«Проведение биохимических исследований в кдл» Методическое пособие для самоподготовки студентов. / Башарина о.Б. - сПб гбпоу «мк № 3». – 2015 г.

Часть 1. Материал для биохимических исследований

В биохимической лаборатории проводятся исследования: 1) крови (цельная кровь, плазма, сыворотка); 2) мочи; 3) кала; 4) цереброспинальной жидкости (спинномозговая жидкость, ликвор); 5) пота; 6) пищеварительных соков; 7) патологических жидкостей, (плевральная, асцитическая, перикардиальная, внутрисуставная) и др.

1. Кровь.

Кровь - жидкая ткань организма, осуществляющая транспорт кислорода и различных питательных веществ к органам и тканям, а так же обратный ток продуктов обмена веществ от тканей. На долю жидкой части крови (плазмы) приходится около 55% от общего объема крови. Эритроциты составляют основную массу клеток крови – 44% от общего объема, а другие клетки (лейкоциты и тромбоциты) – около 1%.

Для получения правильных результатов биохимического анализа необходимо соблюдать стандартные условия преаналитического (предлабораторного) этапа, который включает: подготовку пациента к исследованиям, правильное взятие пробы биологического материала, соблюдение правил его хранения и транспортировки в лабораторию.

• Подготовка пациента. Лабораторные исследования, как правило, проводятся натощак, утром спустя 8 ч после последнего приема пищи; в бланке направления (запросе) на лаб. исследование должно быть указано: 1) Ф.И.О., дата рождения и пол пациента; 2) адрес пациента, больницы, номер отделения, палаты, история болезни; 3) клинический диагноз, проводимое лечение (медикаменты); 4) вид исследуемого материала; 5) назначенные требуемые показатели; 6) дата и время взятия пробы; 7) Ф.И.О. врача, направившего пациента на исследование; 8) подпись врача.

• Правила взятия биологического материала. Существует два основных способа взятия крови: взятие капиллярной крови из пальца (или, реже, из мочки уха) и венозной крови. Биохимические исследования, в зависимости от требований методики определяемого показателя, могут проводиться в цельной крови, в плазме или сыворотке крови. Кровь из крупных вен (чаще из локтевой) берется в сухую стеклянную или пластиковую пробирку. При взятии крови необходимо избегать гемолиза, к чему могут привести узкий диаметр иглы, длительный процесс забора крови, интенсивное давление на поршень шприца при выливании крови в пробирку и др. Если пациенту проводится внутривенная терапия, то кровь для анализа берут дальше от места инфузии (например, из вены другой руки). Нельзя брать кровь во время или непосредственно после внутривенных капельных вливаний. Следует исключить венозный застой (стаз в вене должен быть кратковременным).

Для получения сыворотки крови в пробирку берут цельную кровь без антикоагулянта. В течение 5-10 минут (при комнатной температуре или при 37^оС) такая кровь свертывается, т.е. из нее выпадает сгусток фибрина, окрашенный в красный цвет благодаря наличию в нем эритроцитов. Над фибриновым сгустком собирается сыворотка, которая в норме обычно светло-соломенного цвета. Для более быстрого получения сыворотки пробирку с кровью обычно центрифугируют в течение 10-15 мин при скорости 1500 об/мин, а затем отделяют (отбирают с помощью пипетки) сыворотку от сгустка. Сыворотка крови – это плазма, лишенная белка фибриногена, который в процессе свертывания крови превращается в сгусток (фибрин) и выпадает в осадок.

Для получения плазмы крови необходимо предотвратить процесс свертывания крови, для чего предварительно в пробирку вносят антикоагулянт (раствор ЭДТА, гепарина, цитрата натрия; количество и вид антикоагулянта зависит от цели исследования) обычно в соотношении 1:9. После центрифугирования в течение 7-10 мин при 1500 об/мин отделяют плазму от клеточных элементов крови.

Плазму от эритроцитов, а сыворотку от сгустка следует отделять не позже, чем через 1 ч после взятия крови, иначе результаты исследования будут искажены за счет выхода веществ из эритроцитов.

• Правила хранения и транспортировки. Все пробы должны быть строго промаркированы соответственно направлению на исследование и незамедлительно отправлены в лабораторию в специальных контейнерах для транспортировки биологического материала. Если выполнение анализа задерживается, либо пробы отправляются в отдаленную лабораторию, то сыворотку или плазму хранят в холодильном контейнере, холодильнике или замораживают при -20^оС. Замороженные пробы могут храниться в течение 3 мес.

• Биологический материал необходимо рассматривать как потенциальный источник инфекции, особая осторожность требуется при работе с пробами «повышенного риска», полученными от пациентов с гепатитом В, С или носителей вируса иммунодефицита человека (ВИЧ).

2. Моча.

• Правила взятия биологического материала. Сбор разовой порции мочи для исследования необходимо проводить в чистую сухую посуду, после тщательного туалета промежности и наружных половых органов. Первые несколько миллилитров мочи сливают в унитаз для удаления десквамированных клеток из уретры. Не следует проводить анализ мочи во время менструации. Исследованию подлежит первая утренняя порция мочи, которая исключает влияние стресса, питания, раздражающих факторов. При сборе суточной мочи следует рекомендовать следующие условия: в день сбора мочи утреннюю порцию мочи отбрасывают, а последующие порции собирают в чистую посуду и хранят в холодильнике, к собранной моче добавляют утреннюю порцию следующего дня и тщательно перемешивают.

• Правила хранения и транспортировки. При длительном стоянии мочи происходит изменение ее физических свойств и разрушение клеточных элементов, размножение бактерий. Для предотвращения этих процессов ее лучше хранить на холоде при температуре +4^оС, не допуская замерзания, а также необходимо применять консерванты: 1) жидкость Мюллера – 10 г сульфата натрия, 25 г бихромата калия на 100 мл воды, жидкость добавляется из расчета 5 мл консерванта на 100 мл мочи; 2) хлороформную воду (5-7,5 мл хлороформа на 1 л воды) из расчета 20-30 мл на 1 л мочи; 3) борную кислоту 1,8 г на 100 мл мочи; 4) тимол 1 г (несколько кристаллов) на 1 л мочи; 5) толуол, ксилол, которые наливают на дно сосуда; по мере заполнения сосуда мочой консервант располагается на поверхности жидкости. Исследования мочи проводят не позднее 1-1,5 ч после ее выделения.

• Подготовительная работа. Мутную мочу центрифугируют или фильтруют, надосадочную жидкость используют для определения: белка, глюкозы, кетоновых тел, билирубина и др. При необходимости разводят водой или физиологическим раствором, результат умножают на разведение. Осадок мочи подвергают микроскопическому исследованию.