Серологические методы идентификации микроорганизмов

Реакции, основанные на взаимодействии АГ возбудителя с АТ сыворотки (serum) крови животных.

Наиболее распространённая – реакция агглютинации. В основе лежит феномен склеивания эритроцитов, происходящий под влиянием АГ возбудителя.

Ориентировочная реакция агглютинации – на стекле. Суть в том, что позволяет установить наличие АТ возбудителя в сыворотке без определения титра.

Развёрнутая реакция агглютинации – готовят разведение сыворотки. В дальнейшем к каждому разведению добавляют диагностикум (АГ), где наибольший хлопьевидный осадок, тот титр и будет.

Результаты в крестах. ++++ - выраженный хлопьевидный осадок, при встряхивании развивается, надосадочная жидкость остаётся прозрачной; +++ - жидкость более мутная, ++ - равномерная взвесь, есть небольшой осадок, + - взвесь, - - не реагирует.

Реакция преципитации – присутствуют твёрдые компоненты, формирование и осаждение комплекса растворимого АГ с АТ в виде помутнения, называемого преципитатом. Необходим раствор АГ и исследуемые сыворотки.

Наиболее важным методом является метод кольцепреципитации – диагностика сибирской язвы. Методика: в пробирку наносят преципитирующую сыворотку (0,2 мл) и столько АГ. В положительном случае на границе взаимодействия наблюдается белое кольцо за счёт склеивания твёрдых частиц.

Реакция преципитации в геле или реакция диффузной преципитации – используется агаровый гель, делается 2 лунки, в одну сыворотку, во вторую АГ возбудителя, затем чашку Петри в термостате на сутки. Если реакция положительная – линия преципитации между луками в виде белой полосы. Можно просматривать 6-7 суток, если нет – отрицательный результат.

Профилактика бактериальных болезней

Наименование болезни	Восприимчивые животные	Профилактика и меры борьбы
Сибирская язва – Bacillus anthracis, 4 группа устойчивости. Открыл Брау в 1750 г.	КРС, МРС, олени, верблюды, лошади, свиньи, плотоядные	Методы дезинфекции животноводческих объектов: раствор хлорной извести и нейтрального гипохлорида кальция. Применяется для дезинфекции помещений, окружающей территории, навоза (1 кг извести на 20 л навоза). В форме аэрозолей для дезинфекции воздуха; 8-10% раствор гидроксида натрия в горячем виде; 10% однохлористый йод; смесь ОКЭБМ (окись этилена с бромистым метилом) – шкуры, сильнодействующий яд, работать в противогазе
Сап – Burkholderia mallei, 2 группа – устойчивая.	Лошади, ослы, мулы, верблюды, кошачьи	Поголовье 1 раз/год подвергают клиническому осмотру (язвы между носовой перегородкой, истечения, язвы на теле). Импортированных животных подвергают карантину в течение 30 суток. После подвергают клиническому осмотру, проводят аллергическую диагностику – маллеинизация (в глаз). При положительном результате животных считают подозреваемыми в заражении, животных изолируют и исследуют с применением подкожной малеиновой пробы, если нет подкожного инфильтрата – благополучны. Если + - убой, патанат исследование без снятия шкуры. Туши сжигают. Если нет патанат изменения – на бак исследование. При отрицательных результатах сап исключают, при + проводят мероприятия по ликвидации. Животных исследуют каждые 7-8 суток клинически и серологически. Если + - сжечь. Остальных отправляют на санитарную бойню. Внутренние органы уничтожают.

Методы диагностики инфекционных болезней животных.

Диагностика вериозов.

Вирусы – внеклеточная форма жизни, обладающая особыми св-вами. Не живут вне клетки, они проходят через бак.фильтры, не растут на искусств.пит.средах, можно культивировать на культурах тканях.

Особые методы диагностики вериозов::

Культуры тканей – культивирование в культуре тканей. Могут в инвиво и инвитро(в живом организме и в культуре). В случае инвиво(в организме лаб животных), зараженные вирусом клетки помещают в определенные участки тела лабораторного животного (под кожи или в переднюю камеру глаза), далее налюдают.

Инвитро – клеточный монослой, которые культивируют на специальных матрацах на поверхности стекла. Как правило источник получения этих клеток – ткани и клеткки эмбрионов животных в возрасте 5-6 месяцев, либо эмбрионы птиц 7-10суток, ткани взрослы животных также могут, также возможно применение и человеческих, удаленных при хирург вмешательствах.

Способность к размножению клеток свзано со степенью дефференциации тканннннннннннннннннн Наиболее активно размножаются летки эмбионов соединительной ткани. У взрослых животных– эпителиальные ткани и опухолевые клетки. Далее извлеченные ткаи промывают солевым раствором, контролируют на стерильность, помещают в матрац, затем диспергируют ее далее центрифугируют и фильтруют. Культивируют при 37 градусах и ежедневно просматривают под микроскопом. Если все ок – заражают. – АЦПД – любые изменения клеток которые воникают под влиянием вируса. Оценивают в баллах или крестах: 100% ХХХХ, 75% ХХХ, 50 ХХХ, 25% Х. ЦПД – в 3 фомах : фрагментация(на кусочки и нах. В среде, пример вирус везикулярного стоматита), округление(потеря способности клеток пикрепляться к стеклу, и они принмаютшаровидную фрму, отделяются и свободно плавают в куль. Жид. Энтеровирусы и адено виусы), симпластообразование (образование крупппппппппппппппппппппмядерных клеток ибо соседние клетки сливаются в следствии расплавления клет.об. под действием вируса, образуются гиганствкие многоядерные клетки. (цитопатическое действе)

Примеры тканей:

Нормальные клетки:

А1-амнион человека

ПК – почка кролика

ПМ – почка морской свинки

ПС – почка свиньи

Раковые:

Hela – рак матки от тетки

Hep-1 - гортань

Hep-2 - гортань

Эмбрионы птиц

Обычно гуси или цыплята, сначала определяют жизнеспособность эмбрионов(просматривают на овоскопе. Воздушным мешком вверх. Ззззззззззззззззззззатем яйцо в кювету, протирают спиртом поверхность, фламбируют, на 5-6 см выше возд. Камеры – прокол, препаровальной иглой – капля физа, затем вируссодержащи материал. Объем 0,2 мл. Контрольной группе стерильный физ. Отверстие заливают парафином, культивируют в термостате 24-48 часов, эмбрионы извлекаются и оцениваются из менения.

Метод бляшек – основа на образовании вирусом бляшек на культуре клеток. Негативные колонии. Бляшки – обесцвеченные области культуры клеток, которые состоят из погибших клеток. Берут культуру клеток, вввносят вирус, заливают агаровой средой с красителем(обычно нейтральот). Погибшие клетки не окрашиваются.

Метод гемадсорбции

Группа серологических методов: преципитация в геле, иммунофлюорисценция, реакция связывания комплемента, имуноферментный анализ, и тд

Метод ДНК-зондов(метод похож на пцр), генетические методы диагностики вирусных заболеваний.

ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ РЕАКТИВНОСТЬ. ВИДЫ ИММУНИТЕТА

Иммунология достаточно молодая наука, начала развиваться в 1887 году.

Проблема глубоко связна с животными и практическими вопросами эпизоотологии, обеспечение устойчивости организма к возбудителям инфекции. Знание организма противостоять патогенным организмам, возможность активации ест-ого и исск-ого имм-та – успех.

Реактивность - способность животного организма отвечать на воздействие факторов внешней среды изменениями процесса жизнедеятелньости организма. В нормальных условиях организм обеспечивает максиальные адаптационные способности к окр среде, однако, при пат состояниях нередко возникает избыточное или недостаточная или извращённая реакция животных на один и тот же раздражитель. Это зависит от состояния иммунологической реактивности организма.