Методы индикации и идентификации вирусов.

Для индикации вирусов в вируссодержащем материале существует несколько методов, которые основаны на различных феноменах: способности некоторых вирусов к гемагглютинации, к проявлению цитопатогенного действия (ЦПД), бляшкообразования (БО) и других.

Цветная проба.

Для понимания этих феноменов вначале необходимо знать, как вирусы взаимодействуют с клетками, в которых она репродуцируются. Для накопления вирусов применяется такая модель, как культура клеток. Клетки для осуществления своей жизнедеятельности нуждаются в питательных веществах. Такие условия создаются благодаря использованию питательных сред, например, среды 199, в которой в качестве индикатора применяется раствор, меняющий свой цвет в зависимости от изменения рН среды. Клетки в результате метаболизма выделяют в среду кислые продукты обмена, это приводит к изменению рН, следовательно, цвет среды становится желтым.

При добавлении вирусов в культуру клеток вирус проникает в клетки, начинается синтез новых вирусных частиц, что приводит в гибели клетки. В результате этой гибели клетки не осуществляют метаболизма, цвет среды остается неизменным. Этот феномен называется цветная проба (ЦП).

На основании данного феномена разработан метод идентификации вирусов, который называется реакция торможения цветной пробы (РТ ЦП).

Реакция торможения цветной пробы

Реакция осуществляется следующим образом. Исследуемый вируссодержащий материал смешивается со специфической иммунной противовирусной сывороткой (например, с сывороткой, содержащей антитела к вирусу гриппа), после инкубации данная взвесь вводится в пробирку, содержащую культуру клеток, залитую средой 199. В случае, если правильно подобрана сыворотка, в первой пробирке произошло образование комплекса антиген (вирус) – антитело (специфическая противогриппозная сыворотка), вирус окажется блокированным, он не сможет проникнуть в клетки, клетки останутся жизнеспособными, смогут осуществлять метаболизм, кислые продукты обмена поступят в среду 199, соответственно изменится цвет индикатора.

Рис. 22. Постановка ЦП и РТ ЦП.

РЕАКЦИЯ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ.

Постановка этой реакции возможна только для вирусов, которые обладают гемагглютинином. Это дает им возможность адсорбироваться на различных эритроцитах. В результате положительной реакции гемагглютинации можно выявить вирус в вируссодержащем материале. Выполняется данная реакция в лунках иммунологического планшета, учет реакции проводится аналогично другим реакциям с использованием эритроцитов в качестве носителя (РПГА). Схема реакции представлена на рис.

Рис.23. Схема постановки реакции гемагглютинации.

Реакция торможения гемагглютинации.

Для идентификации вируса на основе реакции гемагглютинации необходимо использование специфической иммунной сыворотки. Например, после этапа постановки положительной РГА необходимо определить вид вируса. В реакции используются взвесь изучаемого вируса, специфическая иммунная сыворотка и взвесь эритроцитов. На первом этапе происходит инкубация вируссодержащего материала со специфической сывороткой (например, мы подозреваем, что в данном случае имеем дело с аденовирусом, для этого применяем сыворотку, содержащую антитела против аденовируса). В случае, если наше предположение верно, в пробирке произойдет образование комплекса антиген-вирус – антитело- сыворотка, вирусный гемагглютинин окажется заблокирован и при добавлении этой взвеси к эритроцитам феномен агглютинации отменяется.

Рис. 24. Реакция торможения гемагглютинации.