Практическое занятие №2

Тема: Строение и химический состав бактериальной клетки. L-формы бактерий, возбудителей заболеваний человека. Тинкториальные свойства бактерий, окраска по методу Грама и другие сложные методы окраски.

Цель: Изучить строение клеточной стенки микроорганизмов. Освоить сложные методы окраски для выявления отдельных органоидов бактериальной клетки.

Знать:

• Строение клеточной стенки бактерий. Химический состав и функциональное назначение.

• Особенности строения и химического состава клеточной стенки у грамположительных и грамотрицательных бактерий.

• L-формы бактерий. Особенности оболочки этих форм бактерий. Факторы, которые влияют на образование протопластов и сферопластов.

• Этапы окраски по Граму.

• Механизм дифференциальной окраски по Граму.

• Капсула и ее биологическая роль для бактериальной клетки. Химический состав капсулы.

• Внутриклеточные включения. Биологическая роль в жизнедеятельности бактерий. Методы выявления.

• Биологическое значение спор и условия их образования.

• Чем обусловлена термоустойчивость спор?

• Функция и строение жгутиков бактерий. Методы их выявления.

Уметь:

• Уметь проводить дифференциацию бактерий по тинкториальным свойствам.

• Владеть техникой контрастирования капсул у бактерий по Бурри-Гинсу.

• Овладеть техникой изготовления мазка из агаровых культур бактерий.

• Приготовить препарат и окрасить его с целью выявления спор в культуре микроорганизмов.

• Уметь окрасить препарат для дифференциальной окраски по Граму.

• Выявить наличие жгутиков в культуре с помощью метода Леффлера.

Контрольные вопросы:

• Какие компоненты составляют оболочку бактерий, какой из них определяет тинкториальные свойства бактерий?

• Каковы методики окраски микроорганизмов сложными методами окраски?

• В чем сущность окраски по Граму?

• Как контролируется правильность окраски по Граму?

• Кислотоустойчивые бактерии. Особенности химического состава клеточной стенки.

• Споры у бактерий. Их биологическое значение и условия образования.

• Методы выявления кислотоустойчивых бактерий и спор.

• Морфология микоплазм. Особенности ультраструктуры.

• Функция и строение жгутиков бактерий. Методы их выявления.

Краски, применяемые в микробиологической практике

Для окрашивания микроорганизмов используют анилиновые красители (основные, кислые и нейтральные). Микроорганизмы лучше окрашиваются основными красками. Для окраски препаратов готовят спиртовые, водно-спиртовые и водные растворы. В некоторых случаях добавляют в качестве протравы карболовую кислоту, щелочь и др. Наиболее часто употребляемыми красителями являются следующие:

синие - метиловый синий, водный синий, опаловый синий;

красные - фуксин основной, конго красный, сафранин, нейтральный красный, фуксин кислый;

фиолетовые - метиловый фиолетовый, кристаллический фиолетовый, генцианвиолет;

зеленые - малахитовый зеленый, бриллиантовый зеленый, светло-зеленый;

желто-коричневые - хризоилин, везувин.

Общая схема сложных (дифференциальных) методов окраски

- основной краситель

- дифференцирующее вещество

- дополнительный краситель.