Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации

Реакция непрямой или пассивной гемагглютинации. Эта реакция считается одной из наиболее чувствительных серологических реакций. Основана на способности антител взаимодействовать с антигеном, фиксированным на различных эритроцитах, которые при этом агглютинируют. Для постановки этой реакции необходимо приготовление эритроцитарного диагностикума. Эритроцитарный диагностикум может быть двух видов: антигенный и антительный.

Рис.5 Схема эритроцитарного диагностикума и схема гемагглютинации.

Приготовление эритроцитарного диагностикума:

Вначале выполняется фиксация эритроцитов, для чего эритроциты (барана, кур, мышей) фиксируют танином или формалином для стабилизации. Затем на эритроцитах фиксируют антиген (бактерия, вирус, риккетсия) для получения антигенного эритроцитарного диагностикума или антитела для получения антительного эритроцитарного диагностикума.

Необходимые ингредиенты:

• Сыворотка крови инфицированного пациента

• Физиологический раствор

• Эритроцитарный диагностикум

Реакция пассивной гемагглютинации выполняется в лунках иммунологического планшета.

Этапы выполнения реакции:

1. В лунки планшета внести физиологический раствор в одинаковом количестве -0,25 мл для разведения сыворотки

2. В первую лунку внести сыворотку крови пациента, разведенную в 50 раз в объеме 0,25 мл; перемешать содержимое пипеткой и этой же пипеткой набрать 0,25 мл и перенести в следующую лунку

3. Перемешать содержимое и повторить эту процедуру во всех лунках, предназначенных для проведения реакции.

4. Приготовить контроль, для чего в одну лунку внести 0,25 мл физиологического раствора

5. Во все лунки, включая контрольную, внести по 2 капли приготовленного эритроцитарного диагностикума и перемешать путем осторожного покачивания планшета.

6. Учесть результаты реакции

Положительной считается проба, когда в лунках планшета на дне в контроле эритроциты ложатся в виде «пуговки», а в опытных лунках появляется осадок в виде «зонтика». Схема постановки РПГА и учета результатов показаны на рис. 6.

Рис.6 Схема постановки и учета РПГА

Таблица 2.

Критерии учета результатов реакции

+ + + +	Полная агглютинация: осадок занимает все дно лунки. Результат положительный
+ + +	Неполная агглютинация: осадок занимает три четверти дна лунки. Результат положительный
+ +	Слабая агглютинация: осадок занимает менее половины дна лунки. Результат сомнительный
+	Следы агглютинации: осадок небольшой. Сомнительный результат реакции
-	Отрицательная реакция: осадок занимает центральное положение с округлыми краями.

Реакция латекс-агглютинации. Эта реакция аналогична реакции пассивной гемагглютинации (РПГА), за исключением того, что антиген или антитело фиксируется на поверхности нейтральных частиц латекса. Разработаны коммерческие диагностикумы для выявления антигенов стрептококков, гемофилов. При этом применяются диагностикумы, где на частицах латекса адсорбированы моноклональные антитела.

Данная реакция выполняется, как ориентировочный вариант реакции агглютинации, на стекле и учет ведется в косом свете на темном фоне. При этом быстро формируется агглютинат.