Исследование № 1. Подсчёт количества эритроцитов

Цель работы: ознакомится с методикой подсчёта эритроцитов у человека и с оценкой полученных данных.

Оборудование: микроскоп с объективами малого и большого увеличения; счётная камера Горяева; смеситель для эритроцитов; скарификатор; покровные стёкла; 3% раствор хлористого натрия; спирт; эфир; вата; йод; дистиллированная вода.

Ход исследования. Рассматривают сетку счетной камеры под микроскопом при малом и большом увеличении. Камеру покрывают покровным стеклом и притирают покровное стекло так, чтобы между ним и боковы­ми пластинками камеры появились цветные кольца. Приготавливают растворы для разбавления крови: 2-х или 3-х процентный раствор NaCl, или консервирующую жидкость. Тщательно протирают место укола на пальце спиртом. Кожа должна быть суха, иначе капля крови растечется, вместо того, чтобы принять удобную для насасывания шарообразную форму. Делают укол скарификатором такой глубины, чтобы капля крови выступала свободно без выдавливания. Когда появится капля достаточной величины (первую каплю снять сухой марлей), опускают кончик смесителя в глубину капли (не надавливая) и насасывают кровь до метки 0,5, следя за тем, чтобы в капилляр не попало пузырьков воздуха. Затем кончик смесителя обтирают ваткой, опускают его в стаканчик с разбавляющей жидкостью и насасывают ее до метки 101. Насасывание крови и раствора следует производить быстрее, чтобы кровь не свернулась в капилляре. Тщательно перемешать кровь с раствором, закрыв большим и средним пальцами смеситель с обоих концов и поворачивая и встряхивая его в разных направлениях в течение 2—5 мин.

Слегка надавливая на резиновую трубку, удаляют жидкость из капил­лярной части смесителя, и кончик его обтирают марлей. Затем, каплю жидкости наносят на поверхность счетной камеры на конец средней пластинки. В силу капиллярности капля тотчас же всасывается в счетную камеру. Камеру помещают под микроскоп, и устанавливают сетку в поле зрения сначала под малым, затем под большим увеличением. Выждав 2 мин, чтобы эритроциты осели на дно, производят подсчет их в 80 маленьких квадра­тиках сетки (5 больших квадратов по 16 маленьких).

Для этого находят в поле зрения левый верхний квадрат, разделенный на малые квадратики, и подсчитывают число эритроцитов в каждом из 16 входящих в него маленьких квадратиков, передвигая сетку сначала слева направо, пока не будут просчитаны эритроциты 4 верхних квадратиков. Передвигая сетку справа налево, переходят к счету телец в 4 квадратиках следующего ряда, затем подсчитывают в четырех квадратиках третьего и, наконец, четвертого ряда. Чтобы избежать повторного подсчета одних и тех же кровяных телец, в каждом квадратике подсчитывают все эритроциты, лежащие внутри квадратика и расположенные на верхней и левой его границе, и не считают те, которые расположены на правой и нижней погра­ничных линиях. Сосчитав число эритроцитов в левом верхнем квадрате (16 маленьких квадратиков), передвигают сетку по диагонали и сосчитывают следующий квадрат, состоящий из 16 квадратиков, затем, передвигая сетку дальше по диагонали, подсчитывают число эритроцитов в следующих квад­ратах, пока не сосчитают во всех 5 квадратах, лежащих по диагонали.

Вычисляют общее количество эритроцитов в 1 мм³ крови. Для этого общее количество телец, сосчитанных в 5 больших квадратах (80 маленьких квадратиках), умножают на 10 000, исходя из следующих соображений. Допустим, что общее число эритроцитов в 80 квадратиках равно А. Тогда в среднем на каждый маленький квадратик приходится А/80 телец. Объем жидкости над каждым квадратиком равен 1/400 * 1/10 = 1/4000 мм ³. Следова­тельно, число эритроцитов в 1 мм³ жидкости равно А/80 * 4000. Кровь разбавлена в смесителе в 200 раз.

В 1 мм³ крови число эритроцитов ( Х) равно:

Х = А * 4000 * 200 / 80 = А * 10000.

В норме у человека содержится в 1 мм³ крови около 5 млн. эритроцитов у мужчин и около 4,5 млн. — у женщин.