- •Департамент кадровой политики и образования
- •Московская государственная академия ветеринарной
- •Медицины и биотехнологии имени к.И. Скрябина
- •Основы производства гипериммунных сывороток и иммуноглобулинов
- •Учебно-методическое пособие по биотехнологии
- •Основы производства гипериммунных сывороток и иммунноглобулинов
- •4. Материальное обеспечение:
- •План проведения лабораторной работы
- •Классификация гипериммунных сывороток
- •Отбор животных-продуцентов. Грундиммунизация
- •Подбор животных-продуцентов
- •Грундиммунизация животных продуцентов
- •Гипериммунизация животных
- •Приготовление сывороточных препаратов
- •2. Основы биотехнологии производства гамма – глобулинов
- •2.1. Общие сведения о гамма-глобулинах
- •2.2. Содержание гамма-глобулинов в сыворотке крови животных
- •Содержание белковых фракций в сыворотке крови
- •2.3. Связь гамма-глобулина с антителами
- •2.4. Основные типы иммуноглобулинов
- •2.5. Методы получения гамма-глобулинов
- •2.5.1. Электрофоретическое разделение белков
- •2.5.2. Разделение белков методом хроматографии
- •2.5.3. Ультрафильтрационный метод выделения гамма-глобулина
- •2.5.4. Метод солевого фракционирования (высаливание)
- •Осаждение гамма-глобулина сернокислым аммонием
- •Осаждение гамма-глобулина хлористым натрием
- •Осаждение гамма-глобулина сернокислым натрием
- •2.5.5. Спиртовой метод получения гамма-глобулина
- •Фракционирование сыворотки крови спиртовым методом (вариант б)
- •2.5.6. Спиртово-хлороформенный метод получения гамма-глобулина
- •2.5.7. Риваноловый метод получения гамма-глобулина
- •3. Контроль готового препарата гамма-глобулина
- •Получение гамма-глобулина на биопредприятиях
- •Получение гамма-глобулина риваноловым методом в условиях хозяйства
- •Применение гамма-глобулинов в ветеринарии
- •7. Практическая работа
- •1. Получить гамма-глобулин из сыворотки крови крупного рогатого скота риваноловым методом
- •2. Провести контроль качества готового препарата
- •3. Расфасовать готовый препарат
- •8. Список использованной литературы
- •Содержание
Применение гамма-глобулинов в ветеринарии
Опираясь на богатый опыт применения гамма-глобулинов для профилактики и лечения заболеваний людей, с конца 50-х годов были сделаны первые попытки изучения профилактического и лечебного действия гамма-глобулинов в ветеринарной практике.
Сейчас в нашей стране нашли широкое применение глобулины против вирусных заболеваний: болезни Ауески, ящура, чумы свиней (классической), оспы-дифтерита птиц, бешенства и т. д. Получают также ассоциированный гамма-глобулин. Применяют гамма-глобулины и при бактериальных инфекциях: роже свиней, сальмонеллезе телят и поросят, колибактериозе, инфекционном атрофическом рините, сибирской язве, бруцеллёзе, пастереллёзе и др.
Гамма-глобулин влияет и на иммунологические функции организма, т. е. помимо специфического действия, гамма-глобулин может оказывать неспецифическое стимулирующие влияние на организм животного, повышая его реактивность.
По данным А. Ф. Сафонова, к 5- месячному возрасту ягнята опытных групп превосходили в живом весе своих сверстников, не получивших гамма-глобулин. Все ягнята опытных групп были сохранены, в контрольной группе пал один ягнёнок (10 %). Гамма-глобулин оказал положительное влияние на биохимические показатели крови ягнят. Парентеральное введение препарата вызвало повышение щелочного резерва крови, что свидетельствует о его нормализации под воздействием гамма-глобулина, наблюдалось также нарастание количества глобулиновых фракций сыворотки крови.
7. Практическая работа
1. Получить гамма-глобулин из сыворотки крови крупного рогатого скота риваноловым методом
1. К 100 мл сыворотки крови добавить 30 мл 3 % раствора риванола.
2. Отстаивание в течение 30 минут в условиях холодильника (4°С).
3. Добавить поваренную соль из расчета 0,5-0,8 % к объему сыворотки.
4. Профильтровать через бумажный обеззоленный фильтр.
2. Провести контроль качества готового препарата
1. На стерильность - 10 мл полученного гамма-глобулина поместить в термомстат при t = 37° С на 3 суток. Стерильный раствор гамма-глобулина через 3 суток останется прозрачным.
2. На безвредность - белой мыши ввести внутримышечно 0,01 мл гамма-глобулина. Если препарат безвреден, то изменений в общем состоянии животного не наблюдается.
3. На специфичность - провести реакцию агглютинации на стекле, используя в качестве антигена Е.соli, а также ввести белой мыши подкожно 0,01 мл гамма-глобулина и 500 млн микробных клеток энтеропатогенной Е.соli.
Провести наблюдение за общим состоянием животного.
3. Расфасовать готовый препарат
1. Расфасовать полученный гамма-глобулин в стерильные флаконы, объемом 10 мл.
2. С помощью закатывающей машинки закупорить флаконы резиновой пробкой и закатать алюминиевым колпачком.
Наклеить этикетку.
8. Список использованной литературы
1. Балашенко С. Г., Урбан В, П. Иммунные глобулины в ветеринарии.- Минск.- Урожай, 1972.
2. Кленина Н. В. Гамма-глобулины в ветеринарии.- Минск.-Урожай, 1971.
3. Коноковский А. И. Биохимия животных. - М., Колос.- 1992 .
4. Коляков Я. Е. Ветеринарная иммунология. - М., Агропромиздат.-1986.
5. Мешков Н.П., Северин С.И. Практикум по биохимии.- М., изд. МГУ, 1989.
6. Сафонов А. Ф., Пирожков Г. В. Получение и применение неспецифического гамма-глобулина. /Сб. науч. тр. КНИВИ, 1990.
7. Синицин В. А., Резуненко Е. В. Кириллов В. А. Фракционирование белков плазмы крови с целью препаративного получения гамма-глобулинов и альбумина - УААН, Институт экспериментальной клинической ветеринарной медицины, Харьков, 1995.
8. Тутов И. К Ситьков В. И. Основы биотехнологии ветеринарных препаратов. - Ставрополь, 1997.
9. Фримель Г. Иммунологические методы. -М.: Медицина 1987.
