10. Иммунитет

Повторные заболевания и рецидивы не известны. Постифекционный иммунитет пожизненный.

11. Методы лабораторной диагностики

L. pneumophila чрезвычайно трудный для культивирования микроорганизм. Для выделения культуры возбудителя используют специальные среды, содержащие L-цистеин (среда Мюллера-Хинтона, угольно-дрожжевой агар и др.). Посевы инкубируют при температуре 35⁰С в присутствии 3-5% СО₂ 3-5 дней.

1. Тест прямой иммунофлюоресценции наиболее популярен в клинической практике. Он очень быстр в выполнении, но его чувствительность вариабельна и относительно невысока (18–75%). Спустя 4–6 дней после начала адекватной антибактериальной терапии определение антигена становится невозможным.

2. Антиген L.pneumophila может быть также обнаружен в моче радиоиммунологически, с использованием ИФА или в реакции латексной агглютинации. Однако следует иметь в виду, что легионеллезный антиген может персистировать в течение многих месяцев после выздоровления, а ИФА пригоден только для идентификации L. pneumophila 1-ой серогруппы.

3. Непрямая иммунофлюоресценция, ИФА и микроагглютинация. В типичных случаях сероконверсия (четырехкратное нарастание титра специфических антител) наблюдается через 4-8 недель, однако у лиц старших возрастных групп этот временной интервал может достигать 14 недель. Следует также учитывать тот факт, что 20-30% пациентов, переносящих острую легионеллезную инфекцию, не демонстрируют нарастания титра антител. ИФА характеризуется высокой специфичностью (95%) и приемлемой чувствительностью (85%) при определении специфических IgG и IgM. Описываются отдельные наблюдения перекрестных реакций с Pseudomonas aeruginosa, Chlamydia/Chlamydophila spp., Mycoplasma pneumoniae и Campylobacter spp.

12. Лечение и профилактика

Основной принцип — это антибиотикотерапия, с применением препаратов, способных к внетриклеточной пенетрации и аккумуляции: макролиды, рифампицыны и тетрациклины. Курс 7-14 дней.

Специфическая профилактика не разработана.

III. План практической работы

1. Заполнить таблицу: «Основные свойства возбудителей атипичной пневмонии».

2. Изучить характер роста пневмонийной микоплазмы на питательной среде. Описать культуральные свойства колоний, зарисовать.

Культивируются микоплазмы на сывороточном агаре с добавлением ацетата таллия, для подавления сопутствующей микрофлоры. В питательные среды необходимо вносить нативную сыворотку, холестерин, нуклеиновые кислоты, углеводы, витамины и различные соли (оптимум рН — 6,8-7,4). Микроорганизм растет крайне медленно, 7-14 сут. (температурный оптимум — 36-37º). На плотных питательных средах образуют мелкие полупрозрачные колонии с приподнятым зернистым центром, придающим им вид «яичницы-глазуньи».

3. Выписать этапы проведения полимеразной цепной реакции (пцр)

Для проведения этой реакции из исследуемого материала выделяют ДНК, специфичную для данного микроба.

1 этап: денатурация ДНК (расплетение двойной спирали). Протекает при 93-95°С течение 30-40 сек.

2 этап: присоединение праймеров (отжиг). Присоединение праймеров (праймеры — синтетические олигонуклеотиды) происходит комплементарно к соответствующим последовательностям на противоположных цепях ДНК на границах специфического участка. Для каждой пары праймеров существует своя температура отжига, значения которой располагаются в интервале 50-65°С. Время отжига — 20-60 сек.

3 этап: достраивание цепей ДНК. Комплементарное достраивание цепей ДНК происходит от 5’-конца к 3’-концу цепи в противоположных направлениях, начиная с участков присоединения праймеров. Материалом для синтеза новых цепей ДНК служат добавляемые в раствор дезоксирибонуклеотидтрифосфаты (дНТФ). Процесс синтеза катализируется ферментом термостабильной ДНК-полимеразой (Taq-полимеразой) и проходит при температуре 70-72°С. Время протекания синтеза — 20-40 сек.

4 этап: Образовавшиеся в первом цикле амплификации новые цепи ДНК служат матрицами для второго цикла амплификации, в котором происходит образование искомого специфического фрагмента ДНК (ампликона).

5 этап: В последующих циклах амплификации ампликоны служат матрицей для синтеза новых цепей. Таким образом происходит накопление ампликонов в растворе по формуле 2n, где n-число циклов амлификации .

6 этап: проведение достоверной визуальной детекции этого фрагмента методом электрофореза в агарозном геле.