Задания:
1. Назвать методы определения относительной плотности мочи в обычных условиях и в приведенном случае.
2. Перечислить, когда вносятся поправки в значение относительной плотности мочи.
3.Назвать правила обработки урометров.
4. Провести исследование кала на скрытую кровь.
№10.
1. Наливают в мерный цилиндр 50 мл мочи, не допуская образования пены, и в нее опускают урометр, следя, чтобы он не опустился на дно и не прилипал к стенкам; снимают показания со шкалы урометра по нижнему мениску. Если мочи мало, то ее разводят в 2-3 раза дистиллированной водой, а потом полученную цифру относительной плотности умножают на степень разведения. Закончив определение относительной плотности, урометр опускают в стаканчик с дезинфицирующим раствором, дно которого выложено ватой или бинтом. Вне работы урометры хранятся в специальных картонных футлярах цилиндрической формы.
2. Урометры откалиброваны для температуры окружающей среды равной 15°С. При повышении температуры на каждые 3°С прибавляют 0,001, а при понижении – вычитают 0,001
.(плотность воды при понижении температуры увеличивается)
Если в моче имеется белок в количестве, превышающем 6-7 г/л, то вносят поправку: вычитают из относительной плотности мочи 0,00026 на каждый 1 г/л белка.
При наличии глюкозы – вычитают 0,004 на каждый 1% глюкозы.
3.Алгоритм № 5.
4.Урометры по окончанию работы погружают в емкость (стакан) с дезраствором на 1 час. Дно емкости должно быть выложено ветошью. Затем урометр промывают проточной водой и вытирают насухо. Вне работы урометры хранятся в специальных картонных футлярах
Алгоритм № 5. Исследование кала на скрытую кровь.
Бензидиновая проба (метод Грегерсена):
Оснащение: дезраствор, одноразовые перчатки, бланк анализа кала, пробирки, стеклянные палочки, исследуемый материал
Реактивы: бензидин основной, 50% уксусная кислота, 3% перекись водорода.
Приготовление рабочего раствора: в 5 мл СН3СООН всыпают небольшое количество (на кончике скальпеля) бензидина и растворяют (реактив Грегерсена).
Алгоритм действий:
1 На предметное стекло наносят большую каплю каловой эмульсии.
2. Добавляют 2-3 капли реактива Грегерсена.
3. Несколько капель 3% перекиси водорода.
4. Смешивают.
5. Положительная проба: появляется зеленого или сине-зеленого окрашивание сразу или в течение 2-х минут
6. Отрицательная проба: окрашивание не появилось или появилось позже двух минут
Гемоглобин отнимает водород от некоторых органических соединений (бензидина, амидопирина, гваяковой смолы, ортотолуидина и др.) и передает его перекиси водорода, при этом образуются красящие соединения.
-------------------------------------------------------------------------------------------------------
№ 11.
Ситуационная задача.
При проведении общего анализа мочи проба на белок оказалась положительной.
Задания:
1.Назвать методы определения белка в моче, принцип определения белка в моче.
2. Привести классификацию протеинурий.
3. Перечислить правила санэпидрежима при проведении лабораторных общеклинических исследований.
4. Подготовить мочу для исследования осадка по Нечипоренко.
№11.
1. Белок в моче определяется качественным и количественным методами. Для определения белка моча должна быть прозрачной, слабо кислой реакции. Качественно определяют белок в моче при помощи 20% сульфосалициловой кислоты, с помощью диагностических тест-полосок.
Количественно белок определяют с 3% сульфосалициловой кислотой, с пирогаллоловым красным, на мочевом анализаторе. В принципе определения белка лежит способность белка коагулироваться под воздействием кислоты.
Метод Брандберга-Робертса-Стольникова в модификации Эрлиха и Альтгаузена:
При наслаивании мочи, содержащей белок, на раствор азотной кислоты (50%) или реактив Ларионовой, на границе двух сред образуется белое кольцо, причем, если белое нитевидное кольцо появляется на третьей минуте, то содержание белка равно 0,033 г/л. Появление кольца ранее 3 мин свидетельствует о большем содержании белка в моче.
Степень разведения мочи определяется в зависимости от вида кольца, т.е. его ширины, компактности и времени появления. Если кольцо имеет нитевидную форму, то мочу следует развести в два раза, при широкой форме кольца мочу разводят в четыре раза, при компактной форме – в восемь раз. Количество белка вычисляется путем умножения 0,033 г/л на степень разведения.
2. За сутки через почечные клубочки фильтруется 30-50 г. белка. В конечную мочу попадает незначительное количество, которое не выявляется обычными методами. Принято считать, что в моче человека белка не содержится. Появление его в моче называется - протеинурий. Протеинурии возникают при фильтрации белка из крови в почке или присоединение белка к моче в мочевыводящих путях. В зависимости от причины различают ренальную (почечную) и экскроренальную (внепочечную) протеинурию.
Проницаемость почечного фильтра увеличивается при гломерулонефритах, инфекционных и токсических поражениях паранхимы почек и при других патологических состояниях - недостаточность кровоснабжения почек (гипертоксическая болезнь), застойной гиперемии почек (декомпенсация сердечной деятельности). Канальцевая протеинурия возникает при снижении реабсорбции белка в почечных канальцах. Нарушение реабсорбции, чаще всего связанное с повреждением эпителия канальцев (амилоидоз). Ренальные функциональные протеинурии. Являются временными и могут встречаться при некоторых физиологических состояниях: усиленной мышечной работе, переохлаждении, у новорожденных в первые дни жизни.
Экстраренальные протеинурии возникают при поражении мочевыводящих путей и половых органов, откуда в мочу попадает воспалительная жидкость, и наблюдается при циститах, уретритах, кольпитах и др.
Образование первичной мочи. В связи с тем, что в капиллярах клубочков почечного тельца давление крови велико (примерно 70 мм рт. ст.), сквозь однослойные клетки этих капилляров происходит фильтрация составных частей крови Они проникают в щелевидную полость, находящуюся между обоими слоями капсулы. Так образуется первичная моча. Как показали исследования, ее состав очень близок к составу кровяной плазмы. В первичной моче содержится примерно 0,1% глюкозы, 0,3% ионов натрия, 0,37% ионов хлора, 0,02% ионов калия, 0,03% мочевины. Все эти цифры соответствуют содержанию тех же веществ в кровяной плазме. Однако не все вещества, входящие в состав плазмы крови, способны проникать сквозь стенки капилляров в клубочки капсулы. Так, белков, жиров и гликогена в плазме крови 7—9%, а в первичной моче их совсем нет. Это связано с тем, что молекулы перечисленных веществ крупны и не могут проникать через стенку капилляров и капсулы.
В течение суток в почках образуется 150—170 л первичной мочи. Такое большое количество мочи может вырабатываться благодаря тому, что через почки протекает 1700 л крови в сутки. Следовательно, из каждых 6—10 л крови, которая проходит через клубочки, образуется примерно 1 л первичной мочи. Образование первичной мочи — это первый этап мочеобразования.
Механизмы канальцевой реабсорбции. Обратное всасывание различных веществ в канальцах обеспечивается активным и пассивным транспортом. Если вещество реабсорбируется против электрохимического и концентрационного градиентов, процесс называется активным транспортом. Различают два вида активного транспорта — первично-активный и вторично-активный.Первично-активным транспорт называется в том случае, когда происходит перенос вещества против электрохимического градиента за счет энергии клеточного метаболизма. Примером служит транспорт ионовNa+, который происходит при участии ферментаNa+, К+-АТФазы, использующей энергиюАТФ. Вторично-активным называется перенос вещества против концентрационного градиента, но без затраты энергии клетки непосредственно на этот процесс; так реабсорбируются глюкоза, аминокислоты. Из просвета канальца эти органические вещества поступают в клетки проксимального канальца с помощью специального переносчика, который обязательно должен присоединить ионNa+. Этот комплекс (переносчик + органическое вещество +Na+) способствует перемещению вещества через мембрану щеточной каемки и его поступлению внутрь клетки. Движущей силой переноса этих веществ через апикальную плазматическую мембрану служит меньшая по сравнению с просветом канальца концентрация натрия в цитоплазме клетки. Градиент концентрации натрия обусловлен непрестанным активным выведением натрия из клетки во внеклеточную жидкость с помощьюNa+, К+-АТФазы, локализованной в латеральных и базальной мембранах клетки.
Реабсорбция воды, хлора и некоторых других ионов, мочевины осуществляется с помощью пассивного транспорта — по электрохимическому, концентрационному или осмотическому градиенту. Примером пассивного транспорта является реабсорбция в дистальном извитом канальце хлора по электрохимическому градиенту, создаваемому активным транспортом натрия. По осмотическому градиенту транспортируется вода, причем скорость ее всасывания зависит от осмотической проницаемости стенки канальца и разности концентрации осмотически активных веществ по обеим сторонам его стенки. В содержимом проксимального канальца вследствие всасывания воды и растворенных в ней веществ растет концентрация мочевины, небольшое количество которой по концентрационному градиенту реабсорбируется в кровь.
3.Алгоритм № 8.
4.Работать необходимо в средствах индивидуальной защиты (халат, шапочка, перчатки, защитная маска и очки), на специальных подносах или поверхностях. Весь использованный отработанный материал подлежат дезинфекции и дальнейшей утилизации. Использованный инструментарий подлежит дезинфекции, предстерилизационной очистке и, если необходимо, стерилизации. Дезинфекцию посуды осуществляют погружением в 3% раствор хлорамина, осветленной хлорной извести в течении 30 минут или 1% раствора хлорамина и хлорной извести в течение 60 минут. Лабораторную посуду кипятят в р-ре моющих средств в течение 15 минут, промывают, ополаскивают, высушивают. Рабочие поверхности после окончания работу протираются ветошью смоченной дезраствором.
Алгоритм № 8. Проба по Нечипоренко
Оснащение: дезраствор, одноразовые перчатки, бланки анализа мочи, пипетки, камеры Горяева, стеклянные палочки, исследуемый материал, центрифуга
Реактивы: спирт 70%
Алгоритм действий:
Исследуемый материал тщательно перемешать;
10 мл перенести в центрифужную пробирку;
Центрифугировать 10 мин при 1500 об/мин;
Во время центрифугирования подготовить камеру Горяева:
Протереть рабочие поверхности спиртом камеры и покровного стекла, высушить;
Притереть покровное стекло к камере до появления радужных колец с обеих сторон;
Отобрать 9 мл надосадочной жидкости, оставив 1 мл с осадком;
Осадок тщательно перемешать стеклянной палочкой;
Заполняют камеру, поднося стеклянную палочку с каплей жидкости на ней к краю покровного стекла;
Подсчет в камере начинают через 1-2 минуты после ее заполнения;
При малом увеличении микроскопа (х8, х10) находят верхний левый угол сетки Горяева;
Затем объектив микроскопа переводят на увеличение 40 и подсчитывают форменные элементы (эритроциты, лейкоциты) и цилиндры в 100 больших нерасчерченных квадратах;
Проводят математический расчет: N = Х х 250, где Х – число подсчитанных клеток в 100 больших нерасчерченных квадратах (отдельно по лейкоцитам, эритроцитам и цилиндрам); N – число клеток в 1 мл мочи
-----------------------------------------------------------------------------------------------------
№ 12.
Ситуационная задача.
При исследовании мочи на общий анализ качественная проба на глюкозу оказалась положительной. Как выяснилось, пациент собрал мочу в банку из-под варенья, плохо отмыв ее.