4-4_au
.pptx
Центрифугирование –
фракционирование в поле центробежных сил
Fц – центробежная сила; Fт – сила трения |
|
D2 |
( с )N 2 r |
|
|
v |
k |
||
|
|
с |
||
Выводы из зависимости: |
|
|
||
• |
При одинаковых плотностях частицы большего размера |
|||
|
оседают быстрее чем мелкие (D). |
|
|
|
• |
Скорость оседания (v) пропорциональна плотности частицы |
|||
|
(ρ), особенно сильно это проявляется когда плотность |
|||
|
частицы и среды (ρс) близки. |
|
|
|
• |
Скорость оседания пропорциональна квадрату числа |
|||
|
оборотов ротора (N). |
|
|
|
• |
Скорость оседания обратно пропорциональна вязкости среды |
|||
|
(ηс). |
|
|
|
• |
Скорость оседания пропорциональна расстоянию от оси |
|||
|
вращения (r). Это расстояние увеличивается по мере |
|||
|
оседания и следовательно возрастает скорость. Если это |
|||
|
почему-либо нежелательно следует создать градиент |
|||
Разделение осаждением
Распределение зарядов и гидрофобных областей на поверхности молекулы типичного белка
Изоэлектрическое осаждение
Ряд Гофмейстера – влияние ионов на растворимость белков
значениях pH, близких к
изоэлектрической точке
ОсаждениеДляорганическимиосаждения белковраст орителя
используют смешивающиеся с водой органические растворителями, такие как
ацетон, этанол или
Диализ и ультрафильтрация
N2 pressure
При началеПри достижении диализа равновесия
Диализ и ультрафильтрация – методы фракционирования, основанные на использовании полупроницаемых мембран.
ЕТОДЫ ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ БЕЛКО
СВОЙСТВО
БЕЛКА
ЗАРЯД
ГИДРОФОБНО
СТЬ/ГИДРОФИ
ЛЬНОСТЬ
РАЗМЕР
МЕТОД РАЗДЕЛЕНИЯ
ХРОМАТОГРАФИ |
ЭЛЕКТОФОРЕ |
ДРУГОЕ |
Я |
З |
|
ИОНООБМЕННАЯ |
ИЗОЭЛЕКТРОФ |
(ИОХ, IEX) |
ОКУ- |
[АФФИННАЯ (АХ, |
СИРОВАНИЕ |
AC)] |
(ИЭФ, IEF) |
ГИДРОФОБНАЯ |
|
(ГХ, HIC) |
|
ОБРАЩЕННО |
|
ФАЗОВАЯ (ОФХ, |
|
RPC) |
|
[АФФИННАЯ (АХ, |
|
AC)] |
|
ГЕЛЬПРОНИКАЮЩ |
С |
АЯ |
ДОДЕЦИЛСУЛЬ- |
(ЭКСКЛЮЗИОННАЯ |
ФАТОМ НАТРИЯ |
, ГПХ, SEC) |
(SDS-PAGE) |
ИЗОЭЛЕКТРИЧЕС КОЕ ОСАЖДЕНИЕ
ВЫСАЛИВАНИЕ,
ОСАЖДЕНИЕ
ОРГАНИЧЕСКИМИ
РАСТВОРИТЕЛЯМ
И
ДИАЛИЗ,
УЛЬТРАФИЛЬТРА
ЦИЯ,
ЦЕНТРИФУГИРОВ А-НИЕ