I. План практической работы

1. Приготовить мазок из гноя больного фурункулёзом или фекалий ребёнка при стафилококковом энтероколите, окрасить по Граму, микроскопировать, зарисовать.

Приготовление мазка. Мазок выполняют на чистом, обезжиренном предметном стекле, по поверхности которого капля воды должна растекаться равномерно. Для очистки стекла необходимо натереть его кусочком мыла и удалить мыло с помощью сухой или влажной марлевой салфетки. Для приготовления мазка на обратной стороне предметного стекла маркируют карандашом по стеклу зону с мелкую монету, бактериологической петлей наносят исследуемый материал и равномерно распределяют в маркированной зоне. Препарат высушивают при комнатной температуре на воздухе. Хорошо приготовленный тонкий мазок высыхает равномерно и быстро. Если же высушивание препарата замедлено, то препарат подогревают, держа стекло мазком вверх, в потоке теплого воздуха над пламенем горелки. Для последующей фиксации предметное стекло проводят через верхнюю, наиболее горячую часть пламени горелки в положении мазком вверх 3 раза (в течение 3-5 сек).

Этапы окраски по Грамму:

1. На фиксированный мазок поместить фильтровальную бумажку, пропитанную генцианвиолетом, смочить водой, 2-3 минуты.

2. Снять бумажку, слить с препарата оставшуюся краску и налить раствор Люголя на 1 минуту.

3. Для дифференцирования нанести на мазок этиловый спирт и обесцветить в течение 3-6 с, промыть водой.

4. Нанести фуксин Пффейфера (водный раствор фуксина) и докрасить 1-2 мин, промыть водой, высушить.

Порядок проведения иммерсионной микроскопии:

1. Поднять конденсор микроскопа до уровня предметного стекла и полностью открыть диафрагму. Включить осветитель и установить максимальную освещенность поля зрения с помощью зеркала;

2. На мазок нанести каплю иммерсионного масла, поместить препарат на предметный столик микроскопа. Поставить в рабочее положение иммерсионный объектив, маркированный черной линией;

3. Под контролем зрения, глядя сбоку, с помощью макровинта осторожно опустить тубус микроскопа до погружения иммерсионного объектива в каплю масла. Глядя в окуляр, очень медленно поднимать тубус при помощи макровинта, пока не появится изображение объекта. Далее провести точную фокусировку с помощью микровинта;

4. В процессе микроскопии следует медленно передвигать препарат, установить наилучшее поле зрения и изучить морфологические (форму и расположение) и тинкториальные (окрашивание) свойства микроорганизмов;

5. По окончании микроскопии поднять тубус и после этого снять препарат с предметного столика микроскопа. Протереть фронтальную линзу иммерсионного объектива чистой марлевой салфеткой, смоченной спиртом, и повернуть револьвер таким образом, чтобы ни один из объективов не был направлен в сторону конденсора.

2. Произвести посев гноя или фекалий на жса с целью выделения чистой культуры стафилококков методом истощающего штриха.

Желточно-солевой агар — элективная (селективная) питательная среда, поскольку содержит высокие концентрации соли (8-10%), что позволяет ингибировать рост сопуствующей микрофлоры, не препятствуя размножению стафилококков. ЖСА одновременно позволяет дифференцировать лецитиназа-положительные и лецитиназа-отрицательные стафилококки, вследствие присутствия желтка куриного яйца. Лецитиназа-положительные стафилококки продуцируют фермент лецитиназу, который расщепляет лецитин куриного желтка и вокруг колоний образуется зона помутнения с перламутровым блеском.