- •Департамент кадровой политики и образования
- •Московская государственная академия ветеринарной
- •Медицины и биотехнологии имени к.И. Скрябина
- •Основы производства гипериммунных сывороток и иммуноглобулинов
- •Учебно-методическое пособие по биотехнологии
- •Основы производства гипериммунных сывороток и иммунноглобулинов
- •4. Материальное обеспечение:
- •План проведения лабораторной работы
- •Классификация гипериммунных сывороток
- •Отбор животных-продуцентов. Грундиммунизация
- •Подбор животных-продуцентов
- •Грундиммунизация животных продуцентов
- •Гипериммунизация животных
- •Приготовление сывороточных препаратов
- •2. Основы биотехнологии производства гамма – глобулинов
- •2.1. Общие сведения о гамма-глобулинах
- •2.2. Содержание гамма-глобулинов в сыворотке крови животных
- •Содержание белковых фракций в сыворотке крови
- •2.3. Связь гамма-глобулина с антителами
- •2.4. Основные типы иммуноглобулинов
- •2.5. Методы получения гамма-глобулинов
- •2.5.1. Электрофоретическое разделение белков
- •2.5.2. Разделение белков методом хроматографии
- •2.5.3. Ультрафильтрационный метод выделения гамма-глобулина
- •2.5.4. Метод солевого фракционирования (высаливание)
- •Осаждение гамма-глобулина сернокислым аммонием
- •Осаждение гамма-глобулина хлористым натрием
- •Осаждение гамма-глобулина сернокислым натрием
- •2.5.5. Спиртовой метод получения гамма-глобулина
- •Фракционирование сыворотки крови спиртовым методом (вариант б)
- •2.5.6. Спиртово-хлороформенный метод получения гамма-глобулина
- •2.5.7. Риваноловый метод получения гамма-глобулина
- •3. Контроль готового препарата гамма-глобулина
- •Получение гамма-глобулина на биопредприятиях
- •Получение гамма-глобулина риваноловым методом в условиях хозяйства
- •Применение гамма-глобулинов в ветеринарии
- •7. Практическая работа
- •1. Получить гамма-глобулин из сыворотки крови крупного рогатого скота риваноловым методом
- •2. Провести контроль качества готового препарата
- •3. Расфасовать готовый препарат
- •8. Список использованной литературы
- •Содержание
2.2. Содержание гамма-глобулинов в сыворотке крови животных
Содержание гамма-глобулина в сыворотке крови животных различно и непостоянно. Оно подвержено не только индивидуальным колебаниям, но и, в значительной мере, зависит от упитанности, возраста, пола, породы, полового цикла, беременности, времени и условий исследований.
Особенно изменяется содержание гамма-глобулинов и белкового спектра сыворотки крови, в целом, при различных воспалительных процессах, инфекционных заболеваниях. Этот фактор является одним из диагностических признаков. Значительно увеличивается содержание гамма-глобулина при иммунизации животных, под воздействием введенного антигена.
Содержание белковых фракций в сыворотке крови у разных видов животных и человека представлены в таблице 3 (по Д.Л. Фердману).
Таблица 3
Содержание белковых фракций в сыворотке крови
Объект |
Белковые фракции, в относительных % |
|||
альбумины |
Глобулины |
|||
альфа |
бета |
гамма |
||
Человек Корова Лошадь Свинья Овца Кролик Морская свинка |
55.2 41.0 32.0 42.0 57.0 60.0 56.0 |
5.3 13.0 14.0 16.0 11.0 7.0 14.5 |
8.7 8.0 24.0 17.0 7.0 12.0 8.0 |
30.0 38.0 30.0 25.0 25.0 21.0 21.5 |
Изучением содержания белковых фракций в сыворотке крови здоровых животных занимался В.М. Красов (1969 Г.). Им, совместно с И.Н. Кацовой и Т.В. Малишевской, был изучен белковый спектр сыворотки крови семнадцати видов животных и пяти видов птиц.
При исследованиях также было установлено, что у молодых особей содержание гамма-глобулина значительно ниже, чем у взрослых, а у новорожденных он отсутствует совсем.
Литературные данные показывают, что изменения белковой картины крови начинаются с эмбрионального развития организма.
Так, например, у эмбрионов большой группы млекопитающих в сыворотке крови отсутствуют гамма-глобулины и встречается особый белок, открытый и названный Педерсоном фетуином. После рождения фетуин исчезает. У эмбрионов некоторых грызунов и приматов доказано наличие в сыворотке гамма-глобулинов в той же относительной концентрации, что и у взрослых, и отсутствие фетуина.
Различие в составе сывороточных белков у эмбрионов млекопитающих связанно с морфологическими особенностями строения плаценты. Гамма глобулины обнаружены в крови тех животных, у которых строение плаценты обеспечивает тесный контакт с кровью матери и зародыша и делает возможным переход гамма-глобулинов из материнской крови в кровь эмбриона. Фетуин же найден у млекопитающих с монослойной плацентой, через которую гамма-глобулин не может поступить в кровь эмбриона.
Так, например, в плазме новорождённого жеребёнка содержится 3,7 % белка, из них альбумина – 65 %, альфа-глобулина –32 %, бета-глобулина –3 %, а гамма-глобулина –0 % (Пенсон, 1943). Гамма-глобулин отсутствует и в сыворотке крови новорождённого телёнка, однако, через 18-20 часов после дачи молозива его содержание можно обнаружить биохимическими методами.
А.В.Соколов с сотрудниками (1956) обнаружил, что гамма-глобулины у поросят попадают в сыворотку крови только из молока матери и что новорождённые в течение 3 недель после рождения не способны самостоятельно продуцировать сывороточный гамма-глобулин. Были проведены и другие исследования, которые показали, что имеющиеся в молозиве гамма-глобулины сыворотки крови матери, очевидно, проникают в кровь сосунов через желудочно-кишечный тракт непереваренными.
