Реакция гемадсорбции (рГадс).

Это реакция индикации вирусов в вируссодержащем материале, который основан на феномене прилипания эритроцитов к клеткам, пораженным вирусом. Для выполнения этой реакции необходимо использование культуры клеток, вируссодержащего материала и эритроцитов.

Этапы выполнения реакции:

В культуру клеток вносят вируссодержащий материал.

Через несколько часов инкубации добавляют взвесь эритроцитов.

В случае, если в изучаемом субстрате находился вирус, он проникает в клетки, где начинается синтез вирусных частиц, поэтому при добавлении эритроцитов последние адсорбируются на пораженных клетках, наблюдается эффект гемадсорбции.

Реакция торможения гемадсорбции (ртГадс)

На основе РГадс выполняется идентификация вируса. Для постановки данной реакции на первом этапе проводим смешивание вируса со специфической иммунной сывороткой. После образования комплекса антиген-антитело вирусные поверхностные антигены становятся блокированными, поэтому после добавления такой взвеси к культуре клеток вирус не способен проникнуть в клетки, значит, добавление эритроцитов не приведет к их избирательной адсорбции, эритроциты опускаются равномерно по всей поверхности монослоя клеток – так называемый феномен торможения гемадсорбции.

Рис. 25. Реакция гемадсорбции. Реакция торможения гемадсорбции.

Цитопатогенное действие вируса (цпд).

Цитопатогенное действие вируса – еще один метод индикации вирусов в вируссодержащем материале. Выполняется данный метод с использованием культуры клеток, точнее монослоя клеток. В правильно подготовленном монослое клетки все имеют одинаковую морфологическую структуру, без дефектов. После добавления вирусов последние проникают внутрь клеток, там начинается синтез новых вирусных частиц, в результате чего клетки разрушаются, погибают, частично сливаются друг с другом, образуя так называемые симпласты и синцитии, или ЦПД.

Данный эффект можно наблюдать только микроскопически, поэтому для учета реакции пользуются микроскопией монослоя клеток, в которых наблюдают грубые изменения по сравнению с контролем.

Реакция торможения цитопатогенного действия (рт цпд).

На основе реакции ЦПД для идентификации вирусов применяют реакцию торможения ЦПД. Для ее выполнения необходима взвесь изучаемого вируса и специфическая иммунная сыворотка.

Этапы выполнения реакции:

В пробирке смешивают вируссодержащий материал и специфическую иммунную сыворотку

После инкубации данную смесь вносят в культуру клеток с готовым монослоем

Проводят учет реакции микроскопически.

Положительной считается реакция, когда наблюдается « отмена» ЦПД вируса.

Рис. 26. Реакция ЦПД. Реакция торможения ЦПД.

Реакция бляшкообразования (бо).

Реакция бляшкообразования также основана на ЦПД вируса, но для упрощения учета результатов реакции предложено монослой зараженных клеток заливать либо слоем агара, либо бентонита. Таким образом, при поражении клеток визуально можно наблюдать «пустоты» в агаровом слое, которые были названы «бляшками».

РЕАКЦИЯ ТОРМОЖЕНИЯ БЛЯШКООБРАЗОВАНИЯ (РТ БО).

Эта реакция также применяется для идентификации вирусов, служит иммунной реакцией. На первом этапе изучаемый вирус смешивается со специфической иммунной сывороткой, затем данная взвесь вносится в культуру клеток, после чего культура клеток заливается слоем агара. В случае, если специфическая иммунная сыворотка оказалась идентичной изучаемому вирусу, вирусные антигены блокируются, он не в состоянии проникнуть в клетку, таким образом, не наблюдается ЦПД и отменяется феномен бляшкообразования.

Рис. 27. Реакция бляшкообразования и торможения бляшкообразования.