11. Бактериальные биопленки. Строение. “Quorum sensing”-механизмы.

В настоящее время нормальную микрофлору рассматривают как самостоятельный экстракорпоральный орган. Он имеет характерное анатомическое строение (биопленка) и ему присущи определенные функции. Микроорганизмы, составляющие нормальную микрофлору, образуют четкую морфологическую структуру - биопленку, толщина которой колеблется от 0,1 до 0,5 мм. Биопленка представляет собой полисахаридный каркас, состоящий из микробных полисахаридов и муцина, который продуцирует клетки макроорганизма. В каркасе иммобилизованы микроколонии бактерий - представителей нормальной микрофлоры, которые могут располагаться в несколько слоев. Так, в биопленке покрывающей кожу, микроколонии располагаются в 1-2 слоя; а в биопленке толстого кишечника в 500-1000 слоев. Устойчивость бактерий к воздействию неблагоприятных факторов внутри биопленки в десятки и сотни раз выше по сравнению с неиммобилизованными клетками. В состав нормальной микрофлоры входят как анаэробные, так и аэробные бактерии. Соотношение анаэробов и аэробов в большинстве биоценозов составляет 10:1.

Понятие “Quorumsensing”.

Понятие quorumsensing - «чувство кворума» - быстрый способ общения микроорганизмов друг с другом посредством сигнальных молекул.

40. Лимфоциты. Поверхностные молекулы лимфоцитов. Функции лимфоцитов в иммунном ответе.

Лимфоциты — одни из основных клеток иммунной системы из группы лейкоцитов. Они отвечают за приобретённый иммунитет, так как могут распознавать возбудителей инфекции внутри или вне клеток, в тканях или в крови. Во время развития лимфоцитов на их поверхности появляются рецепторы для антигенов - чужеродных молекул. Рецепторы представляют из себя как бы «отпечаток» чужеродной молекулы. При этом одна клетка может содержать рецепторы только для одного вида антигенов. На этапе развития лимфоциты проходят отбор: остаются только значимые с точки зрения защиты организма, а также те, которые не несут угрозы собственным тканям организма. Параллельно с этим процессом лимфоциты разделяются на группы, способные выполнять ту или иную функцию защиты. Существуют разные виды лимфоцитов, например: B-лимфоциты, T-лимфоциты и большой гранулярный лимфоцит (БГЛ) . B-лимфоциты противодействуют внеклеточным возбудителям, образуя специфические молекулы — антитела, которые способны связывать антигены. У T-лимоцитов множество задач. Одна из них — это регуляция с помощью специальных белков (цитокинов) активации B-лимфоцитов для образования антител; а также регуляция активации фагоцитов для более эффективного разрушения микроорганизмов. Эту задачу выполняет группа T-хэлперов. Ещё одна задача T-клеток - это разрушение инфицированных вирусами клеток организма. За это отвечают T-киллеры.

70. Стафилококковая инфекция. Характеристика возбудителей. Mrsa, mrse

Таксономия: относятся к отделу Firmicutes, семейству Мicrococcacae, роду Staphylococcus. К данному роду относятся 3 вида: S.aureus, S.epidermidis и S.saprophyticus. Морфологические свойства: Все виды стафилококков представляют собой округлые клетки. В мазке располагаются не-симметричными гроздьями. Клеточная стенка содержит большое количество пептидогликана, связанных с ним тейхоевых кислот, протеин А. Грамположительны. Спор не образуют, жгутиков не имеют. У некоторых штаммов можно обнаружить капсулу. Могут образовывать L-формы. Культуральные свойства: Стафилококки — факультативные анаэробы. Хорошо растут на простых средах. На плотных средах образуют гладкие, выпуклые колонии с различным пигментом, не имеющим таксономического значения. Могут расти на агаре с высоким содержанием NaCl. Обладают сахаролитичес- кими и протеолитическими ферментами. Стафилококки могут вырабатывать гемолизины, фибринолизин, фосфатазу, лактамазу, бактериоцины, энтеротоксины, коагулазу. Стафилококки пластичны, быстро приобретают устойчивость к антибактериальным препаратам. Существенную роль в этом играют плазмиды, передающиеся с помощью трансдуцирующих фагов от одной клетки к другой. R-плазмиды детерминируют устойчивость к одному или нескольким антибиотикам, за счет продукции в-лактамазы. Антигенная структура. Около 30 антигенов, представляющих собой белки, полисахариды и тейхоевые кислоты. В составе клеточной стенки стафилококка содержится протеин А, который может прочно связываться с Fc-фрагментом молекулы иммуноглобулина, при этом Fab-фрагмент остается свободным и может соединяться со специфическим антигеном. Чувствительность к бактериофагам (фаготип) обусловлена поверхностными рецепторами. Многие штаммы стафилококков явля-ются лизогенными(образование некоторых токсинов происходит с участием профага). Факторы патогенности: Условно – патогенные. Микрокапсула защищает от фагоцитоза, способствует адгезии микробов; компоненты клеточной стенки – стимулируют развитие воспалительных процессов. Ферменты агрессии: каталаза – защищает бактерии от действия фагоцитов, в-лактамаза – разрушает молекулы антибиотиков. Резистентность. Устойчивость в окружающей среде и чувствительность к дезинфектантам обычная. Патогенез. Источником инфекции стафилококков - человек и некоторые виды животных (больные или носители). Механизмы передачи — респираторный, контактно-бытовой, алиментарный. Иммунитет: Постинфекционный – клеточно-гуморальный, нестойкий, ненажряженный. Клиника. Около 120 клинических форм проявления, которые имеют местный, системный или генерализованный характер. К ним относятся гнойно-воспалительные болезни кожи и мягких тканей (фурункулы, абсцессы), поражения глаз, уха, носоглотки, урогенитального тракта, пищеварительной системы (интоксикации). Микробиологическая диагностика. Материал для исследования – гной, кровь, моча, мокрота, испражнения. Бактериоскопический метод: из исследуемого материала (кроме крови) готовят мазки, окрашивают по Граму. Наличие грам «+» гроздевидных кокков, располагающихся в виде скоплений. Бактериологический метод: Материал засевают петлей на чашки с кровяным и желточно-солевым агаром для получения изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37С в течении суток. На следующий день исследуют выросшие колонии на обеих средах. На кровяном агаре отмечают наличие или отсутствие гемолиза. На ЖСА S. aureus образует золотистые круглые выпуклые непрозрачные колонии. Вокруг колоний стафилококков, обладающих лецитиназной активностью, образуются зоны помутнения с перламутровым оттенком. Для окончательного установления вида стафилококка 2—3 колонии пересевают в пробирки со скошенным питательным агаром для получения чистых культур с последующим определением их дифференциальных признаков. S.aureus – «+»: образование плазмокоагулазы, летициназы. Ферментация:глк, миннита, образование а-токсина. Для установления источника госпитальной инфекции выделяют чистые культуры стафилококка от больных и бактерионо-сителей, после чего проводят их фаготипирование с помощью набора типовых стафилофагов. Фаги разводят до титра, указан-ного на этикетке. Каждую из исследуемых культур засевают на питательный агар в чашку Петри газоном, высушивают, а затем петлей каплю соответствующего фага наносят на квадраты (по числу фагов, входящих в набор), предварительно размеченные карандашом на дне чашки Петри. Посевы инкубируют при 37 °С. Результаты оценивают на следующий день по наличию лизиса культуры. Серологический метод: в случаях хронической инфекции, определяют титр анти-а-токсина в сыворотке крови больных. Определяют титр АТ к риботейхоевой кислоте( компонент клеточной стенки). Лечение и профилактика. Антибиотики широкого спектра действия (пенициллины, устойчивые к в-лактамазе). В случае тяжелых стафилококковых инфекций, не поддающихся лечению антибиотиками, может быть использована антитоксическая противостафилококковая плазма или иммуноглобулин, иммунизированный адсорбированным стафилококковым анатоксином. Выявление, лечение больных; проведение планового обследования медперсонала, вакцинация стафилококковым анатоксином. Стафилококковый анатоксин: получают из нативного анатоксина путем осаждения трихлоруксусной кислотой и адсорбцией на гидрате оксида алюминия. Стафилококковая вакцина: взвесь коагулазоположительных стафилококков, инактивированных нагреванием. Применяют для лечения длительно текущих заболеваний. Иммуноглобулин человеческий противостафилококковый: гамма-глобулиновая фракция сыворотки крови, содержит стафилококковый анатоксин. Готовят из человеч. крови, с высоким содержанием антител. Применяется для специфического лечения.

БИЛЕТ 11

12. Бактериологическое исследование. Основные биологические свойства бактерий, определяемые в ходе бактериологического исследования и методы их изучения.

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ - совокупность методов, применяемых для обнаружения и установления природы бактерий, выделенных от больных, бактерионосителей или из объектов окружающей среды.

1. Основные биологические свойства бактерий и методы их изучения: 1)морфологические св-ва (изучают с помощью микроскопа); 2)тинкториальные св-ва (изучают при окраске по Граму); 3)культуральные св-ва (макро- и микроскопически изучают свойства колоний, выращенных на плотной питательной среде и характер роста на жидкой питательной среде и на скошенном агаре, используемом ка среда накопления ); 4)сахаролитические свойства (изучают с помощью посевов в среды Гисса (полужидкие среды, содержащие один из углеводов и индикатор, реагирующий на продукты распада этого углевода, возникающие под сахаролитическим действием бактерий); протеолитические св-ва (изучают при посеве бактерий на желатин или лакмусовое молоко); пептолитические св-ва (изучают при посеве на мясо-пептонный бульон с помощью индикаторных полосок, вставленных под пробку пробирки, изменяющих цвет под действием летучих продуктов распада пептонов - индола, сероводорода, аммиака); Сахаролитические, протеолитические и пептолитические свойства - это биохимические или ферментативные свойства. 5)антигенные свойства (изучают в реакциях агглютинации или преципитации с помощью диагностических агглютинирующих или преципитирующих сывороток); 6)токсигенные свойства (изучают в реакции преципитации в геле с помощью антитоксических преципитирующих сывороток или с помощью биологических проб на лабораторных животных); наличие факторов вирулентности - с помощью специальных методик изучают наличие ферментов агрессии и защиты; 7)чувствительность к антибиотикам (методом индикаторных дисков или методом серийных разведений).

41. Понятие "лимфопоэз" и "иммунопоэз". Этапы развития Т-лимфоцитов. Строение их антигенраспознающих рецепторов.

К центральным органам иммунной системы относят:

• красный костный мозг;

• тимус (вилочковую железу);

• лимфоидный аппарат кишечника (у млекопитающих — функциональный аналог сумки (бурсы) Фабрициуса у птиц).

В этих органах происходит первичная дифференцировка иммунокомпетентных клеток — Т- и В-лимфоцитов (лимфопоэз).

В периферических органах иммунной системы под влиянием антигенов происходят пролиферация и вторичная дифференцировка лимфоцитов (иммунопоэз).

Основная задача T-лимфоцитов - распознавание чужеродных или изменённых собственных антигенов в составе комплекса с молекулами MHC. Если на поверхности своих клеток будут представлены чужеродные или изменённые свои молекулы, T-лимфоцит запускает их уничтожение.

• В отличие от B-лимфоцитов, T-лимфоциты не продуцируют растворимых форм антигенраспознающих молекул. Более того, большинство T-лимфоцитов не способны распознавать и связывать растворимые антигены.

• Для того чтобы T-лимфоцит «обратил на антиген своё внимание», другие клетки должны каким-то образом «пропустить» антиген через себя и выставить его на своей мембране в комплексе с MHC-I или MHC-II. Это и есть феномен презентации антигена T-лимфоциту. Распознавание такого комплекса T-лимфоцитом - двойное распознавание, или MHC-рестрикция T-лимфоцитов.

Антигенраспознающие рецепторы Т-лимфоцитов

На мембране Т-лимфоцитов имеются особые белковые молекулы, которые выполняют функцию распознавания и связывания антигенов – Т-клеточные рецепторы (ТКР). Они имеют один активный центр и отличаются по своему строению от молекул иммуноглобулинов. Молекула ТКР закреплена в клеточной мембране, состоит из двух цепей – альфа и бета, соединенных дисульфидной связью. Каждая цепь имеет по 2 домена – константный и вариабельный. Активный центр образуется вариабельными доменами альфа и бета – цепей. Гены ТКР построены аналогично генам тяжелых цепей иммуноглобулинов – состоят из фрагментов VDJC. Разнообразие специфичности активных центров ТКР также обеспечивается процессами рекомбинации вариабельных фрагментов генов альфа- и бета-цепей. Количество возможных вариантов конфигурации активных центров ТКР достигает 3х107. Эта цифра отражает количество клонов Т-лимфоцитов, способных распознавать3х107различных антигенных детерминант.