- •Департамент кадровой политики и образования
- •Московская государственная академия ветеринарной
- •Медицины и биотехнологии имени к.И. Скрябина
- •Основы производства гипериммунных сывороток и иммуноглобулинов
- •Учебно-методическое пособие по биотехнологии
- •Основы производства гипериммунных сывороток и иммунноглобулинов
- •4. Материальное обеспечение:
- •План проведения лабораторной работы
- •Классификация гипериммунных сывороток
- •Отбор животных-продуцентов. Грундиммунизация
- •Подбор животных-продуцентов
- •Грундиммунизация животных продуцентов
- •Гипериммунизация животных
- •Приготовление сывороточных препаратов
- •2. Основы биотехнологии производства гамма – глобулинов
- •2.1. Общие сведения о гамма-глобулинах
- •2.2. Содержание гамма-глобулинов в сыворотке крови животных
- •Содержание белковых фракций в сыворотке крови
- •2.3. Связь гамма-глобулина с антителами
- •2.4. Основные типы иммуноглобулинов
- •2.5. Методы получения гамма-глобулинов
- •2.5.1. Электрофоретическое разделение белков
- •2.5.2. Разделение белков методом хроматографии
- •2.5.3. Ультрафильтрационный метод выделения гамма-глобулина
- •2.5.4. Метод солевого фракционирования (высаливание)
- •Осаждение гамма-глобулина сернокислым аммонием
- •Осаждение гамма-глобулина хлористым натрием
- •Осаждение гамма-глобулина сернокислым натрием
- •2.5.5. Спиртовой метод получения гамма-глобулина
- •Фракционирование сыворотки крови спиртовым методом (вариант б)
- •2.5.6. Спиртово-хлороформенный метод получения гамма-глобулина
- •2.5.7. Риваноловый метод получения гамма-глобулина
- •3. Контроль готового препарата гамма-глобулина
- •Получение гамма-глобулина на биопредприятиях
- •Получение гамма-глобулина риваноловым методом в условиях хозяйства
- •Применение гамма-глобулинов в ветеринарии
- •7. Практическая работа
- •1. Получить гамма-глобулин из сыворотки крови крупного рогатого скота риваноловым методом
- •2. Провести контроль качества готового препарата
- •3. Расфасовать готовый препарат
- •8. Список использованной литературы
- •Содержание
2.4. Основные типы иммуноглобулинов
К иммуноглобулинам относятся белки животного происхождения, которые могут обладать определённой активностью.
Антитела - это белки, сходные с иммуноглобулинами по химической структуре и по антигенной специфичности (Р.С. Незлин, 1966).
Иммуноглобулины присутствуют в сыворотке крови, лимфатических узлах, селезёнке, спинномозговой жидкости и т.д. Они отличаются высоким содержанием оксиаминокислоты дикарболовых аминокислот.
Иммуноглобулины (гамма-глобулины) являются белками высокой реактивности. Они легко вступают в соединения с различными веществами и являются распределителями и переносчиками различных веществ для их обезвреживания или утилизации.
Нормальные (неспецифические) глобулины фиксируют на себе липоиды, углеводы, гормоны, ферменты, а также продукты обмена веществ, клеточного распада и вредные вещества, проникающие в организм, в т.ч. и микроорганизмы.
Антитела гетерогенны в отношении принадлежности к тем или иным классам и подклассам иммуноглобулинов. Существуют также различия иммуноглобулинов (антител) по их собственным антигенным свойствам, что выявляется с помощью специфических антисывороток.
Известно пять классов иммуноглобулинов:
- Jg G (доминируют в сыворотке крови);
- Jg M (находят в сыворотке крови. Эту группу иммуноглобулинов называют также макроглобулинами, гамма 1М, гамма 2М, 19S гамма). Они характеризуются в 6 раз большим молекулярным весом, чем Jg G , быстрее передвигаются и содержат около 10 % углеводов.);
- Jg А (сывороточные и секреторные. JgА (гамма 2А, гамма 1А) идентифицированны пока только у человека. Их молекулярный вес такой же как у Jg G , углеводов ~10 %);
- Jg D (мало изучен, найден у людей, больных красной волчанкой и ревматизмом);
- Jg E (обнаруживают при аллергиях).
Электрофоретически гомогенная масса гамма-глобулина сыворотки крови обычно состоит из JgG, JgЕ, JgM, поэтому ее называют общей гаммаглобулиновой или иммуноглобулиновой фракцией сыворотки крови.
2.5. Методы получения гамма-глобулинов
Установление связи антител с гамма-глобулиновой фракцией сыворотки кpoви послужило стимулом для разработки методов её выделения с целью применения в клинической практике и изучения физико-химических свойств.
К настоящему времени известно большое число различных методов фракционирования сывороточных белков - химических, физических и физико-химических.
К химическим и физико-химическим методам относятся:
- высаливание нейтральными солями - сернокислым аммонием, хлористым натрием, сернокислым натрием и некоторыми другими;
- изоэлектрическое осаждение;
- разведение с изменением ионной силы раствора;
- фракционирование при помощи органических осадителей - этилового и метилового спирта, ацетона, эфира;
- осаждение при помощи катионов - неорганических и органических (риванол) металлов;
- осаждение при помощи анионов;
- применение ионообменных смол.
К физическим методам относятся:
- ультрафильтрация через полупроницаемые мембраны;
- ультрацентрифугирование;
- электрофоретическое разделение - метод препаративного и квекционного электрофореза.
Существуют также целый ряд комбинированных методов получе-ния иммуноглобулиновых препаратов
