II.3.2. Определение резус-совместимости при переливании крови

Резус-антигены могут быть выявлены рядом методов:

- реакцией агглютинации с моноклональными антителами анти-D, анти-С, анти-с, анти-E, анти-е;

- реакцией агглютинации с универсальным реагентом антирезус D;

- другими высокоэффективными и надежными методиками¹.

Для доноров в наши дни чаще всего применяется следующий алгоритм определения резус-принадлежности. Универсальным реагентом антирезус D, содержащим антитела анти-D, в эритроцитах донора выявляется антиген D: агглютинация эритроцитов антителами анти-D указывает на наличие антигена D на поверхности эритроцитов, отсутствие агглютинации – на отсутствие антигена D (рис. 17).

Рис. 17.

Если антиген D не обнаружен, эритроциты донора обследуются моноклональными антителами анти-С и анти-E на наличие антигенов C и E.

Рассмотрим возможные варианты взаимодействия моноклональных антител анти-С и анти-E c эритроцитами исследуемой крови (рис. 18 А-Г).

Вариант А. В каплях растворов, содержащих антитела анти-С и анти-E, агглютинация исследуемых эритроцитов не произошла, следовательно, антигены С и Е в эритроцитах отсутствуют (рис. 18 А).

Рис. 18 А.

Вариант Б. В каплях растворов, содержащих антитела анти-С и анти-E, исследуемые эритроциты подверглись агглютинации, следовательно, в эритроцитах имеются антигены С и Е (рис. 18 Б).

Рис. 18 Б.

Вариант В. В капле раствора с антителами анти-С наблюдается агглютинация эритроцитов, следовательно, в них присутствует антиген С. В капле с антителами анти-Е эритроциты не агглютинировались: в их мембране нет антигена Е (рис.18 В).

Рис. 18 В.

Вариант Г. В капле раствора с антителами анти-С агглютинация исследуемых эритроцитов не произошла, следовательно, в эритроцитах отсутствует антиген С. В капле с антителами анти-Е эритроциты агглютинировались: в их мембране имеется антиген Е (рис.18 Г).

Рис. 18 Г.

Доноры, в эритроцитах которых обнаружен хотя бы один из ключевых резус-антигенов, обозначаемых заглавными буквами (D, и/или C, и/или E), cчитаются резус-положительными. Лица, у которых отсутствуют антигены D, C и E (все три), являются резус-отрицательными донорами. У реципиентов определяется антиген D универсальным реагентом антирезус D.

В том случае, если все ключевые резус-антигены выявляются моноклональными антителами, важно иметь в виду, что МАО синтезируются in vitro одним штаммом плазматических клеток. Эти антитела комплементарны лишь к одному типу эпитопа антигена. Если, к примеру, в исследуемых D-положительных эритроцитах данная детерминанта отсутствует (как у D^partial), кровь будет считаться D-отрицательной со всеми вытекающими отсюда последствиями. Во избежание подобных ошибок, эритроциты, идентифицированные МКА как D-отрицательные, должны дополнительно типироваться поликлональными анти-D антителами, содержащимися в универсальном реагенте антирезус D. Это связано с тем, что один антиген может содержать несколько разных или/и одинаковых эпитопов, при этом все эпитопы одного антигена способны связываться с антителами, синтезированными в организме (in vivo) всеми штаммами плазмоцитов в ответ на внедрение данного антигена - поликлональными антителами.

Универсальный реагент антирезус D является сывороткой крови D-отрицательных лиц группы крови АВ(IV), сенсибилизированных к антигену D предыдущими беременностями и/или трансфузиями крови, а также искусственно иммунизированных доноров-добровольцев. В этой сыворотке содержатся антитела анти-D. Универсальной сыворотку делает отсутствие в ней естественных антител анти-А и анти-В, которые могут агглютинацией по системе АВ0 замаскировать специфическое взаимодействие антител анти-D с антигеном D.

Рассмотрим это положение на следующем примере. Предположим, реагент антирезус D изготовлен из плазмы крови, извлеченной из плаценты D-отрицательной женщины группы крови В(III), разрешившейся резус-D-конфликтной беременностью (родившей D-положительного ребенка). В этом реагенте содержатся иммунные антитела к антигену D – анти-D, а также естественные антитела системы АВ0 – анти-А (альфа). Исследуем возможность определения резус-D-принадлежности лица группы крови А(II) реагентом антирезус D группы крови В(III). При смешивании капли исследуемой крови группы А(II) с сывороткой антирезус D группы крови В(III) агглютинация эритроцитов произойдет независимо от того, имеется предмет нашего интереса - антиген D - в мембране эритроцитов или отсутствует, так как в эритроцитах человека группы А(II) содержатся антигены системы АВ0 - антигены А, а в реагенте - антитела анти-А (рис. 19).

Рис. 19. Агглютинация по системе АВ0 при

некорректном определении резус-принадлежности.

В особых случаях (пока еще) для определения резус-совместимости пар донор-реципиент на cтанциях переливания крови производится фенотипирование крови по резус-антигенам.

Фенотипирование – это серологическое типирование эритроцитов по всем главным антигенам системы резус - D, C, c, E и e.

При необходимости также определяются некоторые слабые резус-антигены и парциальные антигены D.

Только индивидуальный подбор пар донор-реципиент, основанный на совместимости их резус-фенотипов, может обеспечить безопасность переливания крови.

Наиболее распространенными у европейцев являются следующие фенотипы: 31,1 % - DCce, 17,6 % – DCe, 15 % - dce, 11,8 % - DCcEe, 10,4 % - DcEe, 3,4 % - DCce, 3,0 % - Dce, 2,0 % - DcE, 1,7 % - DCe, 1,1 % - DcEe, 0,8 % - DCcEe и 0,6 % - DCcEe. Фенотип dce имеют 96-98 % D-отрицательных доноров. У 2-4 % резус-отрицательных доноров иной фенотип: dCe или dcE.

В трансфузиологическом сообществе России обсуждается вопрос о необходимости введения в нашей стране обязательного фенотипирования доноров по 9 трансфузионно значимым антигенам – А, В, D, с, Е, С, е, Кеll и C^w, - шесть из которых представляют самую иммуногенную из 30-ти систем групп крови - систему Резус.