц анти-О-стрептолизина (AE St-O) в 1 мл (указаны на демонстрационных пробирках). Титр анти-О-стрептолизина до 250 AE St-O обнаруживается у практически здоровых людей. При ревматическом процессе с первых дней болезни антитела выявляют в высоких титрах — 500 AE St-O и выше.