Протокол практического занятия Классификация питательных сред (с примерами)

Питательные среды	Жидкие	Плотные
1. Основные	Мясо-пептонный бульон	Мясо-пептонный агар
2. Специальные
а) Сложные	Сахарный МПБ Сыворочный МПБ Асцитический МПБ Яичные среды для туберкулёзных бактерий	Сахарный МПА Кровяной МПА
б) Элективые (избиратель- ные), преимущественно растёт определённый вид, другие или не растут или растут плохо	1% щелочная пептонная вода 10% желчный бульон	Свёрнутая сыворотка (для дифтерийной палочки)
в) Среды обогащения (выделяемый вид микроба растёт быстрее и интенсивнее других, рост которых подавляется ингибиторами)	Среда Мюллера Селенитовая среда (для сальмонелл)
3. Дифференциально-диагностические (для определения биохимических свойств)	Среды Гисса («пёстрый ряд» для определения сахаролитических свойств)	Среда Эндо, Левина, Плоскирева, Расселя, Клиглера, Олькеницкого и другие
4. Синтетическая		Среда Сотона

Методы посева с механическим разобщением бактерий

• Посев шпателем по Дригальскому

• Посев петлёй

• Посев петлёй на сектора без обжига

• Посев петлёй на сектора с обжигом: сектор А – 40 штрихов, другие – по 4 штриха

• Метод серийных разведений по Коху

1мл исслед.м-ла 1мл 1мл 1мл

. . .

Высев с каждого разведения

10^-1 10^-2 10^-3 10^-4 10^-5

среда МПА

Методы посева с разобщением на основании биологических свойств бактерий

• Посев площадкой, основанный на подвижности некоторых бактерий (по Шукевичу)

• Использование элективных сред и сред обогащения.

• Использование лабораторных животных и других живых объектов.

Оснащение занятия.

Стерильные плотные питательные среды в чашках Петри.

Стерильные жидкие питательные среды в пробирках.

Культура бактерий для посева.

Оборудование для создания анаэробных условий.

Спиртовки, спички, бактериальные петли, шпатели.

Дезинфицирующий раствор, карандаши по стеклу.

Самостоятельная работа студентов.

Задача №1: Провести посев культуры бактерий на плотные питательные среды.

Задача №2: Провести посев культуры бактерий на жидкие питательные среды.

Протокол практического занятия (продолжение). Выделение и идентификация чистых культур бактерий.

I Этап (нативный материал): посев исследуемого материала на чашки Петри с плотной питательной средой методами механического разобщения.

Инкубация при 37^оС в течение 24 часов.

Примечание: в том случае, если в исследуемом материале содержится незначительное количество возбудителя, то его предварительно накапливают путём посева материала в жидкую питательную среду, а затем после инкубации при 37^оС производят пересев на плотную питательную среду.

II Этап (изолированные колонии): идентификация выделенной чистой культуры по культуральным, морфологическим и тинкториальным свойствам:

а) макро- и микроскопическое исследование колоний производится так же с целью проверки чистоты культуры.

Схема описания колоний: учитывают размеры, форму, цвет, характер поверхности, характер края, консистенцию и структуру колоний.

б) пересев оставшейся части колонии на скошенный агар (при необходимости для накопления чистой культуры).

Инкубация при 37^оС в течение 24 часов.

III Этап (чистая культура)

• Идентификация выделенной чистой культуры, выращенной на скошенном агаре:

а) по культуральным свойствам (характер однородности роста).

б) приготовление мазка, окраска, микроскопия (для проверки чистоты выделенной культуры).

в) по биохимической активности – посев выделенной чистой культуры на среды Гисса, желатин, МПБ (для выявления Н2S и индола) и другие тесты.

Инкубация при 37^оС в течение 24 часов.

Примечания: помимо перечисленных свойств, для определения вида возбудителя исследуют:

г) антигенные свойства;

д) токсигенные свойства.

• Определение чувствительности выделенной культуры к антибиотикам и др.

химиопрепаратам с помощью бумажных дисков или др. методами. Инкубация при 37^оС в течение 24 часов.

• Внутривидовая идентификация (эпидемиологическое маркирование) – с целью выявления источника заболевания определение биоваров, фаговаров, сероваров и т.д.

IV Этап (учет результатов)

Заключение: на основании изучения морфологических, тинкториальных, культуральных, ферментативных свойств выделенной исследуемой чистой культуры возбудителя, можно сделать предварительное заключение о его принадлежности к ….

Выделенная культура чувствительна к антибиотикам….

Оснащение занятия.

Дифференциально-диагностические питательные среды стерильные и с посевом исследуемых культур.

Культура бактерий для посева.

Среда Эндо с посевами кишечной палочки.

Спиртовки, спички, бактериальные петли.

Дезинфицирующий раствор, карандаши по стеклу.

Самостоятельная работа студентов.

Задача №1: Провести посев культуры бактерий на среду Клиглера.

Задача №2: Изучить характер роста микроорганизмов на среде Клиглера.

Задача №3: Изучить характер роста кишечной палочки на среде Эндо.

Задача №4: Изучить характер роста стафилококка на средах с сахарами.